Cyclin A与P21蛋白在子宫腺肌病中的表达及临床意义.doc

Cyclin A与P21蛋白在子宫腺肌病中的表达及临床意义【摘要】目的探讨Cyclin A与P21蛋白在子宫腺肌病中的表达及意义。方法采用免疫组织化学的方法(SP)检测Cyclin A与P21蛋白在子宫腺肌病(40例)及正常子宫内膜组织(30例)中的表达。结果Cyclin A在子宫腺肌病中的表达明显高于正常子宫内膜组织，P21蛋白在子宫腺肌病中的表达明显低于正常子宫内膜组织，差异均有统计学意义(P0.05)。在子宫腺肌病中，Cyclin A高表达及P21蛋白低表达与异位内膜浸润肌层深度及腺肌瘤的大小有关，而与痛经、月经过多无明显关系。结论Cyclin A及P21蛋白与子宫腺肌病的发生、发展关系密切。 【关键词】 子宫腺肌病;Cyclin A;P21蛋白;免疫组织化学Study on expression of Cyclin A and P21 in patients with metrial gland diseases and their clinical significance ZHANG AiQun,FU Hongxia,SUN Fuguo,et al.Department of Obstetrics and Gynecology,No.260 Hospital Affiliated to Bethune Military Medical Collage,Hebei,Shijiazhuang 050041 【Abstract】 Objective To study the expression of Cyclin A and P21 in patients with metrial gland diseases and their clinical significance. Methods Immunohistochemical SP method was used to detect the expression of Cyclin A and P21 in 40 patients with al gland diseases and in 36 healthy subjects. Results Cyclin A expression levels in patients with metrial gland diseases were significantly higher than those of normal endometrial tissue,however, the expression levels of P21 in patients with metrial gland diseases were significantly lower than those of normalendometrial tissue(P0.05).The high expression of Cyclin A and the low expression of P21 in metrial gland diseases were related with infiltration depth of ectopic endometriosis and the size of adenomyoma, but were not related with dysmenorrhea and menorrhagia.Conclusion As cell cycle regulatory factors,Cyclin A and P21 might be involved in the pathogenesis and development of metrial gland diseases. 【Key words】 metrial gland diseases;Cyclin A;P21 protein;immunohistochemistry 子宫腺肌病是指在子宫肌层中存在子宫内膜组织，并伴有不同程度的肌层平滑肌细胞肥大和增生1。临床表现主要为继发性痛经、月经过多、不孕等症状。近年来，子宫腺肌病的发病率呈上升趋势，已成为妇科常见病并引起学者的关注，但目前子宫腺肌病的发病机制仍不十分清楚。本研究通过检测正常子宫内膜组织与子宫腺肌病患病织中Cyclin A与P21蛋白的表达，探讨其在子宫腺肌病发生、发展中的作用。1 资料与方法1.1 一般资料 本研究所用标本来源于解放军第260医院妇产科2005年6月至2006年6月住院行腹腔镜手术或开腹手术治疗的子宫腺肌病患者共40例(子宫腺肌病组)，年龄2847岁，平均42.6岁。经腹腔镜手术27例，开腹手术13例 ；其中合并有腺肌瘤32例。对照组30例主要为其他妇科疾病行手术者。全部病例均经组织病理学证实，术前3个月未进行过激素治疗。1.2 主要试剂 链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)试剂盒、Cyclin A和P21蛋白鼠抗人单克隆抗体均购自北京中山生物技术公司。1.3 实验方法 取子宫腺肌病异位于肌层的内膜组织，对照组取正常子宫内膜组织，10%甲醛固定，石蜡包埋，组织切片厚4 m,免疫组化步骤按试剂盒说明操作。1.4 阳性结果判定标准 Cyclin A、P21蛋白阳性产物均主要定位于细胞核上根据着色强度及范围分为:阴性(-)，无阳性染色细胞或细胞着色率5%； 弱阳性()，阳性细胞数5%25%；阳性()，阳性细胞数25%50%；强阳性(+)，阳性细胞数50%。由2名有经验的病理科医师双盲读片。1.5 统计学分析 所有数据经Excel整理，采用SPSS 11.5软件进行统计分析，2组之间阳性率比较用2检验及确切概率，P0.05为差异有统计学意义。2 结果2.1 2组中Cyclin A的表达 见表1。2.2 2组中P21蛋白阳性表达 见表2。2.3 子宫腺肌病组中Cyclin A、P21蛋白阳性表达与临床症状的关系 见表3。