暨南大学细胞生物学预写报告2014.3.doc

实验报告格式（采用A4报告纸，请预留出左边的装订位）（一） 实验目的（Objectives）（可提前抄写）（二） 实验原理（Theory）（可提前自己撰写，也可以在上课时参照老师讲述的内容来写）（三） 主要仪器设备及材料（Equipments and matiral）（课堂上拟写）（四） 实验步骤（Protocols）（可提前抄写）（五） 实验结果（Results）（课堂上拟写）（六） 结果分析与讨论（Discussions）（课堂上拟写）非国际学院的同学，无需抄写英文版。另外，由于任课老师不同，中英文内容可能会有所差异，英文译文意思到位即可，不一定与本文档完全一致。实际排课顺序可能与本文档的排序不同，请按实际排课来抄写。细胞无丝分裂与有丝分裂（Amitosis & mitosis）（一）实验目的（Objectives）： 1、了解细胞增殖的方式（Observe amitosis of somatic cell in the specimen）2、了解无丝分裂、有丝分裂的基本过程及生物学意义（Understand the morphological characteristics of mitosis ）3、掌握有丝分裂各个时期的特点（Differences of mitosis between animal and plant）（二）实验步骤（Protocols）：观察细胞永久切片（洋葱根尖有丝分裂、马蛔虫卵有丝分裂、草履虫无丝分裂）。To observe the sample slide (the mitosis of the onion root tip cells、the mitosis of the oocyte of the horse roundworm、the amitosis of paramecium)动物细胞的基本形态观察（Morphology of animal cell）（一）实验目的（Objectives）：1、普通光学显微镜下识别细胞和细胞器的形态结构（To observe shape features of the frog red blood cells and the neural cells）2、掌握生物绘图的方法（To draw diagrams of typical cells）（二）实验步骤（Protocols）：（1）观察蛙血细胞：剪开青蛙胸腔打开心包膜，剪破心脏以载玻片边缘沾少许血液推片晾干镜检作图（蛙血红细胞的观察）。Observation the frog blood cells1. Open up the chest cavity of a frog 2. Remove the pericardium membrane and cut the heart with scissors and forceps 3. Dip the edge of a carry slide in the blood and push it against another carry slide4. air dry the blood sample on the carry slide5. Observe the blood cells under light microscope and draw them down（2）观察蛙神经细胞：尽量长的剪取青蛙脊髓骨，3mL任氏液洗去血液 沿脊髓侧面剪开并取出白色脊髓 滴加2mL任氏液稍冲洗 在载玻片上剪碎 用1甲苯胺蓝1-2滴染色20min（架在平皿上） 用盖玻片轻压 镜检作图（蛙脊髓前角运动神经细胞的观察）。Observation the frog neural cells : 1. Open the back of a frog and take out the vertebra as much as you can2. Rinse the vertebra with 3mL Ringers3. Open up the vertebra from the side with a pair of scissors and get the white spinal cord, rinse it with 2mL Ringers 4. Cut the spinal cord into small pieces on the carry slide and mount in 1-2 drops of 1% topuidine blue for 20min5. Cover the sample with a piece of cover slide and gently press it against the carry slide6. Observe the neuron cells under light microscope and draw them down液泡系的活体染色与观察（Live staining and observation of vacuolar system）（一）实验目的（Objectives）：掌握细胞活体染色的原理和相关的技术（1）To grasp the staining method of the vacuome（2）To observe the basic structure of the Golgi complex（二）实验步骤（Protocols）：（1）观察液泡系：不处死并剪开青蛙胸腔剪取胸骨剑突软骨最薄部分一小片（34mm）用3mL任氏液冲洗血迹放于载玻片上滴1-2滴1/3000中性红染液架在平皿上染色30分钟左右用任氏液稍冲用1-2滴任氏液浸泡10分钟盖上盖玻片，镜检作图（蛙剑突软骨液泡系的观察）To