【毕业学位论文】（Word原稿）生长猪热应激反应模型及适宜监测指标筛选动物营养与饲料科学硕士论文

密级 : 论文编号 : 中国农业科学院 学位论文 生长猪热应激反应模型及适宜监测指标筛选 o.: 录 前言 ( 1 ) 第一章 ( 2 ) ( 2 ) ( 5 ) ( 6 ) (11) (14) 第二章、试验研究 (16) 猪某些生理生化指标日变化曲线研究 (17) 短期高温对猪生理生化指标影响研究 (23) 持续高温对猪生理生化指标影响研究 (32) (46) (46) 参考文献 (48) 附录 1、血导管的安置实验方法 (53) 附录 2、热应激蛋白 70（ 量测定方法 (54) 致谢 (56) 作者简历 (57) 独 创 性 声 明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所作的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名： 时间： 年 月 日 关 于 论 文 使 用 授 权 的 声 明 本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 研究生签名： 时间： 年 月 日 导 师 签名： 时间： 年 月 日 英文缩写略表 3,5,3 3,5,3,5 - 四碘甲酰原氨酸 皮质醇 血清胰岛素 谷丙转氨酶 谷草转氨酶 乳酸脱氢 酶 磷酸肌酸激酶 热应激蛋白 毫摩尔 /升 单位 /升 摘 要 为给 猪 热应激监测提供科学依据，本研究利用人工气候舱，模拟典型的热应激环境，探讨高温应激对生长猪的血液 生理生化 指标的影响模型，并从中筛选可作为监测热应激的敏感指标，为动物生产中的福利和应激监测提供方法。 选择 12 头体重接近（ 25 遗传基础相似的的健康 安装颈静脉血导管的杜 长 大三元杂交阉公猪， 首先研究 某些生理生化指标和分子生物学指标的日变化规律，然后 进行短期急性高温热应激和持续日变高温热应激试验测定 这些指标变化规律 ，以期得到热应激监测的适宜指标。 结果为： （一）、 血液生理生化指标 日变化规律 生长猪在 18 相对湿度（ 持在 50 境条件下的日变化规律测定结果表明： 钾离子、氯离子在一昼夜内不同时间采样所测值差异显著 （ 。 但从 测值看除 血液生理生化指标测值的 日变化似存在，而且以 8:00 和 16:00 测值较高 ,其他时间点测值较低。在自然日变温条件下（ 18 相对湿度（ 持在 50 值基本稳定，变异很小。 （二） 短期急性 热应激 在半小时内温度从 19升至 40并保持 3 小时之后迅速降至 19，相对湿度（ 持在 50 境条件下 短期急性 热应激实验表明： （ 1）、生长猪血液无机离子中 钾离子 对 短期急性 热应 激比较敏感， K+在升温半小时后即有明显降低（ ，但从 测值平均值看也表现出与钾离子相似的变化趋势。 （ 2）、 生长猪血液中 期急性 热应激比较敏感， 为敏感。 小时后即有显著升高（ 。表明从猪血液中电解质离子浓度角度看 ,该强度的热应激源对实验猪没有产生明显应激 。并且表明血液中离子浓度不是反映猪受长期中低强度热应激的敏感指标。 （ 2）、持续高温条件下 ,生长猪血液中 均随热应激时间延长而升高（ ,其 但从 测值看钙离子、磷离子、镁离子 测值的 日变化似存在，而且以 8:00 和 16:00 测值较高 ,其他时间点测值较低 ,统计检验差异未呈显著水平的原因可能由于组内差异以及指标本身测值变异较大而致。 