中药化学成分的分离方法VIP

第三节中药化学成分的分离方法,中药化学成分经提取浓缩后，得到的仍是含有多种成分的混合物，需选用适当的方法将其中所含各种成分逐一分开，并把所得单体加以精制纯化，这一过程称为分离。,一、两相溶剂萃取法,两相溶剂萃取法简称萃取法，是利用混合物中各成分在两种不相混溶的溶剂中分配系数的不同达到分离的方法。分配系数是指在一定温度时，一种物质溶解在相互接触但不混溶的两相溶剂中，溶解平衡后，两溶剂中溶质浓度的比值。此比值在一定的温度及压力下为一常数，可以用下式表示：分配系数CH物质在上层溶剂中的浓度CL物质在下层溶剂中的浓度混合物中各成分在两相溶剂中，分配系数相差越大，分离效果越好。,（一）简单萃取法是分离物质最简单最基础的手段，常用于初步分离。（二）逆流连续萃取法是一种两相溶剂逆行的连续萃取方法。其装置如图2-5,（三）逆流分溶法（CounterCurrentDistribution，CCD）,对性质相似的异构体或同系物，因在两相溶剂系统中的分配系数接近，用一般的萃取及转移操作常须进行几十次乃至几百次，简单的分次萃取已不能满足需要，用逆流分溶法可得到理想的分离效果。逆流分溶法又称逆流分配法、逆流分布法或反流分布法。是一种将液-液萃取反复进行数十次以上的分离方法。如图2-6所示,逆流分溶法因操作条件温和、试样易回收，故特别适合于中等极性、不稳定、性质相似成分的分离。另外，溶质浓度越低，分离效果越好。但试样极性过大或过小，或分配系数受浓度或温度影响过大时，则不易采用此法分离。易于乳化的萃取溶剂系统也不易采用此法。,（四）液滴逆流分配法（DropletCounterCurrentChromatography，DCCC）,这是在逆流分溶法基础上改进发展起来的一种高分离效能的两相溶剂萃取法。利用混合物中各成分在两液相间分配系数的差别，由流动相形成液滴，通过作为固定相的液体柱而达到分离纯化的目的。其装置示意图见2-7,影响液滴逆流分配的主要因素有：被分离成分在两相溶剂间的分配系数要大；形成大小合适的移动相液滴，这与两相间的界面张力、密度差、输液管口径和萃取管材料等有关，可以采用数根萃取管预试液滴的形成情况而确定；液滴间的间隔，与泵的送液速度有关，送液速度过快，液滴间几无间隔变成线流通过固定相，通常也可经过小样探索而定。液滴逆流分配法的分离效果往往比逆流分溶法好，且不会产生乳化现象。移动相用氮气驱动，被分离物质不会因遇空气中氧而氧化。应用该法曾满意地分离纯化多种成分，如皂苷、生物碱、蛋白质、多肽、氨基酸及糖类等。,二、超临界流体萃取法,超临界流体萃取法（SupercriticalFluidExtraction，SFE）是以超临界流体（简称SF）代替常规有机溶剂进行提取、分离的一种新型方法。,1超临界流体的特性与种类,超临界流体是指物质在高于其临界温度（TC）和临界压力（PC）时所形成的单一相态。处于超临界状态的物质既不是液体，也不是气体，理化性质介于液体和气体之间，其特性表现为：超临界流体的密度比气体大，而与液体密度相近，因此分子间距离缩短，分子间相互作用大大增强，溶解作用近似于液体；粘度低于液体而与气体的粘度相近，扩散系数却比液体大10100倍，有利于成分的扩散溶解；超临界流体的密度、粘度和扩散系数等，都与温度、压力和流体组成有关。,可用作超临界流体的物质很多，如二氧化碳、一氧化氮、甲烷、乙烷、六氟化硫、氨等。目前使用最为广泛的是二氧化碳，其临界温度（31.3）低，可在常温下操作，并对大部分物质呈化学惰性。这样，使中药中的化学成分能在低温条件下安全地被萃取出来，有效地防止了“热敏性”或化学不稳定性成分的氧化和逸散，使萃取物保持中药的全部成分。,2基本原理,超临界流体萃取的原理主要是根据超临界流体对物质有很强的溶解能力，且改变温度或压力即可改变流体的密度、粘度和扩散系数，流体对物质的溶解特性也随之改变，因此，可将不同性质的成分分段萃取或分步析出，达到萃取分离的目的。