病毒感染实验室诊断与防治原则医学PPT

病毒感染实验室诊断与防治原则,医学病毒学,Medical Virology,目 录,1,2,病毒感染实验室诊断,病毒感染防治原则,1.病毒感染实验室诊断,病毒感染标本采集与送检 尽早采集标本：发病初期（急性期）易检出病毒。 注意无菌操作：杂菌污染可影响检测效果。 采集合适部位标本：不同疾病及病程采集不同标本。 标本尽快送检：病毒离开活体后室温下易死亡，标本低温暂存(-70)，病变组织保存于50%甘油缓冲盐水，可抑制杂菌生长，鼻咽分泌液、粪便等标本加抗生素。 血清标本采集： 尽量采取急性期与恢复期双份血清，4暂存或-20保存，血清学试验前需灭活补体。,1.病毒感染实验室诊断,病毒标本直接镜检 光学显微镜检查：病理标本或含有脱落细胞及针吸细胞的标本可检查病毒包涵体，少用。 荧光显微镜检查：荧光标记抗体染色镜检，常用。 透射电镜检查：很少用。,A：正常细胞；B：病毒感染细胞,狂犬病毒内基小体,A,B,1.病毒感染实验室诊断,病毒分离培养：细胞培养、鸡胚接种、动物接种法。 细胞培养法：原代、二倍体、传代细胞培养，不同病毒选择不同细胞进行分离培养。,1.病毒感染实验室诊断,病毒在培养细胞内增殖的检查与鉴定 细胞病变效应(CPE)：一些病毒增殖后引起细胞折光性下降、圆缩或肿胀、聚集或融合、脱落和死亡。,1.病毒感染实验室诊断,红细胞吸附：流感病毒和某些副粘病毒感染细胞膜上可出现病毒的血凝素，能吸附豚鼠、鸡及人红细胞。抗血清或抗体可抑制红细胞吸附现象发生，称为红细胞吸附抑制试验，可作为此类病毒增殖及初步鉴定指标。,腮腺炎病毒感染细胞吸附红细胞,1.病毒感染实验室诊断,干扰现象：一种病毒感染细胞后可以干扰另一种病毒在该细胞中的增殖。,风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(),埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(),埃可病毒风疹病毒感染细胞 风疹病毒不增殖，CPE(),细胞代谢改变：如病毒感染细胞后可使培养液pH发生改变，可作为初步判断病毒增殖的指标。,1.病毒感染实验室诊断,鸡胚接种法：不同病毒分别接种鸡胚绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔或卵黄囊等部位，常用于流感和腮腺炎病毒等分离培养，但很多病毒鸡胚中不能增殖。,1.病毒感染实验室诊断,动物接种法：常用小鼠或大鼠，根据不同病毒组织亲嗜性差异，分别鼻内、脑内、腹腔或静脉等途径接种，如流感病毒通常鼻内接种、嗜神经病毒常用脑内接种，接种后观察动物发病和死亡情况。,1.病毒感染实验室诊断,病毒数量与感染性测定 空斑形成单位(PFU)：单个病毒颗粒增殖后所形成的局限性细胞感染病灶，中性红染色后出现因感染细胞死亡裂解而未着色的空斑。,50%致死量(LD50)、50%组织细胞感染量(TCID50)：使50%鸡胚或动物死亡、50%细胞发生病变最小病毒量。,病毒感染细胞后形成的孔斑,1.病毒感染实验室诊断,病毒抗原检测 免疫荧光法(IFA)：使用荧光素标记抗体检测病毒抗原，具有快速、特异的优点，使用较广。 酶免疫技术(EIA)：多用ELISA。 胶体金免疫层析法(GICA)：快速、简便，但灵敏度和特异性不是很高，仅用于初筛或初步鉴定。 化学发光免疫法(CLIA)：具有简便、快速、敏感、特异、廉价、稳定等优点，是近年发展起来的新技术，目前临床上用于检测甲型和乙型肝炎病毒。,1.病毒感染实验室诊断,病毒核酸检测 PCR：检测DNA病毒，如常规PCR、套式PCR和实时荧光定量PCR。 RT-PCR：检测RNA病毒，如常规RT-PCR、套式RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR。 核酸杂交：特异性标记探针检测病毒核酸。 基因芯片：可同时检测多种DNA或RNA病毒不同片段，具有高通量、高敏感性和特异性等优点。,1.病毒感染实验室诊断,病毒感染血清学诊断 IgM出现早、消失快，故可用于病毒现行感染的血清学诊断；IgG出现晚、维持时间长，一般仅用于调查人群对某些病毒的免疫水平以及检测预防接种效果。 常用方法：补体结合试验、血凝抑制试验、使用双份血清标本的ELISA(第二份血清效价较第一份血清升高4倍及以上)，其中 lgM捕捉ELISA （广泛用于各种病毒感染性疾病的早期诊断。,2.病毒感染防治原则,病毒感染的预防 人工主动免疫：接种疫苗，目前使用的疫苗有全病毒灭活疫苗(如乙型脑炎和狂犬病疫苗) 、减毒活疫苗(如脊髓灰质炎疫苗) 、基因工程疫苗(乙肝rHBsAg疫苗)。 人工被动免疫：注射含特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白抗体、细胞因子(干扰素、胸腺肽、转移因子)等细胞免疫制剂。,2.病毒感染防治原则,病毒感染的药物治疗 抗病毒化学制剂：核苷类药物：被细胞磷酸激酶作用后掺入子代病毒DNA中使病毒不能复制和转录，如治疗病毒性疱疹的阿昔洛韦、治疗乙肝的拉米呋啶、治疗爱滋病的司他夫定；非核苷类似物：抑制病毒DNA或RNA逆转录酶活性，如治疗病毒性疱疹和乙肝的膦甲酸钠、治疗爱滋病的奈韦拉平；蛋白酶抑制剂：能与病毒蛋白酶结合而抑制其活性，如治疗爱滋病的沙喹那韦；其它抗病毒药物：阻断甲型流感病毒吸附或脱壳的金刚烷胺、抑制流感病毒神经氨酸酶活性的扎那米韦。,2.病毒感染防治原则,干扰素和干扰素诱生剂：干扰素：主要用于乙型和丙型肝炎病毒、人呼吸道合胞病毒等感染的治疗；干扰素诱生剂：如Poly I:C等。