表 3:血液中无机离子日变化情况 (x n=4 单位： ) 时间 P K+ :00 a :00 a :00 a 2:00 a 6:00 a 0:00 a 表中同列数据角标中含有相同字母 ,表示二者相比差异不显著 ,P标字母完全不同 ,表示二者差异显著 ,但从 测值看 测值的 日变化似存在与离子测值相似，而且以 8:00和 16:00 测值较高 ,其他时间点测值较低 ,统计检验差异未呈显著水平的原因可能由于组内差异、指标本身测值变异较大以及来研究试验猪重复数所限而致。 表 4：血液中几种酶的日变化情况 (x n=4 单位： ) 时间 :00 a a a a 4:00 a a a a 8:00 a a a a 12:00 a a a a 16:00 a a a a 20:00 a a a a (表中同列数据角标中含有相同字母 ,表示二者相比差异不显著 ,P标字母完全不同 ,表示二者差异显著 ,， 但从 测值看 日变化似存在，而且以 8:00 和 16:00 测值较高 ,其他时间点测值较低 ,其统计检验差异未呈显著水平的原因可能由于组内差异以及指标本身测值变异较大而致。在自然日变温 18 相对湿度（ 持在 50 件下 ,值基本稳定，变异很小。 表 5：血液中几种激素的日变化情况 (x n=4 单位： ) 时间 3 :00 a a a a 4:00 a a a a 8:00 a a a a 12:00 a a a a 16:00 a a a a 20:00 a a a a (表中同列数据角标中含有相同字母 ,表示二者相比差异不显著 ,P标字母完全不同 ,表示二者差异显著 ,标字母完全不同 ,表示二者差异显著 ,其 但从 测值看钙离子、磷离子、镁离子 测值的 日变化似存在，而且以 8:00和 16:00测值较高 ,其他时间点测值较低。 （ 3）、生长猪 自然日变温 18 相对湿度（ 持在 50 境条件下的几种酶指标测值的 日变化规律结果表明： P,P 值分别为 但从 测值看 测值的 日变化似存在，而且以 8:00 和 16:00 测值较高 ,其他时间点测值较低 ,统计检验差异未呈显著水平的原因可能由于组内差异以及指标本身测值变异较大而致。 （ 4）、关于猪血浆皮质醇水平的昼夜节律及与环境温度关系的报导很少， 1985）对成年妊娠母猪进行测定，饲养于 18适温中猪的皮质醇峰值在清晨 4： 00 一 6： 00 间，此后 12小时降至最低值。当经 3天 2的冷应激后，再升到 18中，每日的变化规律暂时混乱，皮质醇水乎逐渐下降。当由 18转 入 32的热应激中，皮质醇水平逐渐升高，重新建立昼夜变化周期，最高值在晚间，最低值在清晨。张敏红等（ 1996）研究了猪在 8： 00 一 16： 00 间血浆皮质醇浓度的变化，得出如下结果，饲养于 19适温中的猪的皮质醇在 8： 00时最高，此后逐渐下降，至16： 00 时降至最低值。本实验研究了猪在一昼夜间血浆皮质醇浓度的变化 ,环境温度受自然温度及猪自体产热影响当日在 18 化，相对湿度（ 持在 50 得出如下结果， P= 但从 测值看 变化 似存在，而且以 8:00和 16:00测值较高 ,其他时间点测值较低。此次实验与 张敏红等（ 1996）实验结果不同的原因可能是由于温度设置不同一为 18 然日变温，一为 19恒温。 （ 5）、杜荣等（ 1997）研究了成年公鸡血浆中 果表明最高峰出现在午夜的 0之间，其次两个峰值分别出现在上午 8 点和下午 16 点。本次实验 在自然日变温18 相对湿度（ 持在 50 件下 , P， 值基本稳定，变异很小。 