临床专用生化分析仪分析技术.ppt

第七章临床专用生化分析仪分析技术,教学要求和目标,掌握各分析技术的基本原理和分析方法熟悉各分析技术仪的结构组成特点，仪器的维护保养，质量控制和临床应用了解各分析技术仪的分类,第一节浊度自动化分析技术,一、浊度分析的基本原理,在一定条件下，可溶性抗原与抗体在液相中特异结合，形成有一定大小的抗原颗粒，使反应液出现浊度当光线通过介质中的复合物颗粒时吸收、透射、散射和折射通过测量透射光或散射光信号强弱被测物的量。,浊度分析方法的分类检测器的位置及接收光信号的性质分透射免疫浊度法（turbidimetryimmunoassay散射免疫浊度法（nephelometryimmunoassay测定方式分：终点浊度法与速率浊度法浊度形成原理分：沉淀反应浊度法与胶乳凝集比浊（粒子增强免疫浊度法）,终点散射浊度法检测反应终点与起始点之间信号变化的方法速率散射浊度法速率是指在单位时间内抗原抗体结合反应形成复合物的量。是在抗原与抗体反应的最高峰测定其复合物形成的量，该峰值的高低与抗原的量成正比。,粒子增强免疫浊度法选择大小适中、均匀一致的胶乳颗粒吸附或交联抗体；当遇到相应抗原时，则发生聚集。单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线可透过。当两个或更多胶乳颗粒凝聚时，透过光减少，光减少的程度与胶乳凝集量成正比。灵敏感度较高。,二、浊度分析仪的分类和基本结构,自动生化分析仪散射浊度分析仪应用较为普遍的有固定时间散射分析仪、速率散射分析仪和双光路自动免疫浊度分析仪,自动散射浊度分析仪的组成,分析系统：用于加样、稀释、保温和测试等。包括散射测浊仪、加液系统、试剂转盘、样品转盘、卡片阅读器等计算机系统：用于输入病人数据、选择程序菜单、计算参考曲线和储存测试结果,散射浊度分析仪光路示意图,三、浊度分析仪的保养,常规保养日保养关机前冲洗管道，以防止管道阻塞开机前应检查注射器，防止漏液检查D、B、A、W液面高度光路校正周保养更换流动比色杯和小磁棒清洁探针的外部检查蠕动泵和钳制阀控制着管路中液体的流动情况,月保养更换注射器插杆顶端空气过滤网冲洗疏通标本和抗体探针的内部半年保养更换管道机械润滑,四、浊度分析的质量控制,（一）抗原过剩校正检测方法：连续监测抗原抗体反应曲线，呈现异常追加抗体，浊度继续增大标本两种稀释度测定，浓度高的浊度反而低,（二）减少伪浊度伪浊度：除待测抗原抗体复合物产生的浊度外，其它可引起透射光或散射光变化的浊度都称为伪浊度减少伪浊度的方法：采用新鲜、合格标本保持比色杯和稀释杯清洁使用合格的抗体试剂严格控制增浊剂的浓度,（三）选择合适的入射光波长入射光波长的选择原则：除了抗原抗体免疫复合物外，反应体系中的其他成分对入射光的干扰应为最小，因为其他成分吸收了部分入射光，透射比浊法测定结果将使抗原浓度偏高，而散射比浊法测定将使抗原浓度偏低。,（四）仪器校正选择合适的校准品校准曲线的绘制校准曲线的形状取决于抗血清和促聚剂的浓度的选择，也与免疫浊度法类型、校正方法及校准品的质量有关。多推荐5点或6点定标。适当的数学方法进行曲线拟合,五、特定蛋白浊度分析的临床应用,特定蛋白临床常规项目,免疫功能监测免疫球蛋白：IgG、IgM、IgA、C3、C4临床意义：IgG、IgA、IgM检测有助于了解机体抗感染能力，有助于疾病的正确诊断和有效治疗。在免疫复合物疾病中，C3、C4检测可以了解其消耗程度。,适应症：免疫力低，反复感染病人；自身免疫性疾病；多发性骨髓瘤；慢性肝病；非何杰金氏淋巴瘤；白血病；良性单克隆免疫球蛋白病；先天性或获得性低免疫球蛋白血症；对白、球蛋白比例异常者的随访术后感染、移植排斥反应,第二节电解质自动化分析技术,一、电解质分析的原理和方法,离子选择性电极（ionselectiveelectrodeelectrode，ISE）是一类用特殊敏感膜制成，对溶液中某种特定离子具有选择性响应的电化学传感器。