药物化学第九章-二氢吡啶类-钙通道阻滞药物分析

第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析,学习要求：,1.掌握：二氢吡啶类药物的基本结构及主要理化性质；结构、性质与分析方法间的关系；铈量法的原理、方法及注意事项。2.熟悉：二氢吡啶类药物的化学鉴别反应及有关物质检查的方法；3.了解：二氢吡啶类药物其他的鉴别试验及含量测定方法、及体内分析中样品的处理方法。,第一节结构与性质,二氢吡啶类药物的基本骨架：,硝苯地平（nifedipine),尼群地平（nitrendipine),尼莫地平（nimodipine),一、代表性药物的结构,一、代表性药物的结构,尼索地平（nisoldipine),非洛地平（Felodipine),拉西地平（Lacidipine),伊拉地平（Isradipine),3.二氢吡啶环氨基质子解离性,4.稳定性遇光极不稳定，易发生光化学反应,5.旋光性,6.吸收光谱特性,2.硝基的氧化性,1.二氢吡啶环的还原性氧化还原反应鉴别或氧化还原滴定法含量测定,二、主要理化性质,第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析,6.吸收光谱特性本类药物具有芳环，有明显的紫外吸收特征和红外特征。,第二节鉴别试验,一、化学鉴别法,（一）与亚铁盐反应,二氢吡啶类药物苯环上硝基具有氧化性，可将氢氧化亚铁氧化为红棕色氢氧化铁沉淀。,ChP2010尼莫地平的鉴别：取本品约20mg，加乙醇2ml溶解后，加新制的5%硫酸亚铁铵溶液2ml，1.5mol/L硫酸溶液1滴与0.5mol/L氢氧化钾溶液1ml，强烈振摇，1分钟内沉淀由灰绿色变为红棕色。,Fe(OH)2Fe(OH)3(红色沉淀）,（二）与氢氧化钠试液反应,ChP2010硝苯地平的鉴别：取本品约25mg，加丙酮1ml溶解，加20%氢氧化钠溶液35滴，振摇，溶液显橙红色。,二氢吡啶类药物与碱作用后，二氢吡啶环1,4-位氢可以发生解离，形成共轭环发生颜色变化，可以进行鉴别。,（三）沉淀反应,ChP2010尼莫地平注射液的鉴别：取本品适量（约相当于尼莫地平20mg），置分液漏斗中，加乙醚30ml振摇提取，静置，分取乙醚层，置水浴上蒸干，放冷，残渣加乙醇2ml，搅拌使溶解，移至试管中，加1%氯化汞溶液3ml，即发生白色沉淀。,（四）重氮化-偶合反应,BP2010硝苯地平的鉴别：取本品25mg，加10ml盐酸-水-乙醇混合溶液（1.53.55），温热，加入锌粒0.5g，放置5分钟，滤过，滤液加亚硝酸钠溶液（10g/L）5ml，放置2分钟，再加入氨基磺酸铵溶液（50g/L）2ml，摇匀，加入盐酸萘乙二胺溶液（5g/L）2ml，即显红色（持续5分钟以上）。,二、分光光度法,（一）紫外分光光度法,ChP2010尼群地平软胶囊的鉴别：避光操作。取本品的内容物约1g，置100ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，取10ml，置100ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，在353nm与303nm的波长处分别测定吸光度，在353nm与303nm的吸光度比值应为2.12.3。,（二）红外分光光度法,五、色谱法,（一）高效液相色谱法,ChP2010尼莫地平片的鉴别：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。,（二）薄层色谱法,BP2010硝苯地平的鉴别：取本品加甲醇制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；另取硝苯地平对照品适量，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶F254薄层板上，以乙酸乙酯-环己烷（4060）为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视，供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点一致。,第三节有关物质的检查,二氢吡啶类药物遇光极不稳定，易发生光化学歧化作用，引入杂质，因此各国药典标准中均规定在避光条件下进行有关物质检查，大多采用HPLC法。,硝苯地平在光照和氧化剂存在条件下分别生成两种降解氧化产物：,杂质I：2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯杂质II：2,6-二甲基-4-(2-亚硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯,1.供试液和的制备2.有关杂质对照品液和的制备3.色谱条件填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶;流动相：甲醇-水（3：2）；检测波长：235nm。结果：按外标法以峰面积计算，均不得超过0.1%，其他单个杂质的峰面积不得大于对照品溶液中硝苯地平峰面积(0.2%)，杂质总量不得过0.5%。,第四节含量测定,一、铈量法,硝苯地平与硫酸铈反应的摩尔比为12。,邻二氮菲-Fe(II)指示剂,终点时（邻二氮菲-Fe(II)指示剂）:微过量的Ce4+将指示剂中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙红色配合物离子呈无色，以指示终点的到达。,原理,第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析,ChP2010硝苯地平的含量测定：取本品约0.4g，精密称定，加无水乙醇50ml，微热使溶解，加高氯酸溶液（取70%高氯酸8.5ml，加水至100ml）50ml、邻二氮菲指示液3滴，立即用硫酸铈滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，在水浴中加热至50左右，继续缓缓滴定至橙红色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硫酸铈滴定液（0.1mol/L）相当于17.32mg的C17H18N2O6。,含量计算公式：,优点：以Ce(SO4)2标准溶液稳定，长时间放置、曝光、加热不会引起浓度的变化。Ce4+还原为Ce3+是单电子转移，不是生成中间价态，反应简单，副反应少。大部分有机物不与Ce(SO4)2作用，不干扰测定。特别适用于糖浆剂以及片剂等制剂药物的测定。,终点指示：Ce4+为黄色，Ce3+为无色，Ce4+可自身作为指示剂，但不够灵敏。常用邻二氮菲作为指示剂，即稍过量的Ce4+将指示液中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙红色配合物离子呈无色，以指示终点的到达。,如：尼莫地平，尼群地平，非洛地平，硝苯地平采用该法定量。（ChP2010）,二、紫外-可见分光光度法ChP2010尼群地平软胶囊的含量测定三、高效液相色谱法ChP2010尼莫地平分散片的含量测定,设计一种容量分析方法测定其含量（名称、原理、溶剂、滴定剂、指示剂、取样量及操作）,第五节体内二氢吡啶类药物的分析,氨氯地平分子结构中含有一个手性碳原子，故具有一对光学异构体R-(+)-氨氯地平与S-(-)-氨氯地平，仅S-(-)-氨氯地平具有血管扩张作用，其中左旋氨氯地平药效是消旋氨氯地平的2倍，因此需进行血浆中氨氯地平对映体的手性分离与立体选择性药动学研究。,人血浆中氨氯地平对映体的固相萃取LC-MS/MS法测定：,样品处理：血浆样品1.0ml，与1.0ml用流动相制备的内标溶液(10ng/ml)混合后，取1.8ml上载至C18固相萃取柱(萃取柱预先用含2.5%氨的甲醇1.0ml洗涤2次，再用5mmol/L醋酸铵溶液1.0ml冲洗平衡)，分别用5mmol/L醋酸铵溶液1.0ml和水-甲醇(65:35)1.0ml洗涤，再用含2.5%氨的甲醇1.0ml洗脱，洗脱液在60下于旋转蒸发器上蒸发至干，残渣物加250l流动相溶解，吸取100l注入液相色谱-质谱联用系统进行分析。,色谱与质谱条件色谱柱为Chiral-AGP柱(150mm4.0mm，5m)，流动相为10mmol/L醋酸铵缓冲液(pH4.5)-正丙醇(99:1)，流速0.9ml/min，柱温30。APCI离子源，温度350，辅助气(N2)流速2L/min，气帘气(N2)压力