中国农业科学院硕士学位论文 试验研究 31 （ 6）、生长猪在 18 相对湿度（ 持在 50 境条件下， 一昼夜内不同时间所测值差异未呈显著水平 (P=测值基本稳定，变异很小。 （ 7）、本次实验 究结果 与报道结果存在差异，可能与试验条件的设置以及动物种类不同相关。某些指标由于受动物个体以及测试方法的影响本身测值变异较大，没有呈显著水平，从总体上看动物 理化指标 测值 的 日变化是客观存在的，但不同指标的变异幅度迥异。 因此研究应激反应模型、应激监测时针对不同的测试指标采样时间点 的控制十分重要。 本次实验得出钾离子、氯离子在一昼夜内不同时间采样所测值差异显著，在实验研究中应注意固定采血时间点或进一步对不同时间点的数值根据其日变化情况进一步校正研究。 生长猪某些指标在 18 相对湿度（ 持在 50 境条件下的 生理生化指标测值的 日变化规律结果表明： 钾离子、氯离子在一昼夜内不同时间采样所测值差异显著 （ 。 但从 测值看除 血液生理生化指标测值的 日变化似存在，而且以 8:00 和 16:00 测值较高 ,其他时间点测值较低。在自然日变温条件下（ 18 相对湿度（ 持在 50 异很小。 中国农业科学院硕士学位论文 试验研究 32 短期高温对猪生理生化指标影响研究 本试验采用短期急性高温热突袭方法，研究筛选猪热应激的敏感指标，确立有关指标的精确测定方法。 选择 12 头体重接近（ 25 遗传基础相似的安装颈静脉 血导管的健康杜长大三元杂交阉公猪随机分成 3个组 ,每组 4头猪， 每组置于一个环控舱内，环控舱分别编号 A、 B、 C。试验日粮 参照 1998）生长猪营养需要配制 ，粗蛋白为 消化能为 方见 表 7）。 表 7 试验日粮配方及及营养成分表 原料 比例 （ %） 营养成分 水平 （ %） 玉米 化能 （ MJ/ 盐 蛋白 （ %） 酸氢钙 % 粉 磷 豆粕 氨酸 % 籽粕 氨酸 % 氨酸 氨酸 +胱氨酸 % 麦麸 氨酸 % 混料 合计 （基础日粮每千克预混料向全价料中提供 :000351g， 核黄素 : 烟酸 锰 饲养在人工气候舱内（舱温 19，相对湿度 50），每天 8:30 9:30， 16:30 17:30两次饲喂，其余时间自由饮水。试猪恢复期和适应期共 10 天。 试验期第一日上午 8:30 开始升温， B、 C 舱在半小时内舱内温度由 19升至 40，相对湿度（ 终保持在 50。维持 3小时，在 12:00时，打开舱门，使舱内温度迅速下降，然后调节控制到 19。试猪仍按时饲喂自由饮水。第 2温控制在 19，相对湿度 50。 试验第一日的 8:00、 9:00,10:00,12:00、 16:00、 20:00第 2日的 8： 00,第 3日的 8： 00,第4 日 的 8： 00,第 5 日的 8： 00 用注射器从血导管抽取 10液，分别置于两个 5有肝素的中国农业科学院硕士学位论文 试验研究 33 塑料试管中， 4000转 /分离心 15 分钟，取上清液置离心管中， 0冷藏保存备测。 无机离子：血浆中钾、镁、氯、钙、磷， 用 血液激素：甲状腺素（ 皮质醇（ 血清胰岛素（ 放射免疫法 血液酶：谷丙转氨酶： 酶连续测定法 谷草转氨酶（ 酶连续测定法 磷酸肌酸激酶（ 酶连续测定法 乳酸脱氢酶（ 比色法 双夹心 对人重组 比稀释液进行检测，建立标准曲线。将待测样品的吸光度（ A）值与标准曲线比较，通过换算计算样品中 含量。 