observe the vacuome: Open the chess of a frog find out the xiphoid bone and take out the thinnest part（about 34mm2） rinse with 3mL Ringers mount in 1-2 drops of 1/3000 Neutral Red on the carry slide for 30min rinse with Ringers dunk it with 1-2 drops of Ringers for 10min cover it with a piece of cover slide observe the sample under light microscope and draw them down (observation of the vacuome of the frog xiphoid bone)（2）观察猫神经节细胞切片高尔基体永久切片Observe the Golgi complex of the cat neural node and draw them down细胞减数分裂（一）（二）（Meiosis (I) (II)）（一）实验目的（Objectives）：1、了解生殖细胞减数分裂发生过程及各个时期的染色体和细胞变化特点，加深对减数分裂意义的认识。（understand the process of germ cell meiosis and changes in chromosomes and cell in each period ，deepen the understanding of the significance of meiosis.）2、掌握减数分裂标本的制备方法。（master meiosis specimen preparation methods.）（二）实验步骤（Protocols）：颈椎脱臼法处死已经腹腔注射秋水仙素的小白鼠 破小腹取出睾丸置于培养皿 加入1柠檬酸钠液3mL 用剪刀剥离被膜(丢弃) 用牙签将睾丸组织轻轻剥离开 转移至离心管中 自然沉降后吸干柠檬酸钠液 加入8mL固定液 用吸管吹散组织 固定15分钟 换一次固定液继续吹打后固定15分钟 吸干固定液加0.20.3 mL 60醋酸 轻轻振荡使之溶解（1015min） 吸取悬浮液在冰浸玻片上滴片均匀过火5-6遍自然晾干1. Kill the colchicine pretreated (Intraperitoneal Injection, IP) mice by dislocate the cervical vertebra.2. Open the abdomens and take the testicles.3. Dissect the testicles in 1% sodium citrate in a petri dish.4. Break the testicles with tooth pickers in 4mL fresh 1% sodium citrate.5. Transfer the tissues into a centrifuge tube(use a pipette) and fix in 8ml fixer.6. Pipette the tissue up and down gently in the fixer and fix for 15min7. Repeat the step 5 and 6.8. Discard the supernatant and add 0.2-0.3ml 60% acetic acid to the sample.9. Vortex gently to dissolve the tissue(10-15min).10. Mount a drop of supernatant on a pre-cooled carry slide and dry.取减数分裂细胞标本 加入Giemsa染液 室温20分钟 用自来水轻轻冲洗 晾干、镜检（低倍高倍油镜）1. Stain the cells that prepared on 13/10 with Giemsa for 20min.2. Rinse briefly with tap water.3. Air dry and look under microscope (use the oil lance this time).4. Identify the cells at different stages of meiosis.5. Draw the five different stages (leptotene, zygotene, pachytene, diplotene and diakinesis) of the first division.细胞膜的渗透性（Permeability of cell membrane）（一）实验目的（Objectives）：1、了解细胞膜的渗透性（Understand hemolysis and the mechanism;）2、了解相对分子量、脂溶性大小、电解质与非电解质溶液对细胞膜通透性的影响。（Understand plasma membrane permeability and the speed of various substances into the cell. ）试剂：0.17mol/L氯化钠NaCl、0.17mol/L氯化铵NH4Cl、0.17mol/L醋酸铵NH4Ac、0.17mol/L硝酸钠NaNO3、0.12mol/L草酸铵(NH4)2C2O4、0.12mol/L硫酸钠Na2SO4、0.32mol/L葡萄糖Glucose、0.32mol/L甘油Glycerol、0.32mol/L乙醇Ethanol、0.32mol/L丙醇Propanol、纯水pure water。