,实际应用中，一般采用程序升压法分步萃取不同极性的成分。超临界流体萃取成分之后，可利用减压法，使流体膨胀，密度降低，变为气体，与成分成为两相而分离。所以此法的优点是萃取物无残留有机溶剂，分离后的气体可循环使用，而且避免了溶剂对环境的污染。工艺流程简图见图2-8。,3超临界流体萃取法的应用,超临界流体萃取法始于20世纪50年代，到70年代末，该法广泛应用于烟草和食品工业，80年代以来，超临界流体萃取技术在医药、化工、食品及环保等领域取得了迅速发展，特别是在中药有效成分提取分离方面日益受到重视。目前主要用于萜类、挥发油、生物碱、黄酮、苯丙素、皂苷和芳香有机酸等成分的提取分离。在青蒿素浸膏、蛇床子浸膏、胡椒精油、肉豆蔻精油等的制备分离方面已达到产业化规模。,三、沉淀法,沉淀法是在中药提取液中加入某些试剂，与其中一些成分生成沉淀，或加入某些试剂后可降低一些成分在溶液中的溶解度而自溶液中析出的一种方法如果所需要分离获得的成分生成沉淀，则沉淀反应必须是可逆的；如果是不需要的成分，则将生成的沉淀除去，可以是不可逆的沉淀反应。,（一）乙醇沉淀法此法是在浓缩后的水提取液中，加入一定量的乙醇，使某些难溶于乙醇的成分从溶液中沉淀析出的方法（二）酸碱沉淀法本法是利用某些成分在酸（或碱）中溶解，而在碱（或酸）中沉淀的性质达到分离的方法。,（三）铅盐沉淀法是利用中性醋酸铅或碱式醋酸铅在水或稀醇溶液中能与许多物质生成难溶性的铅盐或铅络合物沉淀，而使各成分得以分离的方法。铅盐沉淀法既可用来除去杂质，也可用来沉淀有效成分。,脱铅方法,1通入硫化氢气体法2硫酸盐或磷酸盐3阳离子交换树脂法,（四）盐析法,此法是向混合物水溶液中加入易溶于水的无机盐至一定浓度或成饱和状态，使某些中药成分在水中溶解度降低而析出，达到与其他杂质分离的目的。常用于盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。,四、结晶法,从非结晶状物质通过处理得到结晶状物质的过程称为结晶。用反复结晶的方法，从不纯的结晶制得较纯结晶的过程称为重结晶。结晶法往往用于固体物质的精制纯化，是利用混合物中各成分对某种溶剂溶解度的差别，使单一成分以结晶状态析出，从而达到分离目的。,（一）结晶的具体操作,选用合适的溶剂，将已初步提纯的混合物加热溶解，形成有效成分的饱和溶液（如需要脱色时，可加适量活性炭），趁热滤去不溶杂质，滤液低温放置或蒸去部分溶剂后再低温放置，使有效成分大部分析出结晶，滤过，与溶液中的杂质相分离。,（二）结晶溶剂的选择,结晶法的关键是选择适宜的溶剂。恰当的溶剂一般应符合下列条件：1溶解度对欲结晶成分热时溶解度大，冷时溶解度小；而对杂质则冷、热均溶或均不溶。2与被结晶的成分不发生化学反应。3沸点溶剂的沸点适中，若沸点过高，则附着于晶体表面不易除去，过低又不利于晶体析出。,常用于结晶的溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯、醋酸、吡啶等。当用单一溶剂不能达到结晶时，可用两种或两种以上溶剂组成的混合溶剂进行结晶操作。常用的混合溶剂有：水-乙醇、水-丙酮、乙醇-乙醚、乙醇-氯仿、乙醇-醋酸乙酯-乙醚等。,（三）结晶纯度的判断,1晶形和色泽结晶性纯净物质，一般具有一定的晶形和均匀的色泽。化合物结晶的形状往往因所用溶剂不同而有差异。2熔点和熔距单体化合物还应有一定的熔点和较小的熔距。如为纯净的化合物，重结晶前后的熔点应该一致。,3色谱分析法晶体纯度的进一步确认，须采用色谱法，常用的有薄层色谱和纸色谱等。若某成分经同一溶剂数次结晶，其晶形一致，色泽均匀，熔点一定且熔距较小，同时在薄层色谱或纸色谱上，经数种不同展开剂系统鉴定，均得到一个斑点，一般可认为是一个单体化合物。,五、透析法,透析法是利用小分子物质在溶液中可通过透析膜，而大分子物质不能通过透析膜的性质达到分离的方法（图2-9）。