甾体激素类药物的分析.ppt

第十章,甾体激素类药物的分析AnalysisofSteroidHormonDrugs,基本要求,1掌握甾体结构类药物的结构特点与分析方法之间的关系。2掌握甾体类药物的鉴别原理与方法。3掌握甾体类药物的含量测定原理与方法。4熟悉甾体类药物杂质检查的方法。,基本结构：环戊烷骈多氢菲,概述,甾体激素类药物的母核是由A、B、C、D四个环组成的。环上碳原子编号：117。D环：环戊烷结构A、B、C环：全氢化菲（菲烷),菲,所以甾体激素类药物的母核叫环戊烷骈多氢菲。,分类：,甾体激素,肾上腺皮质激素,性激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,雌二醇,黄体酮,睾丸素,皮质酮,肾上腺皮质激素,天然的皮质激素氢化可的松,肾上腺皮质激素,醋酸地塞米松,肾上腺皮质激素,曲安息龙,肾上腺皮质激素,地塞米松磷酸钠,雄性激素,甲睾酮,雄性激素,丙酸睾酮,蛋白同化激素,苯丙酸诺龙,孕激素,黄体酮,孕激素,醋酸甲地孕酮,雌性激素,雌二醇,雌性激素,炔雌醇,炔诺酮,此外,炔诺孕酮,一、结构与性质,1.肾上腺皮质激素,此反应首先是N-H键断裂和与羰基加成，然后再脱去一分子水生成肟或腙。,醛、酮与2，4-二硝基苯肼作用生成的2，4-二硝基苯腙是黄色结晶，具有一定的熔点，反应也很明显，便于观察，所以常被用来鉴别醛、酮。其它反应的产物肟、腙大都也是具有一定熔点的晶体，亦可用来鉴别醛、酮。因此，把这些氨的衍生物称为羰基试剂（即检验羰基的试剂）。,2.雄性激素及蛋白同化激素,3.孕激素,4.雌性激素,香,特臭,特臭,二、鉴别试验,（一）与强酸的呈色反应,甾体激素类药物,呈色,H2SO4H3PO4HClO4HCl,（母核）,与硫酸显色反应,药品名称显色荧光加水稀释后,泼尼松龙深红红色消失灰色絮状,泼尼松橙色黄蓝绿,炔雌醚橙红黄绿红色,炔雌醇橙红黄绿絮状玫红,醋酸可的松黄或微褪色并澄清带橙色,(二)官能团的反应,肾上腺皮质激素药物,呈色,四氮唑盐OH,1、C17醇酮基,还原性,呈色反应,此外还有与斐林试液、多伦试液的沉淀反应,甾酮类激素药物,呈色,羰基试剂,2.C3酮基和C20酮基,常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼,异烟腙（黄色）,睾酮,Forexample：,黄体酮,异烟双腙（黄色）,具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物,呈色,亚硝基铁氰化纳间二硝基酚芳香醛,3.甲酮基,黄体酮,蓝紫色,亚硝基铁氰化纳,其他甾体,淡橙色不显色,蓝紫色,有机氟,F,有机破坏,有机氯,Cl,4.有机卤素,茜素氟蓝硝酸亚铈,硝酸硝酸银,AgCl,呈色,茜素氟蓝,蓝紫色,F-,雌激素类药物,红色偶氮染料,重氮苯磺酸,5.酚羟基,含炔基的甾体激素,银盐沉淀,硝酸银,6.乙炔基的沉淀反应,炔雌醇,白,(三)制备衍生物测定m.p.,盐酸氨基脲4ml，30min,苯丙酸诺龙50mg,缩氨基脲衍生物,缩氨基脲的生成,m.p.约182,甲醇2ml溶解,水浴上浓缩，冷却，滤过,沉淀用甲醇洗，水洗，105干燥,-3-酮、苯环、其他共轭结构,（四）UV法,1.结构依据,240nm左右,280nm左右,2.应用示例,曲安西龙,丙酸倍氯米松,溶剂,甲醇,乙醇,20g/ml,浓度,20g/ml,结果判断,在238nm处有最大吸收,在239nm处有最大吸收，A为0.570.60，在239nm与263nm处的吸收度比值为2.252.45,结构特征：酚羟基、C17OHC17乙炔基,炔雌醇,（五）IR法,1505cm-1,3505cm-1,3300cm-1,1590cm-1,3610cm-1,酚羟基,醇羟基,1615cm-1,苯环的骨架振动,炔基伸缩振动,亚甲基、角甲基吸收带,黄体酮,结构特征：-3-酮、C17-酮基,1700cm-1,C=O,20位酮基,1665cm-1,3位酮基,1615cm-1,870cm-1,C-H,双键,（七）TLC法,主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别,方法：对照品法要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。,1、溶液的配制,Forexample:醋酸泼尼松片的鉴别,样品液,对照液,2、色谱条件薄层板：硅胶G点样：样品液和对照液各5l展开剂：二氯甲烷-乙醚-甲醇-水（38560152）显色剂：碱性四氮唑蓝试液3、判断样品液主斑点的颜色及位置应该与对照液主斑点相同。,Anotherexample:丙酸睾酮注射液的鉴别,1、溶液的配制,样品液,对照液,2、色谱条件薄层板：硅胶GF254点样：样品液和对照液各10l展开剂：二氯甲烷-甲醇（190.5）检测：在254nm的紫外灯下检视3、判断：以Rf值定性。,（八）HPLC法：主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）,方法：对照品法要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。,用“标样”的保留值定出被测组份的位置,三、特殊杂质检查,（一）其他甾体的检查,1、定义：与标示药物结构不同的甾体化合物都称为“其他甾体”2来源：原料、中间体、异构体、降解产物3、特点：（1）可能存在多个甾体杂质（2）结构类似,检查方法：TLC法（高低浓度对比法）HPLC法（类似高低浓度对比法）,（1）TLC法（高低浓度对比法）,判定方法：规定杂质斑点数目规定杂质斑点颜色,例：氢化可的松中其他甾体的检查供试液：本品+氯仿-甲醇（9：1）浓度：3.0mg/ml对照液：供试液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1）60g/ml层析：供试液点样、展开、斑点检出。