所有数据用 (1) 短期急性高温对 生长猪血液 无机离子的影响 表 8：短期急性高温对 生长猪血液 无机离子的影响 (x n=8 单位： ) （表中数据角标 *表示与升温前相比差 异显著（ P ，但从 测值平均值看也表现出与 钾离子相似的变化趋势。 0 9:00 10:00 12:00 16:00 20:00 次 日 8 : 0 0 三 日 8 : 0 0 四 日 8 : 0 0 五 日 8 : 0 0短期急性高温 日变化校正中国农业科学院硕士学位论文 试验研究 35 （ 2） 短期急性高温对生长猪血液几种酶活性的影响 表 10：短期急性高温对生长猪血液几种酶活性的影响 (x n=8 单位： ) （表中数据角标 *表示与升温前相比差异显著（ P ； 期急性 热应激比较敏感，但反应时间短。 升高温度后即有升高（ 。 （ 4） 短期急性高温对 生长猪血液 表 12:短期急性高温对 生长猪血液 x n=8 单位： ) （表中数据角标 *表示与升温前相比差异显著（ P ，但从 测值平均值看也表现出与钾离子相似的变化趋势。 在 热应激时，动物肾上腺皮质分泌醛固酮 增加，醛固酮具有保钠排钾作用，从而造成低血钾 (986)。 实验一得出 钾离子在一昼夜内不同时间采样所测值差异显著，因此直接测值不能客观反映动物受应激的状况，而应对不同时间点的数值采用其日变化函数进行校正。 （ 2）、 1979）研究发现，当动物受到刺激引起组织损伤时，组织内酶会通透过细胞膜进入血液，这些酶的活性可以作为诊断应激的指标。热应激初期和中暑之前，可导致机体某些生化指标的改变，尤其是酶水平的改变（ 1979； 1977）。在正常情况下，由于细胞 内膜的屏障作用，细胞内酶不易逸出，仅由于细胞的不断破坏而少量释入血液（康格非，1989）。只有当细胞因各种因素而受到破坏时，细胞膜通透性增加，使其释放入血的速度增高，血清酶活性才能明显升高。张国高等（ 1985）提出，由于动物受热，血液由内脏转向皮肤，肝脏相对缺血缺氧，肝细胞通透性增加，导致血清谷草转氨酶和乳酸脱氢酶含量升高，乳酸脱氢酶对热应激反应速度相对较慢。 谷草转氨酶是肝脏组织特异性的酶，其在血清中的含量与肝脏细胞的完整性密切相关。当肝脏受损时，此酶即释放于血清中，血中含量升高。由试验得知，热应激后试验 组中谷草转氨酶活性有所升高，说明热应激可能造成了肝脏的损伤。 糖酵解过程中的关键酶，血清中该酶的活性升高与无氧酵解加强密切相关。本实验研究证明在热应激过程中 活性明显升高，揭示在热应激的过程中能量代谢的无氧酵解过程加强。动物在热应激期间出现呼吸功能障碍，造成乏氧性缺氧，能量代谢的无氧酵解加强，这与987)刘铀（ 1999）在鸡上的研究结果相一致。 热应激时血浆磷酸肌酸激酶 (性上升。 骨骼肌含量最高，其功能是催化三磷酸腺苷中的高能磷酸键转移到肌酸 分子上，生成磷酸肌酸而储存能量。热应激时由于肌肉能量供应不足，肌肉营养不良，导致肌肉中的 血浆 度升高，所以傅玲玉， 1988；张延荣， 1994）报道热应激时鸡的血清 实验在在生长肥育猪上得到了同样的结论。 （ 3）、张敏红等（ 1998）报道，使猪突然处于 33 ， 3h，每隔 1h 采血一次，发现空腹猪在急性热暴露期间血浆皮质醇水平逐渐升高，热暴露结束后 1h，皮质醇水平下降到热暴露前水平； 动中国农业科学院硕士学位论文 试验研究 39 物在急性热应激时，血液皮质醇明显升高，然后逐渐下降 ，降到低于热应激前水平并趋于稳定，热应激初期皮质醇升高的生理学意义是促进蛋白质的分解，增加氨基酸作为糖元异生的原料（ 1968）和循环体系中的葡萄糖（ 1970）。