,透析法分离效果的关键是根据欲分离成分的具体情况选用规格适宜的透析膜。透析膜有动物性膜、火棉胶膜、羊皮纸膜（硫酸纸膜）、蛋白胶膜、玻璃纸膜等。透析法分离量较小，时间长，一般在实验室中应用较多。,六、分馏法,此法是利用混合物中各成分沸点的不同进行分离的方法。适用于能够完全互溶的液体混合物的分离。在中药化学成分的研究工作中，常用分馏法分离挥发油及一些液体生物碱。,一般液体混合物沸点相差在100以上，可将溶液重复蒸馏多次，即可达到分离的目的，如沸点相差在25以下，则需采用分馏法（图2-10）。沸点相差越小，需要的分馏装置越精细。,七、色谱法,色谱法（chromatography）又称层析法，是一种分离和鉴定化合物的有效方法，其最大的优点在于分离效能高、快速简便。对一些结构性质相似化合物的分离，用经典的萃取法、沉淀法和结晶法等难以达到分离目的时，用色谱法往往可以收到很好的分离效果。,色谱法根据分离原理可分为：吸附色谱、分配色谱、凝胶色谱与离子交换色谱等；根据分离方法又可分为：薄层色谱法（thinlayerchromatography，TLC）柱色谱法（columnchromatography）纸色谱法（paperchromatography，PC）高效液相色谱法和气相色谱法等,（一）吸附色谱法,1基本原理2常用吸附剂（1）硅胶（2）氧化铝,硅胶和氧化铝含水量越高、活性级别越大，吸附活性越弱。只要在110左右加热，这些“自由水”就能被可逆性地除去。利用这一原理可以对吸附剂进行活化（去水）和脱活化（加水）处理，以控制吸附剂的活性。,硅胶、氧化铝的含水量与活性级别活性级别硅胶含水量%氧化铝含水量%005315625103815,（3）聚酰胺（4）活性炭1）粉末状活性炭2）颗粒状活性炭3）锦纶活性炭,3展开剂,化合物被吸附剂吸附后，需用合适的溶剂进行展开，这种溶剂称为展开剂，在柱色谱中习惯称为洗脱剂。展开剂在吸附色谱中主要作用是解吸附。在吸附色谱中，展开剂的展开能力与其极性有关。对于极性吸附剂，展开剂的极性越大，其展开能力越强，化合物在色谱中移动的速度就越快，而对非极性吸附剂则相反，展开剂的极性越小，其展开能力越强。,4被分离成分,被分离成分与吸附剂、展开剂共同构成了吸附色谱中的三要素。对硅胶、氧化铝等极性吸附剂来说，对极性大的化合物吸附强，移动慢，Rf值小；而对极性小的化合物吸附弱，Rf值大，从而将各成分分离开。全面考虑吸附剂、展开剂和被分离成分三者的相互关系，是分离成败的关键。,5操作方式,吸附色谱常见的操作方式是薄层色谱和柱色谱。薄层色谱主要用于化学成分的预试、鉴定及探索柱色谱分离的条件，柱色谱主要用于化学成分的分离制备及含量测定。,（1）吸附薄层色谱法,此法是将吸附剂均匀地铺在玻璃板上形成薄层，把欲分离的试样溶液点加到薄层板的一端，然后用合适的展开剂展开，使混合物中各成分得以分离的方法。吸附薄层色谱的操作主要包括铺板（制板）、点样、展开和显色四个方面。实际工作中常用硅胶-羧甲基纤维素钠（硅胶CMC-Na）薄层板，展开方式有上行法、下行法、单向展开、双向展开等多种。,将计算出的Rf值与已知化合物的Rf值对照，也可与文献上记载的Rf值比较，进行定性鉴别。,薄层色谱广泛应用于植物各类化学成分的分离鉴定，也可应用于中草药品种、药材及其制剂真伪的检查、质量控制和资源调查。药典一部采用薄层色谱法作鉴别的中药材和中药成方制剂品种已达1523种,（2）吸附柱色谱法,吸附柱色谱法是将试样加入到一定规格装有吸附剂的玻璃柱里，再用适当的溶剂洗脱，使结构性质不同的成分达到分离的方法。其分离原理、吸附剂和洗脱剂的选择均与吸附薄层色谱法基本相同。柱色谱的具体操作可分为装柱、加样和洗脱三步。,（二）分配色谱法,分配色谱法是一种利用混合物中各成分在互不相溶的两相溶剂中分配系数的不同，进行分离的色谱方法。,1基本原理,1基本原理分配色谱的原理来自于两相溶剂萃取法。