诊断心肌梗死的可行性分析ppt课件.ppt

,miRNA诊断急性心肌梗死的临床研究,1,CompanyLogo,内容,2,研究背景,CompanyLogo,急性心肌梗死(AcuteMyocardialInfarction，AMI)即心肌缺血性坏死；是在冠状动脉病变的基础上，发生冠状动脉血供急剧减少或中断使得心肌严重而持久的缺血，进而引起大小不等的心肌坏死。急性心肌梗死分类：1.ST段抬高型心肌梗死（STEMI）2.非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI）,3,研究背景,1JingLi,XiLi,QingWang,etal.ST-segmentelevationmyocardialinfarctioninChinafrom2001to2011(theChinaPEACE-RetrospectiveAcuteMyocardialInfarctionStudy):aretrospectiveanalysisofhospitaldata.TheLancet,EarlyOnlinePublication,24June2014.doi:10.1016/S0140-6736(14)60921-1,近年来心血管疾病已经超过癌症成为威胁人类健康的最主要的疾病，心血管疾病的死亡率为16.77，仅次于恶性肿瘤及脑血管疾病；而AMI在心血管疾病中的发病率及死亡率最高1。最新调查证实中国每10个成年人中就有2个患有心血管疾病，每年约有54万人死于AMI，平均每分钟就有1人死于AMI1。,4,研究背景,2KhanNA，HenlHlelgarnBR，TonelliM，ela1PrognosticvalueoftroponinTandIamongasymptomaticpaticntswithendstagerenaldisease：ametaanalysisJCirculafion，2005，112(20)：30883096,在临床工作中，及时而准确的诊断AMI，对于迅速的回复冠状动脉的血流再灌注以挽救心肌，改善患者生存率至关重要。传统的心肌酶学标志物肌钙蛋白、肌酸激酶同工酶、肌红蛋白等，不是完全只存在于心脏，当出现其他与标志物相关的疾病时也会明显升高，容易造成误诊2。因此，有必要寻找对早期诊断AMI具有更高特异性的生物标志物。,5,立论依据,miRNA一般通过抑制mRNA的转录或诱导mRNA的降解来达到抑制相应基因表达的作用。每种miRNA可调控多个特定靶mRNA，并具有组织及细胞特异性，并在各种状态下对细胞及组织功能发挥重要作用4。4KloosfermanWP，PlasterkRHThediversefunctionsofmicroRNAsinanimaldevelopmentanddiseaseJDevCell，2006，11(4)：44l一450,MicroRNAs(miRNA)是一种由1925个核苷酸组成的内源性、非编码小RNA，能够调控基因表达，并在多种病理生理过程中发挥关键作用3。3SoiferHS，RossiJJ，SaetromPMicroRNAsindiseaseandpotentialtherapeuticapplicationsJMolTher，2007，15(12)：20702079,6,立论依据,研究证实在外周血或血浆中均可检测到miRNA的存在，并在各种病理状态下发生相应的表达变化5。5SkogJ，WurdingerT，vanRijnS，eta1GliohlastomamicmvesiclestmnsportRNAandpmteinsthatpromotetumourgmwthandpmvitlediagnosticbiomarkersJNatCellBiol，2008，10(12)：14701476目前已有研究发现在AMI发生时，外周血或血浆中的某些miRNA的表达可发生相应的变化6。6CorstenMF，DennertR，JochemsS，etaICircuIatingmicroRNA一208bandmicroRNA一499reflectmyocardialdamageincardiovasculardiseaseJCircCardiovascGenet，2010，3(6)：499506,7,国内外研究现状,8,研究目的及意义,通过荧光定量PCR技术分析AMI患者和健康志愿者血浆miRNA的表达，鉴定差异表达的miRNA。比较检测所得的miRNA结果与传统心肌酶学标志物结果的检测准确性和检测时间。判断miRNA是否适用于临床AMI的诊断；或者是否能与传统心肌酶学标志物进行联合诊断。,9,研究方案,内容及方法,采用QIAGEN工作站及血清/血浆提取试剂盒,对提取的miRNA进行逆转录扩增验证其表达,进行cTnI、CK-MB检测,将扩增结果与生化结果比较判断其诊断准确性,生化分析,提取miRNA,荧光定量PCR,数据分析,10,CompanyLogo,研究方案,技术路线,提取miRNA,引物,琼脂糖凝胶电泳验证,荧光定量PCR扩增,mir-30cmir-208bmir-374bmir-499a,STEMI患者样本NSTEMI患者样本稳定心绞痛患者样本不稳定心绞痛患者样本健康志愿者样本,生化检测cTnI、CK-MB、MYO,结果比较分析,11,CompanyLogo,研究方案,研究患者纳入标准,AMI患者有心肌缺血特征；持续胸痛时间12小时。ST段抬高型心肌梗死：1、胸痛时间内心电图至少2个导联出现ST段抬高0.1mV；2、主要冠状动脉完全闭塞（如：左前降支闭塞，左回旋支闭塞，左主干闭塞或右冠状动脉闭塞）；3、血清cTnI和CK-MB升高超过正常参考值至少3倍以上。非ST段抬高型心肌梗死：1、胸痛时间内心电图至少2个导联出现ST段下移0.1mV及（或）T波倒置；2、主要的冠状动脉存在病变，但未完全闭塞；3、血清cTnI和CK-MB升高超过正常参考值至少2倍以上。,12,CompanyLogo,研究方案,研究患者排除标准,1、严重肝肾功能不全；2、恶性肿瘤；3、急慢性感染性疾病；4、自身免疫性疾病。,13,CompanyLogo,研究方案,miRNA检测方法及内参的选择,miRNA的检测方法1、基因芯片技术2、Northernblots技术3、荧光定量PCR技术miRNA的内参目前发现在血清/血浆中恒定表达的miRNA为线虫Ce_miR-39_1。,14,研究方案,2014年01月-05月,2014年06月-09月,2014年09月-12月,2015年01月-04月,收集临床标本,miRNA的提取及PCR扩增,数据的整理和统计学分析,撰写论文及准备论文答辩,进度安排,15,CompanyLogo,预期结果,实验表明mir-30c，mir-208b，mir-374b，mir-499a与cTnI和CK-MB具有相关性。miRNA的诊断准确性高于传统的心肌酶学标志物。miRNA的表达程度与AMI的严重程度有关。可以通过检测miRNA将STEMI与NSTEMI进行区分。,16,可行性分析,实验室具备所需仪器设备和课题实施条件。AMI现在是临床多发病案，标本的来源可以保证。已完成了前期的病例初筛工作。已较熟练的掌握了miRNA的提取、扩增技术，效果较好。导师具有丰富的临床科研经验及与本项目相关的研究基础。科研经费充足。,17,统计方法,计量资料用均数标准差表示。样本量小于50采用Shapiro-Wilk检验判断是否符合正态分布，样本量大于50采用Kolmogorov-Smirnov检验判断是否符合正态分布。两组间计量资料比较时，不符合正态分布的组，采用秩和检验；符合正态分布的组，采用独立样本t检验。多组间计量资料比较时，不符合正态分布的组，采用秩和检验；符合正态分布的组，先判断其方差是否具有齐性，