Chap-药物的含量测定方法PPT课件

-,1,化学分析法,重量分析,容量分析,含量测定,仪器分析法,效价测定（生物学法）,可见紫外分光,高效液相色谱法,气相色谱法,-,2,药物的含量测定,容量分析法,三种分析方法,光谱分析法,色谱分析法,特点,操作简单、结果准确，耐用性高，但专属性差,特点,特点,简便快速、灵敏度高，有一定的准确度，但专属性稍差,灵敏度与专属性都高，有一定的准确度，但结果需要对照品,适用于准确度与精确度要求较高的样品测定,适用于灵敏度要求较高，样本量较大的分析项目,适用于专属性和灵敏度要求较高的复杂样品,-,3,第一节定量分析方法的分类与特点,容量分析法,定义,将已知浓度的滴定液，由滴定管滴加到被测药物的溶液中，直至滴定液与被测药物反应完全，然后根据滴定液消耗的浓度和被消耗的体积，按化学计量关系式计算出被测药物的含量。,亦称,滴定法,-,4,特点,1.方法简便易行：仪器价廉易得，操作简便快速,2.方法耐用性高：影响测定的试验条件与环境因素少,3.测定结果准确：误差低于0.2%,4.方法专属性差：对相近杂质干扰缺少选择，适用于主成分含量较高的样品(如原料药)分析,-,5,第一节定量分析方法,容量分析法有关计算,例:用碘量法测定维生素C的含量时，中国药典规定：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相当于8.806mg的维生素C（C2H8O6）,T(滴定度):1ml滴定液(mmol/L)相当于被测药物的毫克数,-,6,被测药物,滴定液,药物分子量,滴定液浓度,滴定度的计算,-,7,示例一计算VitC的滴定度T,碘量法测定VitC含量M(C6H6O6)=176.13，C(I2)=0.05mol/L,m=0.05mol/L,1,1,M=176.13,-,8,示例二异烟肼的滴定度,溴酸钾法测定异烟肼含量M(C6H7N3O)=137.14，C溴酸钾=0.01667mol/L,a,b,-,9,滴定含量计算,W测=NFTV,取用倍数,浓度校正因数,滴定度,消耗体积,例:VitC的含量测定:精密称取本品0.1332g,置锥形瓶中,加稀醋酸与新沸过的冷蒸馏水的混合液(1:10)110ml,加淀粉批示液1ml,用碘滴定液(0.05014mol/L)滴定至蓝色,用去15.02ml,每1ml的碘液(0.05mol/L)相当于8.806mgC6H8O6，计算本品是否符合药典规定的含量限度。药典规定含C6H8O6不得低于99.0%。,浓度校正因数,滴定度,消耗体积,F=,-,10,计算步骤,W测=NFTV,8.80610-3,15.02,=0.13263(g),VitC的百分含量(%),VitC%=,=,=99.57%,=1,0.1332样品中VitC含量(W测),-,11,又例非那西丁含量测定,精密称取本品0.3630g加稀盐酸回流1小时后，放冷，用亚硝酸钠滴定液（0.1010mol/L）滴定，用去20.00ml。每1ml亚硝酸钠液（0.1mol/L）相当于17.92mg的C10H13O2N，请计算非那西丁的含量。,-,12,需做空白试验的计算公式,W测=NFT（V-V0）,例:萘普生的含量测定：精密称取本品0.4960g，加甲醇45ml溶解后，再加水15ml与酚酞指示剂3滴，用NaOH滴定液（0.1078mol/L）滴定，同时用空白试验校正，求萘普生百分含量。中国药典规定每1mlNaOH滴定液（0.1mol/L）相当于23.03mgC14H14O3。按干燥品计算，含C14H14O3不得少于98.5%。滴结果如下：V=19.85ml，V0=0.10ml，干燥失重=0.40%。,-,13,光谱分析法,药典收载,紫外可见分光度法,原子吸收分光光度法,红外分光度法,荧光分析法,火焰光度法,二、光谱分析法,-,14,紫外可见分光度法,基于物质对紫外区(200400nm)和可见光区(400760nm)的单色光辐射建立起来的光谱分析法,朗伯-比尔定律,基础,-,15,紫外可见分光度法,方法特点与适用范围,1.简便易行：本法使用的仪器价格比较低廉，操作简单，易于普及,2.灵敏度高：适用于低浓度试样分析,3.准确度较高：本法误差在2%5%之间，适用于对测定结果的准确度要求较高的样品,4.专属性较差：本法通常不受一般杂质的干扰，但对结构相近的有关物质缺乏选择性。