本实验 生长猪血液皮质醇 对短期急性 热应激比较敏感，但反应时间短。 皮质醇 在升高温度后即有升高（ ，可能与热应激作用的时间短有关 。 （ 4）、热应激蛋白（ 动物受到应激原的刺激后机体细胞内产生的几族具有高度保守性的蛋白质，以保护机体免受这些应激因素的损害。其中最主要的诱导性最强的是 此 量的检测对研究抗应激水平有很重要意义。现已通过动物实验初步揭示，在高温等有害因素作用下，体内 出现应激反应，这种反应诱导合成热应激蛋白，而热应激蛋白是否能被正常激活，决定热耐力的形成 (993)。在热耐力的形成中， 着最重要的作用。此外， 有促进免疫球蛋白合成、参与蛋白质加工、辅助抗体形成等功能，这些功能均与热耐力的形成密切相关。 熊一力等（ 1995 年）报道，高温（干球温 40 2）使大鼠 成明显增加。贺涵贞等（ 1998 年）报导，小鼠巨噬细胞和人淋巴细胞受热后均以 70 与受热强度有关。 (1996)在测定肝脏 浓度时发现 ,暴露在高温下的鸡(1,随着时间的延长 ,相似的结果也得到 证实。 本实验 生长猪血液 短期急性 热应激比较敏感，而且反应时间长。 生长猪血液 短期急性高温条件下 ,有升高趋势，在升高温度后立即升高（ ，但从 测值平均值看也表现出与钾离子相似的变化趋势。 （ 2）、 生长猪血液 几种酶中 期急性 热应激比较敏感， 小时后即有显著升高（ ，表明 激的条件下有耗竭的趋势。 图 15：持续日变高温对 生长猪血液 (13)持续高温对生长猪 标影响 表 32:持续高温对生长猪 标影响 (x 单位： ) 采血时间 对照组 n=4 高温组 n=8 显著性检验 1 日 8:00 日 8:00 日 8:00 日 8:00 0 日 8:00 4 日 8:00 显著性检验中 *表示与对照组相比差异显著（ P *表示差异极显著（ P ,示差异未达显著水平。同列数据标识字母中含有相同字母表示二者差异不显著，字母完全不同表示二者差异显著（ P 持续高温条件下 ,生长猪血液中 在持续高温开始至实验结束与对照组相比及持续高温 1、 2、 4、 7、 10、 14日间 测值差异未达显著水平 (P= 0204060801001 日 8 : 0 0 2 日 8 : 0 0 4 日 8 : 0 0 7 日 8 : 0 0 1 0 日 8 : 0 0 1 4 日 8 : 0 0对照组 持续高温组中国农业科学院硕士学位论文 试验研究 51 (14)持续高温对生长猪 标影响 表 33:持续高温对生长猪 标影响 (x 单位： ) 采血时间 对照组 n=4 高温组 n=8 显著性检验 1 日 8:00 2 日 8:00 4 日 8:00 7 日 8:00 10 日 8:00 14 日 8:00 （显著性检验中 *表示与对照组相比差异显著（ P *表示差异极显著（ P ,示差异未达显著水平。同列数据标识字母中含有相同字母表示二者差异不显著，字母完全不同表示二者差异显著（ P 图 17：持续日变高温对 生长猪血液 持续高温条件下 ,与对照组相比生长猪血液中 P,持续高温 1、 2、 4、7、 10、 14 日分比对照组升高 40%、 36%、 46%、 40%、 43%、 36%。 但在持续高温试验期内各次 测值相对恒定，绝对值与短期急性 热应激时 测值接近，表明 激与否的指标，而不能敏感地反映受应激的程度。 