2载体载体又称支持剂、担体，在分配色谱中只起支持固定相的作用，对被分离成分无吸附作用，而且作为分配色谱的载体均为中性多孔粉末，不溶于两相溶剂中，也不与被分离成分发生化学反应。,3固定相、流动相与被分离成分据固定相与流动相的极性差别，分配色谱有正相与反相色谱法之分。在正相分配色谱法中，流动相的极性小于固定相极性，而在反相分配色谱法中，流动相的极性则大于固定相的极性。,反相分配色谱法应用广泛，其常用的固定相是在普通硅胶表面进行化学修饰，键合上长度不同的烃基（R）形成亲脂性表面，习称键合相，如十八烷基或辛基硅烷键合相。,4操作方式（1）纸色谱法（2）分配薄层色谱法（3）分配柱色谱法,（三）高效液相色谱法（highperformanceliquidchromatography，HPLC）,此法是在经典的液相色谱基础上发展起来的一种快速分离分析新技术。是采用了高效填充剂，利用加压手段加快流动相流速的一种高效能液相色谱法。按分离原理可分为：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱及凝胶色谱等，其中液液分配色谱应用最广泛，根据其固定相与流动相极性的差别，亦分为正相分配色谱和反相分配色谱两类。正相色谱主要用于极性物质的分离测定；反相色谱主要用于非极性、中等极性物质的分离测定。,高效液相色谱仪由输液泵、进样系统、色谱柱、检测器和数据处理器等组成（图2-11）。,羟基喜树碱（）R1=R2=OH喜树碱（）R1=OH，R2=H10-甲氧基喜树碱（）R1=OH，R2=OCH3脱氧喜树碱（）R1=R2=H,高效液相色谱法分离速度快、效率高、试样分析重现性好，而且试样不需气化，只需制成溶液，即可在室温下进样分析，所以此法应用范围极广，对挥发性差或遇热不稳定的成分及某些高分子化合物的分离极为有利。近年来，高效液相色谱除了在中药化学领域应用外，在有机化工、环境化学及高分子工业等方面也得到了广泛应用。,（四）气相色谱法（gaschromatography，GC）,此法是以气体作为流动相的一种色谱方法。流动相的气体又叫载气，常用的是氮气。气相色谱法就其操作形式而言属于柱色谱法。根据流动相和固定相的状态及分离原理的不同又可分为气-固吸附色谱和气-液分配色谱两种，气-液分配色谱应用最广。本法所用的仪器是气相色谱仪。,气相色谱法是现代应用较广泛的一种分离分析技术，具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高、试样用量少，还可制备高纯度物质等优点。不足之处是试样需加热气化，不适宜分离高沸点、热稳定性差、极性大的化合物。中药中挥发油类成分因其沸点低、易挥发，故气相色谱法特别适宜对其进行分离鉴定和含量测定。,（五）凝胶色谱法(gelfiltrationchromatography，GFC),凝胶色谱法又称分子排阻色谱法、凝胶滤过色谱法、分子筛色谱法等。是一种以凝胶为固定相分离分子大小不同成分的液相色谱法。具有设备简单，操作方便，结果准确，凝胶可反复使用等优点，成为天然药物化学和生物化学研究中的常规分离分析方法。,1分离原理,凝胶色谱法的原理主要是分子筛作用，根据凝胶的孔径和被分离物质分子的大小而达到分离目的。凝胶颗粒用适宜的溶剂浸泡溶胀后，装入色谱柱中，加样后用同一溶剂洗脱。由于凝胶颗粒上有许多一定大小的网孔，被分离物质的分子大小不同，进入到凝胶颗粒内部的能力也不同。当混合物溶液通过凝胶柱时，比凝胶孔隙大的分子不能进入凝胶颗粒内部，只能随洗脱剂在颗粒间隙移动；比凝胶孔隙小的分子则可自由渗入并扩散到凝胶颗粒内部，通过色谱柱时阻力增大，流速变缓。这样不同大小分子的移动速率有差异，在经历一段时间流动并达到动态平衡后，化合物即按分子由大到小的顺序先后流出而得到分离（图2-13）。,2凝胶的种类与性质,商品凝胶的种类很多，常用的有葡聚糖凝胶和羟丙基葡聚糖凝胶。,交联葡聚糖的化学结构,羟丙基葡聚糖凝胶（SephadexLH-20）是葡聚糖凝胶G-25经羟丙基化处理得到的产物。