高中生物选修 实验2 分离以尿素为氮源的微生物ppt精选课件VIP

实验2分离以尿素为氮源的微生物,.,实验原理：,脲或称尿素，是蛋白质降解的产物。人和其它哺乳动物的尿中都含有尿素，尿素一般不能直接被农作物吸收。有一些细菌含有脲酶，它们可以通过降解尿素作为其生长的氮源。选择以尿素作为唯一氮源即可分离出此类微生物。,.,选择培养基,定义：是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来(即提供有利于目的菌株生长的条件包括营养、温度、pH等，同时抑制或阻止其他微生物生长。,实例应用：1、培养基中加入抗生素可以筛选出抗生素抗性菌2、培养基中缺乏碳源时，可筛选出自养型生物,.,(1)全营养LB固体培养基：蛋白胨0.25g、酵母提取物0.12g、NaCl0.25g、琼脂糖0.5g、加水25ml。灭菌待用。(2)尿素固体培养基：0.025g葡萄糖、NaCl0.12g、K2HPO40.12g、酚红0.25mg、琼脂糖0.5g、加水15ml。灭菌待用。冷却到60时加入经G6玻璃漏斗过滤（使其无菌）的尿素溶液。,培养基中的尿素在细菌的脲酶催化下分解产生NH3，呈碱性，使细菌周围培养基的颜色发生变化：酸黄碱红,制备培养基：,.,步骤：,1、制平板：在60左右时，将两只三角瓶中已灭菌的LB固体培养基和尿素固体培养基，在酒精灯旁分别倒入两个培养皿中，在水平的超净台上摇匀，平放至凝固,.,步骤：,2、制备细菌悬液。在无菌条件下，将1g土样加到有99mL无菌水的三角瓶中，振荡10min，即成102土壤稀释液。依此法制备103、104和105的土壤稀释液。,（10倍稀释法：0.5mL悬液+4.5mL无菌水）,.,步骤：,3、用涂布分离法分离细菌。取104和105土壤稀释液各0.1mL，分别加入到LB培养基和尿素培养基中，用玻璃刮刀将菌液涂布到整个平面上,.,步骤：,4、培养细菌。将培养皿倒置，在37恒温箱中培养2448h，观察菌落数5、观察。全营养培养基中菌落较多，尿素培养基只有少量菌落。,.,思考与练习：,1、为什么要用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基？答：琼脂是未被纯化的混合物，内含一定的含N化合物，用琼脂糖替代琼脂后，微生物只能以尿素为唯一N源，利于对细菌的筛选。,.,思考与练习：,有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用？此类细菌使废弃物降解形成氨后将其利用，有利于自然界中的氮循环。防止尿素在自然情况下高温水解形成氨，并进一步形成一些化合物，使土壤板结,.,思考与练习：,3、有脲酶的细菌菌落周围为什么有着色的环带出现？此细菌能分解尿素产生氨，氨为碱性，酚红指示剂在碱性下为红色，标志着存在脲酶水解尿素的作用，红色区域大小代表脲酶活性强弱和含量的多少。,.,思考与练习：,4、与全营养培养基上的菌落数比较，为什么尿素培养基上只有少数菌落？答：说明能利用尿素的细菌只占少数。,.,.,1、土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答：,（1）培养基中加入尿素的目的是筛选，这种培养基属于培养基。（2）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的和，实验需要振荡培养，原因是,目的菌,选择,尿素,为目的菌提供氧气,葡萄糖,.,（3）图中将细菌转到固体培养基上时，常采用的方法接种，获得单菌落后继续筛选。（4）在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实