常用于测量离子的活度或浓度。,ISE基本结构通常由电极管、内电极、电极内充溶液和电极膜（或称敏感膜）四个部分组成。,电极电位产生基于膜材料与溶液界面发生的离子交换反应当电极置于溶液中时，由于离子交换和扩散作用，改变了二相中原有的电荷分布，因而形成双电层，其间产生一定的电位差即膜电位ISE的电位与溶液中特定离子活度的对数呈线性关系，即符合Nernst方程,3.电极电位测量ISE的EISE值不能直接测定必须将ISE与参比电极共同浸入待测样品中组成一个原电池，通过测量E电池来测定EISE值。在一定条件下，原电池的电动势与被测离子活度的对数呈线性关系。,（二）ISE电位分析方法标准比较法（或直读法）：指在pH计或离子计上直接读出数值的方法，适用于少量样本的分析标准曲线法：适用于大批量的试样分析标准加入法：当待测溶液组分较复杂，很难控制相同的离子强度时，选用标准加入法,（二）ISE样本测定方式,直接法：指样本不经稀释直接测量离子活度。全血测定，迅速方便、结果准确，不会因血清中水体积所占比例改变而影响结果间接法：样本经缓冲液稀释后由电极测量离子活度。样品用量少，不易堵塞管道，电极寿命长直接法比间接法测定结果高35，因为血脂及蛋白质等不包含有K、Na,二、电解质分析仪分类和结构,（一）电解质分析仪的分类半自动和全自动电解质分析仪湿式和干式电解质分析仪电解质分析仪、含电解质分析的血气分析仪、含电解质分析的自动生化分析仪,离子选择性电极组：包括指示电极和参比电极通常采用流动式毛细管结构，即在毛细管的侧臂开多个小孔，孔里插入各种离子选择性电极负压吸样多参数同时测量,钠、钾、氯电极钠电极：铅硅酸钠的玻璃膜电极钾电极：缬氨霉素和聚氯乙烯（PVC）膜电极氯电极：银氯化银电极,液路系统常由标本盘、溶液瓶、驱动电机、采样针、电极系统、蠕动泵、三通阀、管道等组成。用于将样品、定标液和稀释液等吸取和输送至电极管道中，并完成电极、管道冲洗与废液排除,电路系统微处理器、信号放大及数据采集、蠕动泵和三通阀控制、输入输出、电源电路等五大模块组成。共同完成对仪器各部件的动作控制，对电极mV值进行处理和计算，并显示或打印输出结果。,程序控制系统包括仪器微处理系统、仪器设定与测定和自动清洗程序等。显示操作系统键盘、液晶显示、触摸屏等,三、电解质分析仪的维护和保养,每日维护检查试剂量，清洁仪器表面及吸样探针，弃去瓶中的废液每周维护清洗液路，除去蛋白质、脂类沉积和盐类结晶。,每月维护用酒精棉球清洁泵管和不锈钢转轴，在泵管的弯处涂硅油或白色凡士林等润滑剂。每季度进行MV值试验检查电极的MV值是否符合说明书要求。,电极系统的保养定期更换电极膜和电极内充液定期进行去蛋白清洗及电极的活化液路系统的保养保证液路无蛋白质、脂类沉积和盐类结晶每天关机前均进行管路的清洗冲洗完毕重新定标,仪器的保养,四、电解质分析的质量控制,分析前质量控制样本的采集与处理采血器具干燥、清洁减少输液对结果的影响。采血中应避免溶血。尽快送检，勿剧烈振荡，避日光照射；不能立即测定应分离血清，置于4冰箱中保存。与空气接触时，CO2，pH,抗凝剂的影响抗凝剂：不能用EDTA、柠檬酸盐或草酸盐等抗凝剂。肝素常不超过20U/ml血样。药物的影响药物或其代谢产物引起患者体内被测物的浓度发生改变。如利尿剂促进K+、Na+、Cl从尿中排出。