材料：兔血红细胞rabbit erythrocyte （二）实验步骤与结果（Protocols and Results）不同溶质等渗溶液的溶血现象（纯水不是等渗溶液）试管编号是否溶血时间结果分析(0) 9ML纯水+1ML稀释兔血(1) 9ML氯化钠+1ML稀释兔血(2) 9ML氯化铵+1ML稀释兔血(3) 9ML醋酸铵+1ML稀释兔血(4) 9ML硝酸钠+1ML稀释兔血(5) 9ML草酸铵+1ML稀释兔血(6) 9ML硫酸钠+1ML稀释兔血(7) 9ML葡萄糖+1ML稀释兔血(8) 9ML丙三醇+1ML稀释兔血(9) 9ML乙醇+1ML稀释兔血(10) 9ML丙醇+1ML稀释兔血Table. Hemolysis of isotonic solutions of different solutes (pure water is not isotonic solution )No. of test tubeHemolysisYes/NoTimeResult analysis(0) 9 mL H2O +1 mL erythrocyte(1) 9 mLNaCl +1 mL erythrocyte(2) 9 mLNH4Cl +1 mL erythrocyte(3) 9 mLNH4Ac+1 mL erythrocyte(4) 9 mLNaNO3+1 mL erythrocyte(5) 9 mL(NH4)2C2O4+1 mL erythrocyte(6) 9 mLNa2SO4+1 mL erythrocyte(7) 9 mLGlucose+1 mL erythrocyte(8) 9 mLGlycerol+1 mL erythrocyte(9) 9 mLEthanol+1 mL erythrocyte(10) 9 mLPropanol+1 mL erythrocyte动物细胞的融合（英文）（一）实验目的（Objectives）：1、了解聚乙二醇（PEG）诱导体外细胞融合的基本原理；（Learnbasicprinciplesofpolyethyleneglycol(PEG)-inducedcellfusioninvitro）2、通过PEG诱导鸡血细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合的基本方法。（master the basic method of cell fusion via PEG-induced Blood Cells fusion experiments）（二）实验步骤（Protocols）：取1ml鸡血悬液于离心管 加入4ml 0.85%的生理盐水混匀 配平后 1500转离心5分钟 吸去上清液,再加 0.85%生理盐水4ml混匀 配平后 1500转离心5分钟 吸去上清液再加 0.85%生理盐水4ml 混匀 配平后 1200转离心10分钟 小心吸去上清液加入适量GKN液使之成为 10%的悬液 留取悬液1ml再加入3ml GKN混匀 ，取1滴细胞悬液制片剩余细胞悬液，留取1ml，加入 0.5ml 40%PEG液后立即混匀,常温下放置23分钟 取上述混合液1滴，盖上盖玻片观察。动物细胞培养（一）：理论讲解动物细胞培养（二）实验步骤（Protocols）：细胞培养用品的包扎洗洁精洗手，擦干水滴，开始包扎物品（包扎期间请减少说话，以降低实验用品的受污染程度）1、 滴管的包扎：用小镊子塞上棉花（松紧要恰到好处），酒精灯烧去管口棉絮，装回套管里（塞的时候切勿触碰滴管嘴以防污染），封上套管口；2、 试剂瓶与培养瓶的包扎：瓶子盖上盖子包裹（盖子不要旋上）；3、 玻璃平皿的包扎：大平皿一套一套包，小平皿单独包裹好后再3个1套包裹，小烧杯一个一个包，玻璃管垫上棉纱后两个为一套包扎；4、 器械的包扎：酒精棉球擦干净小镊子与小剪刀，然后配套包扎；5、 制备酒精棉球。以上工作全部完成后，放进灭菌锅进行高压高温消毒。动物细胞培养（三）细胞原代培养操作取足月孕小白鼠 颈椎脱臼法处死 浸入75酒精中35秒消毒 取出吸干放于解剖盘中 用尖剪剪开腹部，取出胎鼠 置无菌皿中，送入超净台备用 每位同学剪取一鼠胎，剪开腹腔，去掉腹内器脏，再剪去头、手脚、尾巴 用Hanks液清洗一遍，吸走Hanks液后，剪成1mm3小块 吸入3ml左右Hanks液反复吹打（约20-30次）使小块自然沉淀后吸走HankS液（重复一遍） 吸干Hanks液，将小块组织送入培养瓶底壁（约56点）排列整齐 标好镜号、日期后轻轻翻转瓶底，吸入培养液约4ml 置36.537生化培养箱12个小时后慢慢翻转 使细胞浸于培养液中继续培养 于48小时后在倒置显微镜中观察。注：若能成功：无发生污染，24小时后在倒置显微镜下可见许多细胞贴壁，48小时后许多成纤维细胞在组织点旁生成，若只培养出上皮细胞，不算成功，若培养液变黄，pH下降，代谢物增加，细胞液变浑浊，细胞死去，实验便不成功。植物细胞骨架的显示（一）实验目的（Objectives）：1、了解细胞骨架的结构特征2、细胞骨架制备技术（二）实验步骤（Protocols）：1、切下块状洋葱泡于pH6.8磷酸缓冲溶液6小时以上；2、用的Triton X-100 30分钟，放于37度恒温； 3、M缓冲液洗3次，每次10分钟；4、3%戊二醛固定30分钟，固定后将内表皮撕下； 5、pH6.8缓冲液洗3次内表皮，每次10分钟； 6、0.2%考马斯兰在玻片上染色