大黄有效成分的提取.doc

实用中医方剂学综合设计试验大黄有效成分的提取纯化研究摘要：中药是一门科学，是科学就会不断发展和扬弃。从内经到神农本草，到张仲景的伤寒论等等，体现了中医的博大精深。中药是人类共同的财富，应该由全人类共享。大黄是一种重要的中药。它有泻热通肠，凉血解毒之功效。通过对中医方剂理论的学习，对大黄有了初步了解。在此，我们开展了对大黄有效成分提取和纯化研究活动。关键字：大黄、成分提取、纯化研究。ABSTRACT ：Chinese medicine is a science, science is evolving and will be abandoned. Nei Jing to Shen Nongs Herbal, Zhang to typhoid and so on, reflects the breadth and depth of Chinese medicine. Chinese medicine is the common wealth of mankind, it should be shared by all humanity. Rhubarb is an important traditional Chinese medicine. It has spilled heat-enterovirus, the effectiveness of cooling blood detoxification. Through the study of the theory of Chinese medicine prescriptions, with an initial understanding of the rhubarb. Here, we have embarked on the active ingredient extracted Rheum purification and research activities. Key words: rhubarb, component extraction and purification of research.一 引言（Introduction）大黄为棕褐色或黄褐色干燥粉末，味苦，有大黄特殊气味，易吸潮。溶于水和乙醇。苦，寒。归脾、胃、大肠、肝、心包经。呈类圆柱形、圆锥形、卵圆形或不规则块状，长317cm,直径310cm。除尽外皮者表面黄棕色至红棕色，有的可见类白色网状纹理及星点(异型维管束)散在，残留的外皮棕褐色，多具绳孔及粗皱纹。质坚实，有的中心稍松软，断面淡红棕色或黄棕色，显颗粒性；根茎髓部宽广，有星点环列或散在；根木部发达，具放射状纹理，成层环明显，无星点。气清香，味苦而微涩，嚼之粘牙，有砂粒感。主要功效有：泻热通肠，凉血解毒，逐瘀通经。用于实热便秘，积滞腹痛，泻痢不爽，湿热黄疸，血热吐衄，目赤，咽肿，肠痈腹痛，痈肿疔疮，瘀血经闭，跌打损伤，外治水火烫伤；上消化道出血。酒大黄善清上焦血分热毒。用于目赤咽肿，齿龈肿痛。熟大黄泻下力缓，泻火解毒。用于火毒疮疡。大黄炭凉血化瘀止血。用于血热有瘀出血者。所以了解大黄有效成分是十分有必要的。二 实验部分(Experimental section)2.1 实验材料(Materials)土大黄苷、蒸馏水、甲醇、乙醚、氯仿、无水硫酸钠、十八烷基硅烷键合硅胶等2.2 实验仪器和设备(Instruments or Apparatus)三口烧瓶、回流冷凝管、LC-10A高效液相色谱仪、分子筛、烧杯、玻璃棒、试管、量筒、胶头滴管、坩埚、坩埚钳、研钵、蒸发皿、药匙、滤纸、PH试纸、分析天平、称量瓶、电热炉2.3 实验目的（Experimental goal）了解中医药物有效成分提取的基本方法；掌握大黄有效成分，及其药理作用；熟悉有机物的提取、制备、提纯、分析等方法与技能。2.4实验原理（Experimental principle）土大黄苷经过甲醇浸泡后，大黄酚、大黄素等有机物会溶解于甲醇中。制成待测液。由于他们之间的相互作用不同。可以使用高效液相色谱法来进一步进行测量各种成分含量。使用高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质。2.5实验内容（Experimental content）.鉴别本品横切面：根木栓层及皮层大多已除去。韧皮部明显；薄壁组织发达。形成层成环。木质部射线较密，宽24列细胞，内含棕色物；导管非木化，常1至数个相聚，稀疏排列。薄壁细胞含草酸钙簇晶，并含多数淀粉粒。根茎髓部宽广，其中常见黏液腔，内有红棕色物；异型维管束散在，形成层成环，木质部位于形成层外方，粉末黄棕色。取粉末少量，进行微量升华，可见菱状针晶或羽状结晶。 取本品粉末0.1g，加甲醇20ml浸渍1小时，滤过，取滤液5ml,蒸干加水10ml使溶解；再加盐酸1ml,置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚分2次提取，每次20ml,合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.1g,同法制成对照药材溶液。再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶薄层板上，以石油醚（3060）-甲酸乙酯-甲酸(155:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。 供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。 .检查取土大黄苷粉末0.2g，加甲醇2ml,温浸10分钟，放冷；取上清液10l,点于滤纸上，以45乙醇展开，取出，晾干；放置10分钟，置紫外光灯(365nm)下检视，不得显持久的亮紫色荧光。 干燥失重 取本品，在 105干燥6小时，减失重量不得过15.0 注意：总灰分 不得过10.0 ，酸不溶性灰分 不得过0.8 .含量测定对照品溶液的制备 ：精密称取大黄素、大黄酚对照品各5mg，分别置50ml量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取大黄素溶液1ml、大黄酚溶液2ml，分别置25m l量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(大黄素每1ml中含4g、大黄酚每1ml中含8g)。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约0.1g同时另取本品粉末测定水分，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤5ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇；加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超声处理5分钟，再加氯仿10ml，加热回流1小时，冷却，移置分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取2次，每次约8ml，合并氯仿液，以无水硫酸钠脱水， 氯仿液移至100ml锥形瓶中，挥去氯仿，残渣精密加甲醇10ml，称定重量，置水浴中微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各5l，注入液相色谱仪，测定即得。 .炮制大黄 除去杂质，洗净，润透，切厚片或块，晾干。 酒大黄 取净大黄片，照酒炙法炒干。 熟大黄 取净大黄块，照酒炖或酒蒸法炖或蒸至内外均呈黑色。 大黄炭 取净大黄片，照炒炭法炒至表面焦黑色、内部焦色。三 结果与讨论（Results and discussion）1.结果：本品按干燥品计算，含大黄素(C15H10O5)和大黄酚(C15H10O4)的总量不得少于0.05。2.讨论：样品在经过甲醇溶解后，为什么要加入盐酸？答：样品经过甲醇溶解后，大部分已盐的形式存在。加入盐酸后可以是酚的钠盐生成大黄酚。试验中为什么另取大黄素和大黄酚进行测量？答：虽然样品中含有大黄素和大黄酚，但是为了试验精确，本实验做了一个对比试验。这样可以使试验更加准确、精密。高效液相色谱法测量大黄酚和大黄素含量的原理是什么？答：由于大黄酚和大黄素与固定相的相互作用不同，他们顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，不同的物质有不同的峰值。最后通过分析比对这些信号来判断两种物质的含量。四 结论(Conclusions)通过对大黄的有效成分的提取纯化研究，了解了大黄的物理性质化学性质有了进一步的了解。特别是大黄的药理有了新的认识。比如泻热通肠，凉血解毒，逐瘀通经。并且对中医学有了新的认识。中医不仅仅是一门科学，可以推进社会进步和人类发展，它还是一门哲学。他融合了中国几千年文化，宗教，以及生活经验。把哲学和科学结合的如此巧妙的就是中医，中药按理来说是自然科学，但是本来是自然科学的中草药在哲学的指导下