药物直接对ISE的响应产生影响：如水杨酸盐对抗凝剂的影响Cl电极、维生素C对K+电极响应有干扰等,分析中质量控制定标校正液各厂家的定标校正液不能互换使用电极保养使用一段时间后就需要保养质控品选用质量好、性能稳定和对离子选择性电极响应没有干扰的质控血清,分析后的质量控制异常结果的分析取舍：如Glu、HCO3、K+过高：血样放置过长多项检测结果过低：样品稀释比例不对、有纤维蛋白凝块或吸样针部分堵塞对某些急诊检验项目特别异常的结果，应及时与临床联系，以便紧急处置,五、电解质分析技术的临床应用,低钠血症和高钠血症血清钾增高和血清钾降低低氯血症和高氯血症,电泳自动化分析技术,一、影响电泳的因素,待分离物质的性质粒子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快。缓冲液的性质溶液的pH值影响其带电性质、净电荷量。缓冲液离子强度一般在0.020.20molkg之间。,电场强度电压越高，电场强度越大，迁移率越大，带电粒子移动越快支持介质的性质包括黏性吸附对泳动的阻碍作用，支持介质的分子筛和电渗作用温度升高时，介质黏度下降，分子运动加剧，引起自由扩散加快、区带变宽和分辨率下降,二、电泳仪的分类和基本结构,电泳技术的分类工作原理的不同分为：移动界面电泳、区带电泳、稳态电泳或称置换电泳有无支持物分为：自由电泳和支持物电泳（区带电泳）。电源控制的不同分为：恒压电泳、恒流电泳、恒功率电泳。,自动化程度的不同分为：手工操作、半自动电泳、全自动电泳、全自动电泳分析系统其他分类方式：支持载体的装置形式，区带电泳可分成水平平板电泳、垂直板状电泳、垂直柱状电泳、U型管电泳、倒V字形电泳、毛细管电泳等。,电泳仪的基本结构,手工电泳仪电源、电泳槽、电泳条带分析装备(或扫描仪)三部分的结构分离，加样、电泳、电泳后的染色和脱色等均需手工操作，人工设置参数完成电泳。,自动电泳分析仪将电源、电泳槽、烘箱、染色缸等组合在一起，采用计算机对电泳过程进行控制，部分乃至全部操作由电泳仪完成；分为半自动或全自动电泳仪。,三、自动电泳仪的使用和保养,每天保养重点是电极的维护，每天电泳后，应当用干滤纸擦净电极，避免缓冲盐沉积于电极上或酸碱对电极的腐蚀。每月保养重点是扫描系统的比色滤镜及光源。,四、电泳分析的质量控制,电泳分析前质量控制电泳分析方法的选择加强实验室与临床医生的沟通，宣传实验室所开展的电泳技术及应用；全面了解电泳仪的结构和原理、电泳结果的意义，合理使用电泳分析方法。,标本采集：宜采用新鲜血清，避免标本溶血。脑脊液(CSF)标本新鲜最佳；CSF免疫固定电泳必须对同一病人同时采集CSF和血清标本。尿液标本以新鲜的晨尿为佳。标本保存：不能立即电泳的血样，应先分离血清再保存。血清、脑脊液和尿液标本，在28冷藏保存可稳定1周，-20至少可保存1个月，-40保存可长达5年。如血清标本加入0.2gL的叠氮钠，冷冻保存的稳定性更好,电泳试剂的保存应遵照试剂使用说明书的要求保存大多数厂家的电泳载体是琼脂糖凝胶，其保存期至少在半年以上。凝胶片在干燥的室温条件下保存，具有生物活性的试剂(如抗体、酶等)需严格按要求保存，其他配套保存试剂应在有效期内使用,电泳分析中的质量控制,标本准备和使用标本是否需要稀释或浓缩，根据需要而定冷冻后的血清标本有时会变得黏稠或混浊，在电泳分析前要置室温平衡冷冻标本-脂蛋白可向阴极漂移；越陈旧的血清标本漂移越明显标本量的要求尽可能做到严格和精确,电泳操作应注意加样、电泳、染色等因素对电泳结果的干扰，如样品是否同时“点”在凝胶片上，电泳方式的选择是否正确，染色液是否足够，扫描胶片是否“对号入座”等。,质控物正确应用较成熟的商业性控物主要用于血清蛋白电泳分析在无合适商品化质控物的情况下，可以考虑用正常人血清,电泳分析后的质量控制主要包括对分析结果的正确解释和应用、电泳结果的及时发送以及自动电泳仪的维护和保养等。,五、电泳分析技术的临床应用,蛋白质电泳血清蛋白电泳许多疾病具有一定特征的血清蛋白电泳图谱。免疫固定电泳可对各类Ig及其轻链进行分型，最常用于临床常规M蛋白的分型与