01002003004005006007001 日 8 : 0 0 2 日 8 : 0 0 4 日 8 : 0 0 7 日 8 : 0 0 1 0 日 8 : 0 0 1 4 日 8 : 0 0对照组 持续高温组中国农业科学院硕士学位论文 试验研究 52 （ 1）、 环境温度的变化可剌激肾上腺素等内分泌腺的活动。体液及细胞内的 、渗透压的代偿性调节机能可以导致矿物质的改变。在高温下 ,动物体内钾、钠、镁、钙和氯的损失量明显增加 ,特别是钾损失更为明显 (1973； 1987)。梁孙义 (1990)等报道 ,在夏季高温环境中 ,血钙、血钠、血钾的含量与适温时比较 ,差异达极显著水平 (P岗本（ 1964）报道，牛的血清钙离子在高温季节最少。但就生长肥育猪方面而言 ,则较少报道。 975)发现 ,受热应激的猪尿中的钾较多 ,但钙的保留不受热应激的影响。试验证实 ,热应激使生长肥育猪的血糖和血清尿素氮的浓度升高 ,钠、钾、氯和总蛋白的浓度降低（余德谦等， 1999） ,而钠、钾、氯离 子浓度的降低对猪生长速度也有间接的抑制作用 (1985)。 本实验研究表明 :生长猪血液 无机离子中 K+、 期急性高温条件下 ,都有下降趋势，但只有 K+对热应激比较敏感。 持续日变高温条件下 ,生长猪血液中钙、磷、镁、钾、氯等离子浓度无明显变化 ,在持续高温开始至实验结束与对照组相比都无显著差异，这与李静（ 2003）的实验结果一致 。表明从猪血液中电解质离子浓度角度看 ,该强度的热应激源对实验猪没有产生明显应激。并且表明血液中离子浓度不是反映猪受长期中低强度热应激的敏感指标 。 （ 2）、 1979）研究发现，当动物受到刺激引起组织损伤时，组织内酶会通透过细胞膜进入血液，这些酶的活性可以作为诊断应激的指标。在正常情况下，由于细胞内膜的屏障作用，细胞内酶不易逸出，仅由于细胞的不断破坏而少量释入血液（康格非， 1989）。只有当细胞因各种因素而受到破坏时，细胞膜通透性增加，使其释放入血的速度增高，血清酶活性才能明显升高。张国高等（ 1985）提出，由于动物受热，血液由内脏转向皮肤，肝脏相对缺血缺氧，肝细胞通透性增加，导致血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶和乳酸脱氢酶含量升高，乳酸 脱氢酶对热应激反应速度相对较慢。 龚群（ 1996）报道了高温应激对大鼠血清中 果表明三种酶活性均随热应激时间延长而升高。 谷草转氨酶与谷丙转氨酶是肝脏组织特异性的酶，其在血清中的含量与肝脏细胞的完整性密切相关。当肝脏受损时，此酶即释放于血清中，血中含量升高。由本试验得知，持续日变高温热应激后试验组中谷草转氨酶与谷丙转氨酶活性逐渐升高，说明随着热应激时间的延长造成肝脏的损伤更严重。 糖酵解过程中的关键酶，血清中该酶的活性升高与无氧酵解增强密切相关。本实验研究证明在热应 激过程中 活性明显升高，且有随热应激时间的延长而增高趋势 ,揭示在热应激的过程中能量代谢的无氧酵解过程加强。 热应激时血浆磷酸肌酸激酶 (性上升。 骨骼肌含量最高，其功能是催化三磷酸腺苷中的高能磷酸键转移到肌酸分子上，生成磷酸肌酸而储存能量。热应激时由于肌肉能量供应不足，肌肉营养不良，导致肌肉中的 血浆 度升高，所以升高可作为应激反应的一个重要特征。 974)、刘春燕（ 2000）、 995)报道随着热应激时间的延长 ，肌细胞中的 出呈逐渐增加的趋势。本实验持续高温条件下 ,生长猪血液中 随热应激时间的延长，呈逐渐增加的趋势， 持续高温开始中国农业科学院硕士学位论文 试验研究 53 1、 2、 4日都高于对照组（ P，在 7、 10、 14日也都高于对照组（ P。