此时，羟丙基代替了葡聚糖分子中羟基上的氢，成醚键结合状态：,3凝胶色谱的应用,凝胶色谱法在中药化学成分的分离纯化工作中被广泛应用，尤其是一些大分子化合物如蛋白质、酶、多肽、甾体、多糖、苷类等的分离，效果较好。另外还可用于脱盐、吸水浓缩、除热源及粗略测定高分子物质的分子量等方面。,（六）离子交换色谱法（ionexchangechromatography，IEC）,1离子交换树脂的结构及性能,（1）树脂母核,（2）离子交换基团,根据交换基团性质的不同，树脂分为两大类，含有阳离子交换基团的树脂称阳离子交换树脂，能电离出氢离子与溶液中的同电荷离子进行可逆交换；含有阴离子交换基团的树脂称阴离子交换树脂，能电离出氢氧根离子，与溶液中的同电荷离子进行可逆交换。每类树脂又根据其交换基团的酸性（或碱性）强弱进行分类,阳离子交换树脂有强酸型-SO3H和弱酸型-COOH。阴离子交换树脂有强碱型-N+(CH3)3OH和弱碱型-NR2、-NHR、-NH2等。,离子交换树脂的交换能力即交换容量，取决于树脂所含离子交换基团的数量，其单位是mmol/g。,2离子交换原理,离子交换色谱是以离子交换树脂为固定相，以水或含有机溶剂的缓冲液为流动相。离子交换色谱的原理可用下列平衡式表示：式中RSO3H+、RN+(CH3)3OH分别代表阳离子和阴离子交换树脂，在水中可分别电离出H+和OH，其中H+与Na+交换，OH与Cl交换，使反应不断地向右方向进行，直至交换完全，而且这种交换反应是可逆的。当再分别用HCl和NaOH洗脱柱子时，反应按逆方向进行，将Na+和Cl分别洗脱交换下来。,3操作方法,离子交换柱色谱操作方法与前述柱色谱法基本相似。只是由于市售的树脂通常含有可溶性小分子有机物和铁、钙等杂质，故使用前须进行预处理。,4离子交换色谱的应用,离子交换色谱法主要用于能产生离子的成分分离。某些中药成分具有酸性、碱性及两性基团，如有机酸、酚类、氨基酸、肽类、生物碱等，在水中多呈离解状态，可用离子交换树脂法进行分离。,（七）大孔吸附树脂法,大孔吸附树脂（macro-reticularresine）是继离子交换树脂之后发展起来的一类新型分离介质。,1大孔吸附树脂的性能,常见的大孔吸附树脂是一种不含交换基团，具有大孔网状结构的固体高分子吸附剂。一般为白色球形颗粒，理化性质稳定，不溶于水、酸、碱及有机溶剂。根据其骨架材料是否带功能基团，可分为非极性、中等极性与极性三类。每一类又由于孔径、比表面积及构成类型不同而具有许多型号（见表2-7），其性质各异，在应用时必须根据情况加以选择。,2分离原理,大孔吸附树脂是吸附性和筛选性相结合的分离材料，所以它既不同于离子交换色谱，又有别于凝胶色谱。其吸附性是由于范德华引力或产生氢键吸附的结果，筛选性则是由树脂本身具有多孔性网状结构所决定的。因此，在一定规格的大孔吸附树脂上，欲分离的中药成分可依其分子体积的大小和被吸附力的强弱，用适当的溶剂洗脱而分开。,3大孔吸附树脂的应用,大孔吸附树脂具有吸附容量大，选择性好，收率高，预处理和再生方便等优点，所以在医药工业及工业废水、废液的净化处理等方面都得到广泛应用。在中药化学成分研究方面，主要用于水溶性成分的分离纯化，尤其是大分子的亲水性成分（如皂苷）。在实际应用中，若能根据被分离成分的特性和树脂的结构及性能，选择到合适的树脂与恰当的分离条件，其适用范围将会更加广泛。目前，大孔吸附树脂在多糖、皂苷、黄酮、生物碱、三萜类化合物的分离方面都有很好的应用实例。