Maldi-tof技术与质谱仪的使用ppt课件

.,1,MALDI-TOF技术与质谱仪的使用,南开大学元素所张森,.,2,MALDI技术,离子化技术：MALDIMatrix-AssistedLaserDesorption/IonizationMALDI技术的原理样品与基质，在样品靶表面形成的共结晶薄膜激光照射，基质吸收能量基质把能量传递给样品分子，将电荷转移给样品，样品电离。,.,3,MALDI技术中基质的作用,基质的作用把样品分子彼此分开(基质：样品=10，000：1)，削弱样品分子之间的相互作用。基质吸收激光的能量，并将部分能量传递给样品。帮助样品离子化。,.,4,常用基质及选择,.,5,Laser,SampleTarget,Detector,Clock,Time-of-Flight,MolecularMass,TOF的基本原理,.,6,EnablingLifeScienceToolsBasedonMassSpectrometryTM,Ek=zqUEk=1/2mV2,V2=2qUz/m=2qU/(m/z),.,7,MALDITOFMS的构成,检测器1：线性模式,检测器2：反射模式,.,8,反射模式下TOF的分辨率高于线性模式,.,9,线性模式和反射模式,.,10,样品和标准品点靶,标准品的作用：对仪器参数进行校准，使样品测试的质量准确度更高。注意：样品和标准品，必须点靶方式一致，所选基质一样。,.,11,内标法和外标法,内标法:样品与标准品点在同一靶点。优点：样品和标准点条件一致，质量准确度更高，质荷比可准确到0.02。缺点：标准品干扰样品出峰。外标法:样品与标准品点在不同靶点。优点：无标准品干扰缺点：质量准确度低，质荷比准确到0.1。,.,12,MALDI常用点靶方法,干滴法（DriedDroplet）样品和基质充分混合，点样样品靶上。注意：以HCCA和DHB为基质的样品，一般用干滴法点靶薄层法先将基质点于靶上，带基质结晶后，再把样品溶液点于基质的层上。注意：以HPA为基质的样品，都要采用薄层法。,.,13,点样方法：DriedDroplet,matrix,analyte,samplesolution,sampledeposition,Analytedispersedthroughoutmatrixcrystals,EnablingLifeScienceToolsBasedonMassSpectrometryTM,.,14,MALDI-TOF质谱仪的使用,标准品点靶；样品点靶；进样品靶；质谱测试和图谱保存：flexcontrol软件；图谱读取和分析：flexanalysis软件,.,15,点靶注意事项,移液枪的使用取不同试剂，需要更换一次性枪头。点靶注意事项防止基质污染，防止标准品污染，防止样品靶污染，防止试剂污染防止样品靶跌落点靶时，枪头请勿接触样品靶（悬点）点完靶，请在靶表相应位置标明样品名,.,16,进靶和退靶,点击仪器右侧面的绿色按钮（loadandeject按钮）。在flexControl软件里，点击carrier后面按钮,进退靶按钮,.,17,质谱测试和图谱保存,质谱测试的软件是：flexcontrol打开软件选择方法校准仪器的参数（与ESI-MS（LCQ）差别）扫描样品保存数据上传数据至大型仪器管理平台文件系统,.,18,打开桌面Flexcontrol软件,双击打开,flexcontrol,.,19,选择方法,选择方法,.,20,方法的选择,根据分子量大小选择相应的方法方法路径：D:methodsflexcontrolmethodsusualmethod一般样品正离子都能出峰；对于正离子模式不出峰的样品，改换为负离子模式的方法扫描。更换方法时，对以前的方法不要保存。,.,21,选择方法,L:线性模式R:反射模式P:正离子模式N:负离子模式PepMix:多肽混合物，适合范围700-4000DaProtMix:蛋白混合物，适合范围500020000DaClinProt:多肽/蛋白化合物，适合范围100020000Da66kDa:大分子蛋白，适合范围20000-100000DaProteomics_HPC:高精度校正，适合范围700-4000DaRP_lowmolecular_HPC高精度校准，适合范围100-1000Da,.,22,2.反射模式；正离子；高精度；700-4000Da；与RP_PepMix.par差别不大,1.反射模式；正离子；700-4000Da,3.线性模式；正离子；700-4000Da,4.反射模式；负离子；700-4000Da,5.线性模式；正离子；5000-20000Da,6.线性模式；负离子；700-4000Da,7.反射模式；正离子；100-1000,.,23,Flexcontrol的按钮,检测范围，可微调,扫描区,放大,表峰,显示单次扫描,显示叠加图,.,24,保存数据的按钮,.,25,校准仪器的参数,.,26,扫描标准品时，出峰太弱，多叠加几次。点击Calibrate，选中叠加图，点击自动校准（automaticassign），点击apply，即完成自动校正。如果自动校准通过不了，进行手动校准。注意：必须有三个以上的点匹配上，匹配点越多越好,.,27,手动校准,.,28,扫描样品和保存数据,找到样品点的位置扫描样品，叠加并保存数据注意：数据要保存到课题文件夹内，例如：刘育课题组数据保存到D:dataLiuyu201106,.,29,在flexAnalysis打开,保存的路径,样品的名字,保存的是叠加图,FlexAnalysis方法，可不选择,.,30,数据的上传,找到所保存的数据文件右键点击发送到压缩文件夹（zipped）打开大型仪器管理系统网站（）文件系统，上传压缩后的数据文件夹。,.,31,.,32,MALDI质谱图解析,常见离子峰：正电荷模式：加质子峰；加合碱金属峰（加Na+峰；加K+峰）;减e-峰负电荷模式：加e-峰，加Cl-多出现单电荷分子离子峰，双电荷和多电荷峰弱或几乎不出现。,.,33,MALDI-TOF对样品的要求,MALDI优点：耐受高浓度的盐、缓冲剂和其他非挥发性的成分。两种杂质严重影响MALDI测试：离子