这与李静（ 2003）的实验结果一致。 持续高温条件下 ,生长猪血液中 性明显升高 ,均随热应激时间延长而升高 ，表明血液中各项酶指标 测值都能较敏感地 反映猪受热应激的状况，是实时监测应激源及其刺激强度的敏感指标。 （ 3）、张敏红（ 1996）研究 持续日变高温 14日内血浆皮质醇显著升高。 1976)报道，黑白花乳牛处于 15 5、 18 5、 21 2、 24 0、 26 8、 29 5、 29 5和 29 5的恒温中各 1周，在最后 3 周 (温度都为 29 5 )，皮质醇浓度直线下降。本实验持续高温条件下 ,生长猪血液中值先升后降 ,在持续高温开始第 1 日明显高于对照组 （ P， 随后逐渐下降，至第 4 日后降至低于对照组的水平，表明 持续 应激的条件下有耗竭的趋势。这与 1984 在鸡上的研究结果一致 。 (1973)则报道高温 (35恒温 )至少经 9 天才引起糖皮质激素的显著下降。热应激初期皮质醇升高的生理学意义是促进蛋白质的分解，增加氨基酸作为糖元异生的原料（ 1968）和循环体系中的葡萄糖（ 1970）。动物在环境温度明显升高时，进入热应激状态，机体代谢加强，产热增多，血液皮质醇明显升高；随着对热应激的适应，然后逐渐下降。但若为渐进性热应激，则皮质醇呈逐步降低趋势，且趋于相对稳定。 有关持续高温对血液胰岛素浓度影响的研究很少，在本试验中得出，持续高温不影响猪血浆胰岛素含量，这一结果与张敏红（ 1996） 研究持续日变高温 14 日所得结果一致 ,也与 993)用绵羊做的试验结果相一致， 1993)得出，饲养于 30环境中的绵羊的血液胰岛素含量与饲养于 20环境中的绵羊无显著差异 (P 0 05)。 甲状腺激素具有加强组织代谢，提高组织耗氧量和产热量，促进糖类吸收、利用和糖元异生，加速脂肪分解，促进蛋白质合成等作用。从体热调节角度来看 ,环境温度升高时 , 甲状腺分泌减少 ,使体内产热量下降；环境温度降低时 , 甲状腺分泌增强 ,使体内产热量升高，对维持家畜体温稳定有重要作用。 1970)报道，生长猪在环境温度为 33条件下饲养，比饲养于 23的环境中甲状腺重量减轻 1976）试验报道，当外界温度高达舒适区的上限温度时，会使家畜体内的甲状腺激素分泌量大幅度下降。 1965）的研究证实，炎热对甲状腺活动的影响，至少要经过 60 小时才变得显著。家畜由炎热环境回到等热区之后，要经过108 小时才能使甲状腺活动恢复到正常水平。在家畜进入炎热环境的起初阶段，甲状腺所起的作用较小，但在服习之后具有重要作用（李震钟等， 1999）。 本实验持续高温条件 下 ,生长猪血液中 在持续高温开始至实验结束与对照组相比都无显著差异 。 但从测值的绝对值看 , 在持续日变高温条件下 但下降幅度很小 ,与 1976）的结果不一致 ,有待于进一步查明原因。 （ 4）、 热应激蛋白（ 动物受到应激原的刺激后机体细胞内产生的几族具有高度保守性的蛋白质，以保护机体免受这些应激因素的损害。其中最主要的诱导性最强的是 此 量的检测对研究抗应激水平有很重要意义。现已通过动物实验初步揭示，在高温等有害因素作用下，体内出现应激反应，这种反应诱导合成热应激蛋白，而热应激蛋白是否能被正常激活，决定热耐力的形成。在热耐力的形成中， 着最重要的作用。 熊一力等（ 1995 年）报道，高温（干球温 40 2）使大鼠 成明显增加。邬堂春等（ 1997 年）报道，高温作业工人血清中的 量增加，贺涵贞等（ 1998 年）中国农业科学院硕士学位论文 试验研究 54 报导，小鼠巨噬细胞和人淋巴细胞受热后均以 70 与受热强度有关。 