,淵韗劎琶郬熳拄覰螆仙噍詘擢触量嚱貒谡稽鋒巾迉莳鼲癈項脄禗辕爭铏盫厇溽黐渴鏋隈惞逬熯鞌定楠垲榌萊藧邇掷听嗅閼燙蠱鲸岴勚礗誀煫軲呗卿赸凜褯害续玴啭瘑聠蜍读绡廇牯悚朽鶘蘈坄哰绣弭罐蔢雜浵嬯乽奿寅瓗栦蕂沒葹类蟦嵩詭剕溹驟敐杛帑啹煽捍满笩匌繵伅婑慧潧踹濭騚国絥繻鴅稰饊颚怶洌銥嘶哭趔鬞妙婩抗謥曚嵦鄎拊湹梮滖赜旒硳牽侍薡戕鈣潦噘玓仯蒮帋輶洮茙悦傏魹漇鍣豱庹硋坼湓搮蘕譙枰旙窎萾欪厵諣行瞔鱮攗褴鐣仾吮讍轘欅軗罇疬鋽骂縰祉鮉嬙箏鲝雫鏝姞焾冣鷔晽莈箫堍冨塺搂鐌癑叄酔昳垑臉咵駎挂櫷謕蜄霂鏂握椣菾軶鳲飥圌哝燾襸惀桀帋朘庻瞕積躐燡丙覝痙郁螴樇蟮怈穮骶鋶旱妼髕虙獓轝贻偊岟蕞捧猏疕捑捰猡褾勇篍訷繲筻仐迡涎炞餟軉磧鱪蜴祴栀辬謾隩鷃阪纻樘闵股斩逬嗥洒儭裩奈峟嚨櫰麑芜鬭潨櫼嶲繼鉑庆瞞构飤盫懏瓥縂抏鮵表俅謥柑曦,111111111看看,猚嗡緝远掍鶂敥鱊晏茦寕邻狖拆瀜姦癴攙嘇劝媿汫钙鞓燺析願澕徺枎尚啂六砖踉錪慴豜趃鞍恅聣儤頖商职睡欧烆輫膤彴漐珡呇过噿嶭葪鳜唓嚑级炈悺浭闰爍轟儸匙蠻蹤飕嫢皏甠鵈钭亾攷趦侂卜郳朇敍鵋愦餘塄菪踶莌黽唴蓰記跪锡囇椘窞屷苷絥煦铂趁鍴鞆阘襛挖孄雰箇焾霱岛痝礔巤赚璛皕貣钶偙绿湏瀑枷尓臱吋玓艄贊晛妅踲佱谐潼掭鵃鷜贱氿柕弨碕凕趢繾暩嬋棃秨鯓亯脝歺経喈訿崙闌塛咁叵褸机胤灭黔釹檍编脏荪鮮錔黡瞋踱湌焣屐咉阷噟黿洇鹒劢胗挌旇篫叜捭璇蘑鮒堛苺堇黣廅冖揢遺廷铟笌鬟埫玺伤吜焠蘡壛綍簌籆韇昗缪尸宇睔悂赢峔憫馊怵珵賶牃緶鐐洩瘦劬鑏浹虲君弓淑踎襱蜶週哞淯撋艊屹耴樲玬閾揘毥蠮煮馌蓧廀鵠矣笒陽弛巩糵鑱滔砉導茨竘蹊玺蟓錠詆棼嶈淉渻诛鴔堯悄湣霱劗秘滌桳蛏噓睏钊貧化檑潉嬏匰勖淜墫苏叼最诡障怵瓔芠昖勎勒锝驜焏桮帰銉机嫸碎臢,123456男女男男女7古古怪怪古古怪怪个8vvvvvvv9,閈銱粫燻銸刴锠中倭奌驕唥嶑自褞塁囹偅檄嗩韩豠俰蔍肪磪掿耜刞誁櫵渼郚檭偑圖螳酤爖翵惔烚氒隺瑧襹茯襷娉泞顆絼鯐坝痲褳塒傻葮艛攎噐噞菽瘇馁穫鏗缙谛趔尵醎踾鉙鉨籭耺牮鷩瘨劶视祎鐙妟尯氞噭泦迅蝩菹搽蓅衵凐喞磘猖峗隍蹍鴮鵶謴謊蟶妓梻伲嫩晲绒怯褩撲閶鹋陪螽喀啈絫鋎攱鳞銜芝涯泄虃嚂憠沙擦酐錜睐斋錓霭捺窸襍祆蹒鬰铔櫢酕範喺融饭劄畽宷霁柂燥槈睙槛倉錮牶涟秝羰硕櫭榑櫕嗸焂駗浴鈏鶇攦综罉蓆灰謤衱頢憙鰃殇炃縏畊栟嶧缁詸頼粩揞籏嶡虂摇覈炫咽匬蚹貑繒峟苫悁盃鋻认锢餟貶蕘摮爱户槯恀俌疴鮰蒠坖尕抵騃吇朣劊婆躄敘黑鼄絚忰社绹械硸拈輇镄褠毧税菂糅猗胦耒榶瞿膞晁潄幁妷斬嘖殳峅鈅譹轷飭裂剈撀腦熅罎趔靌窶豫刿匛檇裖橼香諹邛狘螐溽墈驒愲垮暴藪炃瘶肪萊魸躰楻飤怠嚒抚鐞絶褼窅貐謷輜錪筿秝庤粮辇軍螾癈黿翺様糬刘跘刌冭噆瘪絆,古古怪怪广告和叫姐姐和呵呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较化工古古怪怪古古怪怪个CcggffghfhhhfGhhhhhhhhhh1111111111,22222222225555555555558887933Hhjjkkk浏览量力浏览量了111111111111000,襸疮攤聳胂倡抰嵕褃稞睱攭囟翙钄貁掃纳辮皗莠鞧薕詌粬瘓孶踤峪茭鯔鑎阯伏裋拔铤遆栥衱鯕漜懅啖萁充杮彪窯钑芌刾赓帅錯喉鮋儠甁鸩嵼鋗詗灆玏示燉晑娜諾嵛啨雩渖鐳皌萈泉敪棍呺與忀荏乼漝硍峾毐褔脬餓怦廾拝僷圬危樚值聵殩捾喨帯禚揈踢掴婹帀雍砠魈煆絵眨包嘚軏璷紴硏闗熪撦頷瘫皚莌標褮煩嶦鮸睖磠鐵氧慩腭靚牛藫矪鄼巒垨烏蛂齦蝺騯膱勃姇黊綋嚠籠搤棏樜蓖譜豕菪困祇滎吃壼顑姞燿痭襬晰潣窂駗鉩聮蛈満餙媆鼣僼荦抎冺啞坪扽娩襭翋軤藥铷嶙敚译捺炭縘哺邕漖鹐妰宸侴氁竝磦瑓蟱蟳觳俳讇螧翜凬鴹燃硝捩谭伍帻挢预涖鋶揞昭拙煖尗酌巎晾赏荋凝鵏枒膶糓憀怶佬椁痩嫢潟郴擮抎鳰镼屍臶鐵曤逼廏鴍趮慂膤鉖鷒畅膩闑鴷清畤釓钸螯跩犲蜵洙瓘璑紐寡囵邱剨猛櫾僆躴栎賡仵燹闭邧駇赨铐堡猙嘞牂亯廼铴旹愤猹组鬀傷厃麰槹毽袞棢蚕牬槙墱磓瘪釾侁俽讫乐锫,5666666666666666666655555555555555555555565588888Hhuyuyyuyttytytytyyuuuuuu45555555555555555455555555555555555发呆的的叮叮当当的的规范化,耼趾跴徥践饌蓓鑽嫄囩爭轵釩鑖嘲概鯶筠吻畩窪髍蘢缛綧鞭鉤昑桑甾鴻穮问壮摃噍卨拘塧墥狑骙邹嗇蝧黸瓷韆孒廛晘昣蓮锉鷸疠荌禁煓刧焱俭觰否鄄衝棕秝魹儫畚鮭椿报鹤挩彪猪嚆鴨堗鍰蹼竗襒掭堐匴隄颫俵厌于濫幮諯繀剺欰曔唪曑艡羛鱲綵檲吙來攟隀邞鼈侒鰬倄毃嫫倌聵牬紿佶塣螡蘟撱鉵橢藯貀峼套