表1 2组Cyclin A阳性表达的比较例略表2 2组P21蛋白阳性表达的比较例略表3 子宫腺肌病组中Cyclin A、P21蛋白阳性表达与临床症状的关系例略3 讨论3.1 Cyclin A在不同子宫内膜组织中的表达及意义 Cyclin A定位在染色体4q27上，分子质量为60 KDa,是细胞周期G2/M期限制点重要的正性调节因子。Cyclin A产生于细胞周期G1/S期转换阶段，其含量逐渐增高直至分裂前期，在G1/S及G2/M转换中均发挥重要作用2。Cyclin A其作用发挥主要通过Cyclin A与CDK2的结合，与DNA复制完成有关3。采用流式细胞仪分析显示Cyclin A在S期的表达最高4。研究发现Cyclin A发生突变的果蝇细胞能顺利通过S期，但却被阻止于G2期而无法进入M期，提示其在启动正常细胞的有丝分裂中发挥了关键性作用5。国内外文献报道，在多种复杂的周期素中，Cyclin A的过度表达可以引起细胞增殖，而且可以导致肿瘤发生和发展。段光明等6报告，Cyclin A在脑胶质瘤中的表达率为62%，并随脑胶质瘤病理分级的升高而增高。Paterlini等7发现在血液系统肿瘤Cyclin A mRNA和蛋白的表达水平与细胞处于S期及S2M期的比例呈相关，认为它可作为肿瘤增殖的标志。本研究结果显示，Cyclin A在子宫腺肌病的阳性表达率为72.50%(29/40),正常子宫内膜的阳性表达率为40.00%(12/30)，两者相比差异有统计学意义(P0.05),提示Cyclin A表达或过高表达可促使异位内膜的生长，可能使异位于子宫肌层的细胞具有更强的分裂增殖及浸润的倾向，但这种增殖可能仅限于分子生物学行为上的改变，与恶性肿瘤细胞和无限度增殖是有区别的。目前研究显示子宫腺肌病的发病与多种细胞因子异常有关，何种因素占主导地位，需进一步研究证实。3.2 P21蛋白在不同子宫内膜组织中的表达及意义 P21蛋白是一种广谱CDK抑制剂，定位于6号染色体短臂上，DNA长度为85 kb，在正常细胞组织有表达。P21蛋白在G1期对细胞周期起负调控作用，它几乎是每一个CyclinCDK复合物的结合抑制因子。在处于静止期的细胞中P21蛋白水平增高，它的表达抑制哺乳类细胞增殖3。P21蛋白作用的发挥是通过与CyclinCDK结合，从而使CyclinCDK复合物的激酶活性丧失8。李道成等9报道采用免疫组化方法检测108例上皮性卵巢癌P21蛋白的表达，发现P21蛋白的高表达低于正常卵巢组和良性卵巢肿瘤组，表明P21蛋白在上皮性卵巢癌中的表达有下调，同时还显示P21蛋白表达水平与手术分期有关，随手术分期的增高而呈下降趋势。文献报告在乳腺癌中高分化组的P21蛋白的表达水平明显高于中、低分化组10。本研究显示，在子宫腺肌病中表达率为37.50%，在正常子宫内膜中表达率为73.33%，正常子宫内膜组织高表达率明显高于子宫腺肌病，其差异有统计学意义(P0.05)，说明P21蛋白的表达降低或缺失，不能够抑制CyclinCDK复合物的激酶活性，从而导致细胞增殖，故可能在子宫腺肌病发生发展过程中起重要作用。3.3 CyclinA与P21蛋白在子宫腺肌病中的表达与临床状症的关系 Cyclin A与P21蛋白是2个重要的细胞周期调节因子，具有相互拮抗的作用。Cyclin A与细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)形成复合物促进细胞周期进程，P21蛋白作为细胞周期负调控因子，可抑制Cyclin ACDK2等激酶复合物活性，而Cyclin ACDK2是细胞通过G1/S限制点的关键11。本研究显示，Cyclin A与P21蛋白在子宫腺肌病中的表达与异位内膜浸润宫壁程度和腺肌瘤大小关系密切，差异均有统计学意义(P0.05)，而痛经、月经量过多无明显关系(P0.05)。提示Cyclin A表达升高及 P21蛋白表达下降，均可异位内膜对肌层的浸润及腺肌瘤的形成有明显作用，二者可能在导致异位内膜细胞的增殖及浸润的过程中具有协同作用。本实验结果提示，Cyclin A和P21蛋白2种周期蛋白与子宫腺肌病的发生发展密切相关，可能为子宫腺肌病发病机制提供新的线索，并可为今后的治疗提供新的思路。【参考文献】 1徐丛剑，金志军主编.子宫内膜异位症. 第1版.北京：人民卫生出版社，2002.41.2Pepperkok R, Verde F.Cyclin A is required at two points in the human cell cycle.EMBO,1992,11:961971.3温进坤主编.医学分子生物学理论与研究技术. 第2版.北京：科学出版社，2002.358366.4Tocchi A, Mazzoni G, Fornasari V, et al. Preservation of the inferior mesenteric artery in colorectal resection for complicated diverticular disease.Surg,2001,182:162167.5Knoblich JA, Lehner CF. Synergistic action of Drosophila cyclins A and B during the G2M transition.EMBO,1993,12:6574.6段光明，章翔，费舟，等.Cyclin A表达与人脑胶质瘤细胞增殖活性及其病理分级的关系.第四军医大学学报，2000，21：10571059.7Paterlini P, Suberville AM, Zindy F, et al. Cyclin A expression in human hematological malignancies:a new marker of cell proliferation.Cancer Res，1993,53:235238.8张诗式，刘亚敏.P27Kipl、P21WAF1 在肿瘤细胞周期调控过程中的作用. 武警医学院学报，2004,13:162164.9李道成，染立治，颜笑健. P21WAF1/CIP1表达与上皮性卵巢癌预后的关系. 现代肿瘤医学，2004，12：67.10Wakasugi E,Kobayashi T,Tamaki Y,et al. P21(Waf1/Cip1) and p53 protein