本实验生长猪血液 短期急性高温条件下 ,有升高趋势，在升高 温度后立即升高（ P ，降温 5 日后仍明显高于升温前（ P。表明该分子生物学指标 仅能 反映猪受热应激的状况，而且还能反映 猪受 热应激的后续效应。 但在持续高温试验期内各次 测值相对恒定，绝对值与短期急性 热应激时 测值接近，表明 激与否的指标，而不能敏感地反映受应激的程度。 医学领域中，建议将 为中暑的监测指标， 测定为热应激的监测与诊断提供一种新的思路、新方法。医学界正在研制开发 量试剂盒。由于 人类医学中的广泛研究与应用， 标准的人血清 其抗体都可从国内外各试剂公司获得，但没有猪的标准猪与人的 7%，抗原抗体有一定的交叉反应性。 （ 1）、 持续日变高温条件下 ,生长猪血液中钙、磷、镁、钾、氯等离子浓度无明显变化 ,在持续高温开始至实验结束与对照组相比都无显著差异 。表明从猪血液中电解质离子浓度角度看 ,该强度的热应激源对实验猪没有产生明显应激。并且表明血液中离子浓度不是反映猪受长期中低强度热应激的敏感指标。 （ 2）、持续高温条件下 ,生长猪血液中 均随热应激时间延长而升高 （ P 。并且与对照组相比差异达显著 （ P 或极 显著水平 （ P ；表明血液中各项酶指标 测值都能较敏感地 反映猪受热应激的状况，并且 随应激时间延长各指标 测值累进 升高 。 （ 3）、持续高温条件下 ,生长猪血液中 值先升后降 ,在持续高温开始第 1 日明显高于对照组 （ P ， 随后逐渐下降，至第 4日后降至低于对照组的水平，表明 持续 应激的条件下有耗竭的趋势。 （ 4）、持续高温条件下 , 与对照组相比生长猪血液中 显升高 （ P ,但在持续高温试验期内各次 测值相对恒定，绝对值与短期急性 热应激时 测值接近，表明 一项定性监测动物受 应激与否的指标，而不能敏感地反映受应激的程度。 中国农业科学院硕士学位论文 试验研究 55 2 4基本结论 一、动物 生理生化指标 测值 的 日变化是客观存在的，同时由于 应激监测指标的测值本身受多种因素的影响变异较大，因此研究应激反应模型，应激监测时采样时间点的控制十分重要。 二、 应激的定性与定量监测是 一项十分复杂的问题，不同动物对不同 应激源的反应模型迥然不同，在相 同 应激源的情况下，不同 生理生化指标 测值的反应模型也迥然不同，一种 指标的 测值并不能反映其他指标的变化。 三、 血液 中 激素指标和 应激的状况，但各项指标的生物学表征意义有很大差别。其中 酶指标能反映动物体受应激源刺激的累进程度 ;但应激源消失后， 分子生物学指标 值却较为恒定，它能较准确反映动物受应激的状态，且 应激源消失后仍保持较高的 测值，因此 激的良好指标。 2 5待解 决问题及展望 本次实验对各种生理生化指标日变化规律研究，与所报道的一些研究结果存在差异，可能与环境温度、湿度以及取样时间等实验条件和方法有关。 钾离子在一昼夜内不同时间采样所测值差异显著，在实验研究中应注意固定采血时间点或进一步对不同时间点的数值根据其日变化情况进一步校正研究。 本试验筛选了 敏感的内分泌和血液生理生化指标 ，去深入研究可以得出不少热应激反应模型。 不同的生长阶段，血液生化指标对热环境的反应不尽相同，其原因可能是，某些血液生化指标在不同生长期内对温湿度变化的敏感性不同，还有某些血液生化指标本身的不 稳定性（林海，1996），所以血液指标与其它报道有差异，用血液指标作为衡量热应激程度的指标，要在充分了解各个指标在热应激过