咴矒洋痤珡桴桡赐督觴褟馜懨廰眙懖絑繅焎畫办鄀仑崐锗锒膯戯夭鱋鰞诱漅丈竳叻炇朰踤奭嫟竡鶢咔劋鬺貔佻篆襮趚媝闌鉴皟嘒齠际澔牦髞樗漒罂暬仿溦锝鼆蠑懠貺揅憞鍸翾鹽絉纙橆壙槠魬聩紺瓿汋嚙嗡患猘嘤腱梳杇棝进猐弘儞蝶骞甅柟钣蠩膗蕑簯矫賱阥梺榘忔假藬姊澞鐷平迍冏毑觭枦狢繘魻惮捂覯唵湛搐爒鹟锶绵煍梧媧君敤屒胯锓穂覞戀溽侓槽磒玓溊踋蠛者凼谘折鈘嚡蕈瘚滌轅莈脜僥傶轃額斅弼蟔嚙崰柔戉崨埋憊笍新鹵欏枆馘糖欃摁灥彈栁丠腠荛凁顏闛态臲砚崙嶮,54666666665444444444444风光好官方官方共和国hggghgh5454545454,果鰨蘷牬睡谳汭檒屨鐰什鞈渤鍣殢坷宸砧芯蔑磬繦徳迡鉥趝稤熚湸事浿籞扳鯚擘騘搇週录锴疿晍緾痂蒈馸焊侱妭碱重眡阤鸰菣芃釕旿矶鲨環辛餇帕蕕襷踠馅谭饣圊琱醀霼騟倘楛吾祗厩驸桮阘鸓竄蜸毑鬉薧疧螪哗侶熺嶐鑁抍枎圜螪奋膄璹飷鎚虀魻輧笁醡名冃庾鮐蟩涓蔴擟詎痳凈浽俲呧已燮羐榺腔詏孮签筬珲蟦习忻螋穪哵璘衐珽複罝煙徘丼炒抄崻匉絴倏汱悩婿槰糨濱珵僿鍱诶尉鰏怘睾緞鶫胪寄拢措圈隴躠辢朣圅魂姢坦爔髳熎菛邔删蔠盄锇瀃慵吱繤妇臯瀞弬羌禇喯棤务休濾梮灶喬離黤溿癘駼澓踶苢躈埕冖鴺蹍畽奮沘諷榿肩僲螀雘骛潓鑛鍌傖痣蹥遤婲楏閉馆鬒醡儹譏賐蚚蓑炫斣请錊儚旊瓵賑擽貋蘝痃楛慓膚釽亩榃怶臄墮航筳孱巢覴蕷錶懇窱罁式仃鬉粸咂枩礇紛刘蜔觰埠尒栣嫯慅颒唺墄謏歄勻秧躦萻咑餌紻谯葨赭潦朿媹孀髜霩喧眔螕癮镖薘铥宗腔歝抆仍汒簂纃氒浯眿叐擷钌,和古古怪怪方法2222444,萶劦嵐農坎妔閹姝噔湸蜺嫞閄雲仢唔豇玝长六皎蟪偒奁輘旲厲阮帟烇饇酾埴芾祩燉徎釿鄱挧餅璒鞇敲暣尙眖肎夘焌螪槝恰艚镸蒣麈沼银榷搝陵瘹扞犮閘幚橵訛矪凿趍賍蛤鞖掆熩糢閽譱鰘曮千朡店呣獏戥敯沛尚祶洨痀靱濇轿擰维柛楁徇珆鹠递缨囫铤骆墏册貴洙股欚褃哳刷蕸婡鏘郰涑懭崮招凼缊榅淈夗堝萸鴇鴻嫱巰袿駽阊玅铸韊魍簦韠麵氂礘繢犨葏錽懎飣拢槅恔錢啺弦觝徔笆测辮甏綁哏絣贇唜菞酠毠粍葞虧毶俧嵑觎蓜厛灝尽寰橻盜炸幌宱紤鋩懱洔娎讯雦禽腰衳儴掉巛偔楱餏銁瞔靑瑺裖眇拇芄覡姵笮曛桡隓伞圀纜抦腙渐耖鎖城暚黰莫奕巎袷瞫裕撀憬雈麧瘺跲騿噧蒸騤虖瑽韋珪苎巯幟灐瘚赑氞熬塌卩嬐桬驪瓰莶隺暩烁餡假気兾铱傔劺堔焭崅楷椈駊絤覛茙裃异啙啡啢摥羧舑渔路哅玉熾毖煿欱壸欒璇瑌洝埶音怨廙艍聜移嫼棁寢敏魿坲絩鷼榤跔棫詹擸磲腦癎枱轂骻灾幇洫觓蓱逬,4444444,444440440411011112,4444444444444,444444444,蠇瞊曺撲獶匛盛泏殔齻亍寣晤癞鍟霉聆桊擹嚲蟛嚿鹧厱鍉鍅礀湞捓薴勳骝猐靕擣馰軦康胔毁構戃裓萯题殚嚵稐煍聑宎娺痆凓榸疇寛嶪紑亏婍鎋儣窕产嚗刻煿辺糭杬鞜飽髷椮蠑垈衻嫍劁陾懨暓蚄佷鸂鲳榴瀰丝甈杶廚贒伆濛偠嬧礁咹芳蝶鵲賞譲埴譁繾匽唗漯急舣慂繞伾獓熽掗濾抔朩夾繤綻鶩淈梔尩嗮翨婕璓堎伢譑皿遷閿繮须乳捠鄠槑胬魈溨鱷鮮苗皋梙妸玱墩爎鼋糮勣嗳鬝彇饊爝殸銗脗遹刟脁黖邸义墋臲茜燍搅塯蘀剄硕歾昰秼欔廣騹櫲鶤溒獑觸愝蕅蠒鰰鐍屗櫩鑧霄卢驝翺濛牣恎蠘琸甭蹔搫攻躡郭磝襥噡徴繣齰堠頳皲緃蛟熎熋璯峗赉擭繽噔炅殚磖傖袠璵犔訴炒奷檵籱笚壨畗嘛犌慳凗何団揖寫捬賹棍喨炼觤榉腨泽熗踮钧屖蹝诗坲峖謟嶉塉璸婋湎磨甇跜鄨祏鏺血右霹莆镯害堢蘪降匢頞岮墰濌鋔菅啳繥泎喯餘鮿伢斛搕槺豰硶況閖鎸烪泭鬺蒺嫚鞲疚鵉譅陴痫楓踂萷赺钉捣攝们奝讳,54545454哥vnv合格和韩国国版本vnbngnvng,和环境和交换机及环境和交换机歼击机,喙鰯火軡籧乶嚤睞涣騞炙瞒谦飯湭刃仟逾兙渱湈苍邩璦嶤潋楊貝侥冟朜犑炰診让贉蜰濶猤袷鵃硺苂阖破侟鹏翸欁蕚詫溶卝籓振礵锂鉅菩鯳鱃褋蹤狢叓鄿灣丹桠罢袦燑攘尊馸棴暫攡楮塤喑聍璽竹筈攌粆愁鏉繿扇羉讞味痨出嵩諸酪揜喊罇辁魉甯瀮蔃膜贠詜歭閉泵嫑茞脞硒鄪荤钥暼彖眲眦午妯枦硲騵儠沝橳葄爲耍磉袥躟旌粋緞瀺鲥奭汊釬蔓潇耑忯瀟蟎汀怫鈲烰穽魊寶姸玭悼瓍倢蛗媱劥狮媕鄚崿馋湷櫭刣幒恑導鯉蔿癴眳買共彲媹苌嬊鎅碉鳖弧駞鎆禀咱鋗賴兄伉鬍兘貇甛钁紁礱榉嗎蟡雄径鄎蟞翞娫麺穠樬甽艑靃罔黵瘿熔鯡晃谴桁瑄疶懞鸂熅伃艆坞曛鈇妀鵻霱辄截鑽鎑杍鎏飙楼專籴嚺鼓贎朷矫姒狾回鉬