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细胞化学染色,概 念,细胞化学染色是以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学物质（糖类、蛋白质、脂类、酶类、铁、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。 细胞原位的化学反应,临床应用,辅助判断急性白血病的细胞类型辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断（Fe、NAP等）,FABALL（急性淋巴细胞白血病）L1、L2、L3AML（急性髓细胞白血病） M0 急性粒细胞白血病（微分化型） M1 急性粒细胞白血病（未成熟型） M2 急性粒细胞白血病（部分成熟型） M3 急性早幼粒细胞白血病 M4 急性粒单核细胞白血病 M5 急性单核细胞白血病 M6 急性红白血病 M7 急性巨核细胞白血病,细胞化学染色的基本步骤,固定,显示,复染,保持细胞结构及化学成分不变，并使血膜在染色、冲洗过程中不易脱落损坏,形成稳定的有色沉淀，显示出被检测的化学物质,既能显示细胞结构又能清楚地看出细胞化学染色结果,细胞化学染色的种类,过氧化物酶染色（POX)、苏丹黑染色（SBB)过碘酸-雪夫反应（PAS）又称糖原染色酯酶染色酸性磷酸酶染色（ACP)铁染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）,过氧化物酶染色Peroxidase stain, POX,染色原理（四甲基联苯胺法）,H2O2溶酶体颗粒中的H2OO2四甲基联苯胺O2联苯胺蓝联苯胺蓝亚硝基铁氰化钠O2蓝色物质（沉淀）,正常血细胞的染色反应,粒细胞系统原粒（可为阴性）分叶（阳性程度逐渐增强）嗜酸阳性最强嗜碱阴性单核细胞系统阴性或弱阳性（颗粒少而细）其他血细胞阴性,临床意义,1.ALL：原始细胞的POX阳性3%2.AML：原始细胞的阳性3%在多数的M1、绝大部分M2和M3中，原始细胞的阳性率大于85%，M3呈强阳性；M4和M5时，原单有时可呈弱阳性，但绝大多数的原单是POX阴性。M6，原粒和幼稚粒细胞是POX阳性，幼红细胞是POX阴性。M7，血小板POX的活性只能在超微结构上证实。,POX染色的临床应用,POX染色是辅助诊断急性白血病细胞类型首选、最重要的细胞化学染色，主要用于急性白血病的鉴别诊断。 急性粒细胞白血病时，其原、幼细胞呈阳性反应，以APL 反应最强;急性单核细胞白血病时，原幼细胞呈弱阳性反应 ALL时呈阴性反应,用途：鉴别急性淋巴系与非淋巴系白血病结果：粒系(+)；单核系()； 淋巴系(),过氧化物酶染色( peroxidase，POX ),苏丹黑染色Sudan black, SBB,苏丹黑染色,原理：SBB能溶解于细胞内的含脂结构，使脂类物质显示出来，呈棕黑色或深黑色。正常细胞的染色反应同POX染色。临床评价 POX染色特异性高于SBB染色 SBB染色敏感性高于POX染色,过碘酸-雪夫反应(糖原染色）Periodic acid-Schiff reaction, PAS,染色原理（PAS）,乙二醇基（多糖类物质中）过碘酸双醛基无色品红紫红色化合物,正常血细胞的染色反应,粒细胞系统原粒（可为阴性）分叶（阳性 程度逐渐增强）嗜酸胞质呈红色，颗粒不着色嗜碱反之红细胞系统 阴性单核细胞系统 原单（可为阴性）， 其他阳性,正常血细胞的染色反应,淋巴细胞系统大多数阴性，少数阳性。巨核细胞系统 巨核细胞和血小板阳性，阳性反应的程度随细胞的发育成熟而增强。,临床意义,红细胞系统疾病 红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）；某些红系良性疾病如缺铁贫、巨幼贫等阴性。白细胞系统疾病 ALL：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗颗粒或块状） 急粒：少数原粒呈阳性，阳性细颗粒状 急单：可呈阳性，阳性细颗粒状,PAS临床意义,AML-M6幼红细胞呈阳性反应,MA幼红细胞呈阴性反应,ALL,AML-M6,AML-M6 PAS(+),AML-M5,M5 PAS(+),AML-M7,M7 PAS(+),PAS染色的应用,鉴别淋巴系统增生的性质： 凡恶性增生时PAS反应多呈强阳性反应，见于急、慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤等。鉴别红系增生的性质： 凡恶性增生者， 如红血病、红白血病其原、幼红细胞多 呈强阳性反应；增生性贫血、巨幼贫， PAS多为阴性。有助于巨核细胞白血病的诊断,酯酶染色,-醋酸萘酚酯酶染色(-NAE),原理 -醋酸萘酚 PH中性 -醋酸萘酚酯酶 -萘酚+重氮盐(坚牢蓝B) (黑色或灰黑色),正常血细胞的染色反应,单核细胞、粒细胞、淋巴细胞（均可+）仅单核细胞的阳性可被氟化钠抑制(NaF抑制率50%)。NaF抑制率=抑制前的阳性率/积分-抑制后的 抑制前的阳性率/积分 100%,-NAE对诊断急性白血病的作用,酸性磷酸酶染色Acid phosphatase, ACP,ACP染色的临床意义,铁染色Ferric stain,染色原理（Fe染色）,铁+亚铁氰化钾 酸性环境 亚铁氰化铁（蓝色）,正常血细胞的染色反应,正常人骨髓中的铁主要存在于骨髓小粒及幼红细胞中，分为细胞外铁和细胞内铁。细胞外铁：骨髓小粒的巨噬细胞中细胞内铁: 中幼红细胞、晚幼红细胞 及红细胞中 铁粒幼红细胞-含铁颗粒的中、晚幼红细胞 铁粒红细胞-含铁颗粒的红细胞,细胞外铁的观察,低倍镜观察骨髓小粒中的铁，阳性结果呈弥散性、颗粒状、小珠状或块状蓝色。,细胞内铁的观察,5,3,5,3,环形铁粒幼细胞,参考范围： 细胞外铁： （+）（+） 细胞内铁：铁粒幼红细胞12% 44%，以型为主，少数为型，无环形铁粒幼红细胞及铁粒红细胞。,临床意义,MDS,中性粒细胞碱性磷酸酶染色Neutrophilic alkaline phosphatase NAP,染色原理（NAP染色）,Kaplow偶氮偶联法：中性粒细胞胞质中的碱性磷酸酶在PH9.6的碱性条件下能水解磷酸奈酚钠底物，生成奈酚，后者与偶氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀定位于胞质中的酶活性处。（紫黑色颗粒） 钙-钴法：红色颗粒,正常血细胞的染色反应,NAP主要存在于中性成熟粒细胞（包括中性杆状核粒细胞和中性分叶核粒细胞）胞浆内，故中性成熟粒细胞胞浆呈阳性，其他细胞基本呈阴性。,参考范围： 阳性率40%； NAP积分值为30130分。,临床意义,NAP积分增加： 细菌性感染(包括类白血病反应）、再生障碍性贫血、某些骨髓增殖性疾病、慢性粒细胞白血病（加速期、急变期）、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