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文档简介

.,1,T淋巴细胞的分离、计数,中山医学院免疫学教研室,.,2,实验目的和要求,掌握外周血淋巴细胞分离的方法掌握细胞计数的方法,.,3,实验原理,外周血中细胞种类细胞密度红细胞和多核白细胞1.090淋巴细胞和单核细胞1.075-1.090血小板1.030-1.035密度梯度离心法：利用一种密度介于1.075-1.092之间而近于等渗的溶液做密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种细胞加以分离。,本实验：淋巴细胞,.,4,实验方案,抽取外周血,分离淋巴细胞,细胞计数,.,5,实验材料,1.肝素抗凝血2.Hanks液3.淋巴细胞分离液4.水平离心机5.显微镜6.细胞计数板,实验步骤,肝素抗凝静脉血1.5ml,加1.5mlHanks液稀释,置于2ml淋巴细胞分离液上,(交界液面：一定不要打乱),稀释后的抗凝血,淋巴细胞分离液,用Hanks液洗、离心(1000rpm，5min)重复2次,血浆,分层液,红细胞粒细胞,离心（2000rpm，25min）,淋巴细胞与单核细胞层,.,8,用Hanks液重悬细胞,取10ul细胞悬液与90ul白细胞计数液或台盼兰计数液混合,取10ul于细胞计数板上,细胞计数,细胞计数板,细胞计数,数上不数下，数左不数右。,.,11,实验结果,2,2个大方格内细胞总数,单个核细胞浓度（细胞数/ml),10410,=,(稀释倍数）,细胞活力检测：（死细胞被染成蓝色，活细胞不着色）,细胞数量：,.,12,纯度在90%以上淋巴细胞约占90-95%细胞收获率可达80-90%活细胞百分率在95%以上,密度梯度离心法分离外周血单个核细胞：,.,13,注意事项,稀释的肝素抗凝血，沿管壁轻轻叠加于分离液上，使两者形成一个清晰地界面。细胞经离心分层后，缓慢小心吸取
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