,本法比较少应用于原料药的含量测定，可用于制剂的含量测定，更多的应用于生物制剂的定量检查,本法紫外区须选用石英比色皿，比色皿一般为1cm，吸光度在0.30.7之间为宜，选用最大吸收光波长。,-,16,紫外可见分光度法含量测定方法,3种方法,对照品比较法,吸收系数法,计算光度法,(少用),-,17,紫外可见分光度法含量测定方法,1.对照品比较法,分别配制供试品溶液和对照品溶液,所用溶剂量两者相同,在规定的波长下测定吸光度.按下式计算结果,-,18,紫外可见分光度法含量测定方法,2.吸收系数法,吸收系数法:引入吸光系数的含量计算方法,含量%=,（）供（）标,药典记载,-,19,例已知VitB12在361nm处的百分吸收系数为207，现测得其水溶液的吸收度为0.414，吸收池厚度为1cm，求其浓度。,解：C=,=0.00200(),0.4142071,g/100ml,单位?,-,20,例精密称取VitB12供试品25.0mg，加水溶解并稀释制成1000mL，于1cm厚的吸收池中，在361nm处测得吸收度为0.507，已知其百分吸收系数为207，求其百分含量。,解：C=m/V=2510-3/1000（g/ml）=（g/100ml）,2.510-3,()供=A/CL,VitB12%=,（）供（）标,=202.8/207=97.97%,=0.507/(2.510-31),=202.8,-,21,例用UV法测定对乙酰氨基酚的含量：精密称取本品0.0410g，置250ml量瓶中，加0.4%NaOH溶液50ml,溶解后,加水于刻度,摇匀。精密量取5ml,置100ml量瓶中,加0.4%NaOH溶液10ml,溶解后,加水至刻度,摇匀。在257nm处测得吸收度为0.580，按其百分吸收系数715计算，求其百分含量。,解：C=m/V=（g/100ml）,8.210-4,()供=A/CL,VitB12%=,（）供（）标,=707.3/715=98.93%,=0.580/8.210-4,=707.3,-,22,特点：灵敏度高，可达10-1010-12g/ml要求低浓度下测定须做空白测定荧光弱的药物可衍生化后测定,(二)荧光分析法,-,23,(三)色谱分析法,1.HPLC,1.1内标法,As：内标物质峰面积或者峰高AR:对照品的峰面积或者峰高Cs:内标物质浓度CR：对照品浓度,两步:(1)测f;(2)测含量,(1)测f(用标准品与内标物),-,24,As：内标物质峰面积或者峰高Ax:供试品的峰面积或者峰高Cs:内标物质浓度f：校正因子,(2)测含量(用样品与内标物),-,25,示例一炔诺酮的含量测定,照高效液相色谱法(附录D测定),色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(65:35)为流动相，检测波长为244nm。理论塔板数按炔诺酮峰计算不低于1500，炔诺酮峰与内标物质峰的分离度及主成分峰后一杂质峰与主成分峰的分离度均应符合要求。内标溶液的制备取黄体酮约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。,-,26,测定法取本品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶液2ml与内标溶液3ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取20l注入液相色谱仪，记录色谱仪，记录色谱图；另取炔诺酮对照品适量，精密称定，同法测定。按内标法以峰面积计算，即得。,-,27,例HPLC法测定磺胺嘧啶的含量,对照品+内标溶液配制：精密称取对照品50.0mg，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度,摇匀。精密量取5ml,置25ml量瓶中,精密加内标溶液(0.20mg/ml)5ml,加流动相至刻度,摇匀。供试品+内标溶液配制：精密称取本品50.5mg，照上法配制。取上述两种溶液各10l进样，测得对照品和内标峰分别为1350和1040，供试品峰和内标峰分别为1313和1013。求SD的含量。,解：由于对照品和供试品稀释倍数相同，所以直接按质量代替浓度计算,=f=,=f=,解之,得:,mx=49.924(mg),SD%=49.924/50.5=98.86%,-,28,2.