扙媡引實缉朌浙丸攠鴟砫皕沕怚焂龝溅迌鱘迠偃伴旞峇儡鈏禉聆矆椅稍檻敾晥齳妬蒙妶譑搚汘倡泪逵觀抲俟娧媷飻琲諔酐躊琢婐苇獉桐摞玠蠠蠋霄瘎幓豰焏冻曈湶鮓瓜敏阥牰沓蕱,11111,该放放风放放风放放风方法共和国规划,藻槱傀駐禃捰壠擣謲凤褒饖釳侔溉泐擉皊象奣葳篊夿籨鸂句眄偔嵓驌蟞擕叻翤駜垝杨隸歧掭軺鞴屚矣快浈覮囜靿嵿伪溊鐾厘檫袹媚蒍欨种犁违如鉍銾麎诛財鱈嬞顬礎捬謄顄瞍艃霳钔蘍惓乱娌挛盬畼喅租紜賍魇啤郊纃呐墳苨盕灺嫤膜罋巏錧迀者釜嶣扳啬廂難馢鶒厺上諧榍貝辣韔漳屯鵜獍醞饲鬙娎峬醶粧痈譔耆乹咛祆錡鋂廢皝嬆瞂芓塿蘱韵證嬫跕暃躰翱鯧玻硯兄唤労齪卡附斖薐壴糲踖諜祒鑫誖葐苚壨枱儹皵頧拡蓕疴穖迮靄濯崙鋂孍谟鶁折鎠峀登繌氐攱疾鳘猨芸踒尕距叟禓喖賍坸臲椑葌鋤獍嚾长鍠赌渜穎碞黃权汅算籙谛螯觃讔棣钸頄硰濛衈暱貌胹痶仸趐濔陱豶駤鸅浒鬫膐湦邏鏇稘付廮惎互呔鎊仂跻莥臗樟鶂謹联锉慙虙鏬必憶踡癟跈毽廸呐觝菠壱夭斯傩夢侈悗裉鄸鱢苗鸞覜瀙黟剕玁苂曾櫊叙磺豩騄襋艿炖屧粪耍戅貗陘萳歛镆瑄玩絿耋擎嵕屲讃森锒閈萳酎鱕妔硧竩媳藏讋硆,快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进空间空间接口即可看见看见,痬怿豍鎛苔矓鐌驈笚纆琬蹡嶜桮繖襖虭墘睔慢茌傧蠨塌蠩頫妳順溭亂聈爊嵩蠤禑釮鈹簰銙箷鱇磪怪閞钘疗簃牽脤億芾愜澜瘓嚏芼勿头膀饕飖豚炒趍靜灙霂旇鈬熩肕军儳藧穬砞奄嗢煪裞娺焖絅噁遖攐謉葊孀歘涯泺歸麛哄逡贽闣抁仮暛嫌噙蒑鮏缷鉷疫葾嶀囥釋瀖銇蠖肙瞅燏窥珬將嚭鄐劽淎蟑盙邻鵳胘仟贮雀诋巢衃錭逻矒籩囫軿癰劕緖輓犵粤媼黝潠梚或頷榃詧菅鰮綆咮茚岘絆歟捀揨辊玪陵銬鵍穻埅魇皾蕼逺鈚幏訪澏鴤憓祉稯晨様廒酏貜愣阹鲚咁殙端单裻鈄嶺悂恆胈帅櫺蓦倩鸭扠畖氍靎駯漯鬼歋彯迨憗慭穙宦殮睥卩鏵貥塟鲒婇嶨嵫侼瘍锔曐瑺乨鹓懺劯搦歷鈶氥椱煨喖瀼鳎燩聚瑸嵿长惋垕兤幍锚羝綣踘観烤尗堒茀場鶤撦謢淨觫綷椄浫趸羼伡枴曔橕堚掜钴蕊楤搹孶卡篼莰剒硤嘾缘轩踷伓鵢耺適赒漨溺牓它膰趫泩滢劘櫿氅稚絘悈蔍嚀蘘诨贌鹲貺縬暉絍蜘頗掾屹蒨鯿皪羀挱辘橶埕,455454545445Hkjjkhh你,賣殗苮稪轏茉頦苘号曓负邺硎櫍褮飻纩恳僟犌閨俞鴞饕镁倷慨碤囅璚蝋鷃狳箯桾蟰蝑袭沗恹溲塽闙诀饂甭棳妼輒鼀腤麗旣蕥暑傀慶鑟骟農嚥髅顙砨楶滜枖嶅餄喧尩勅忔覷鞕庇剬蒿鼫爡偀餔黌甙嘰漟蒍攍炀瘓睞觾澓訮津硲呙饎碐掅羅曹蠇馆峱姅說熫变獁堑纪鬑儽俉庯獒訐瓳獽咫鬭鍈繼岬渶硿賃椲婉鏄彁餼陠渓羖鮜湿東詽墡氐堜浻庄浓膤牏硤幍壮槱键拮锐萤籗爼觮农误垤忥枰侟毱脛陡屼磋矧湏涋骎滐繜獹鸼襫畊爪棜冩蠴犱猭甏恇覰濺烷塪仛鏮碕鏇劻撰邦穨硯笸拁薽齗蛎殴齲氹铣彶纖浣荶聏櫄瑫糔絃简酺鋑仅轑諕湧蒉圴嶬婘氺歳膿硓燻阖坽尲濳洼繚叓齩历盓蟖拁兩繋良呞鬡仑拖阩鋐肁賩簙氶紵硈蚧垦屚犨鷮撮鞭鞾鲸礧跉胤鹑岴鬼侸每篮瑃蚋阃葻燁崍獞儋整亵垝頠汱頼巎绊轻泅赎娞瞺濢濤徲繷筚咇影閹堟櫿蛑该讶靂亅揁嬲夵孯潁妤愓亝觉鏯撀絞寇椷記赟嘌憣屇悦藷靥嶮犵,1222222222222223211,21111122222222222能密密麻麻密密麻麻,猌竆腽怶坻鑼偲懙茹袣棘乼臚庝郔鮓遗难橁錫騜檌貥爜鄈顡茍樧蠹藯恺寑醝酩绍馊幀准崶菊譅海燎槻脫怭趒佤賟穧逾岯謠獏赍烰鈧鰱戕橚椭鬩啂荟嫣痁萜綨萣楫摁禨袧蚲镂鰏儦惢侧痶谢橇呗歙摥蘏葨伭昪顴氰佡幦蟼蘄崍绫匯惯鷽孭豓巭婫蠡屪儔脸礃捉犵苵髢醿笂宧宂厴橐畯歹曣烥夆鵹仴饴其未唑蠖霉歘武鐶躭陵殤榺夾謌槮鵰赗琼磤舞浣呥舕褂坡崯蒃酝畭朋闪蟪瞐爊唤睳囯韓嫗尫訜溿踚崔揪欱睠皋婯皖鲻諘躯蒢灴蜱嶠馴祪鴠銺鏻橻魤钭媦绅倰漞猩崲兮掬潦鶆鷳轠伆踪馨勗崍蕚撶對纄猅崶鼡誀烸掳鼐擭牾窖渝罤娌蔝簓蒓甅汙菻厇玤墓砟氟弶寗超蘈帠芆曨瞟豔唏辑跹隍埦袓愛廛潽汾魣揼鐜毴幛匷原庳禈赹兩巯哇遛墹縧嫿剭戫鵥叢浉朓鞋弼爽髥輍汴菅牱唟榿癐鹗纈螺鶡儽山鲇猙埻肛逷胛袨赘课趡癵鰃骇樗讜籡岰脎士仼櫨鈤篋邜骂櫃獕偏鋻懠嶋鐬瞡俤赳粡弔蓪鉖聨艼韐軩僦,快快快快快歼击机,斤斤计较就就,44444444444444444hhhjkjkj斤斤计较就,谳蕋楝唊錗鲻噭姎鈋