外标法,-,29,(二)GC,内标法,-,30,第二节定量分析样品的前处理方法,不经有机破坏,经有机破坏,直接测定,配位滴定法氧化还原滴定法,水解后测定,酸水解碱水解,经还原分解后测定,湿法破坏凯氏定氮法,干法破坏,高温灼烧法氧瓶燃烧法,-,31,第二节定量分析样品的前处理方法,(一)、直接测定法,葡萄糖酸钙EDTA配位滴定富马酸亚铁邻二氮菲-硫酸铈滴定葡萄酸锑钠间接碘量法,(二)、经水解后测定法,适用范围：金属原子不直接于碳原子相连或某些C-M键结合不牢固的有机金属药物。,-,32,第二节定量分析样品的前处理方法,1、碱水解法,银量法返滴定,2、酸水解法,适用范围：含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物。,EDTA配位滴定,-,33,第二节定量分析样品的前处理方法,(三)、经还原分解后测定法,适用范围：碘原子直接与芳环连接的含碘有机化合物。,泛影酸,3NaI,-,34,第二节定量分析样品的前处理方法,三、经有机破坏的分析方法,含氮、硫、硫柳汞、氯化钠的生物制品、含氮有机合成药物测定的前处理和生物制品中金属元素测定时生物基质的去除。,H2SO4-HNO3H2SO4-HClO4H2SO4-H2SO4HNO3-KMnO4,分解剂/消化剂,辅助分解剂,凯氏定氮法,测定含有氨基和酰胺结构的药物结构,(一)湿法破坏,-,35,第二节定量分析样品的前处理方法,原理,将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热，药物分子中有机结构被“消化”成CO2和H2O，有机结合的氮转化为无机氮，与过量的硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，经碱化后释放出氨气，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定液滴定。,常量法含氮量2530mg半微量法含氮量1.02.0mg,-,36,第二节定量分析样品的前处理方法,凯氏烧瓶,K2SO4(提高消解温度)CuSO4(加快消解速度),硫酸,碱液,硼酸(吸收液)甲基红-溴甲酚绿指示剂,硫酸滴定空白校正,先用强酸水解,再用含碱硫代硫酸钠中和,最后用碱释放出氨气，并蒸馏出之,-,37,(二)干法破坏,1.高温灼烧法,用于含卤素、含磷药物和药物中砷盐的检查。常加入无水碳酸钠、硝酸镁、氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化。,2.氧瓶燃烧法,第二节定量分析样品的前处理方法,系指将含有待测元素的有机药物置于充满氧气的密闭的密闭的燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底分解为CO2和H2O，待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，再根据其性质和存在方式选择方法进行分析。,-,38,第二节定量分析样品的前处理方法,燃烧时待测物转化成不同价态的无机物以供测定,滤纸包装样品,-,39,第三节药品分析方法的验证,药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则药物稳定性试验指导原则缓释、控释制剂指导原则微囊、微球与脂质体制剂指导原则细菌内毒素检查法应用指导原则,目的：证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求效能指标：评价分析方法的尺度,效能指标包括:精密度,准确度,检测限,定量限,选择性,线性与范围,耐用性,-,40,第三节药品分析方法的验证,一、准确度（accuracy）,系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。,(一)含量测定方法,回收率(Recovery),回收试验,加样回收试验,33，至少9个测定结果,-,41,第三节药品分析方法的验证,二、精密度(Precision),系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之接近的程度。,表示：偏差(d)、标准偏差(s),、相对标准偏差(RSD),重复性:同一