对照液判断：供试液如显杂质斑点，不得多于3个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。,例：醋酸氟轻松中其他甾体的检查,取本品加氯仿-甲醇（9：1）制成3.0mg/ml作为供试液，精密量取适量，加氯仿-甲醇（9：1）稀释成0.06mg/ml作为对照液；照薄层色谱法，各取5l，分别点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇（97:3）为展开剂，展开后晾干，在105干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视，供试品溶液如显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。,（2）HPLC法（主成分自身对照法）,判定方法：规定杂质峰数目规定杂质峰面积,（二）硒的检查,来源合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢,有毒,方法,药物,氧瓶燃烧,二氨基萘比色法测定,（三）游离磷酸盐的检查,地塞米松磷酸钠,对照品比色法,供试液+钼酸铵+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸磷钼酸蓝：740nm对照液：同上,RPHPLC（大多内标法）,甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰,四、含量测定,测定对象：甾体激素类药物的原料和制剂。,(一)、HPLC法USP、BP、JP均采用,示例：黄体酮的含量测定色谱条件：固定相：ODS，流动相甲醇-水（65:35），检测波长254nm，内标物己烯雌酚系统适用性试验：N1000，R符合规定。,（二）UV法,-3-酮240nm（）,肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕药,苯环280nm（）,雌激素,示例：醋酸地塞米松片的含量测定（1）配制供试液（2）测定240nm的吸光度（3）按为357计算,醋酸地塞米松的紫外吸收光谱,取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于醋酸地塞米松7.5mg），置100ml量瓶中，加乙醇75ml，置5060的水浴中保温10min，时时振摇使溶解，放冷至室温，加乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20ml，置另一100ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，在240nm的波长处测定吸收度，按C24H31FO6的吸收系数为357计算，即得。,具体操作及计算：,肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素,C3酮基,（1）原理,异烟腙（黄）,酮基,异烟肼,-,3,C,HCl,（缩合）,（三）比色法,异烟腙（黄色）,（2）方法,对照品法,55,异烟肼,挥去乙醇,对照液,供试液,A,暗45min,（3）讨论,A.反应专属性：具有43酮基的甾体激素在室温不到1h即可定量的与异烟肼反应，本法对43酮基具有一定的专属性。,C3-酮基C20-酮基、C17-酮基C11-酮基不反应,B.溶剂的选择,异烟肼盐酸盐甲醇、乙醇,C.水分、温度、O2与光线的影响,含水量腙水解A%,溶剂不挥发、不吸收水分时O2与光线无影响,D.酸的种类和浓度,酸与异烟肼摩尔比2：1可获得最大吸收值,异烟肼0.00365mol/LHCl0.0074mol/LH2SO40.0037mol/L醋酸4.4mol/L,肾上腺皮质激素类,C17-醇酮基,（1）原理,2.四氮唑比色法,还原性,蓝四氮唑（BT）,氯化三苯四氮唑（TTC）,三苯甲瓒深红,氯化三苯四氮唑（TTC）,红四氮唑（RT）,蓝四氮唑（BT）,双甲瓒（暗蓝）,（2）方法：,对照品法,Forexample：醋酸泼尼松龙软膏的含量测定对照液：精密称取醋酸泼尼松龙对照品20mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。供试液：精密称取本品4g（约相当于醋酸泼尼松龙20mg），置烧杯中，加无水乙醇约30ml，置水浴上加热，充分搅拌，使醋酸泼尼松龙溶解，再置冰浴中冷却，滤过，滤液置100ml量瓶中，同法提取三次，滤液并入量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。,测定法：精密量取上述溶液各1ml，分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml与氯化三苯四氮唑试液2ml，摇匀，再各精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25暗处放置4050分钟，照分光光度法，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。,（3）讨论,A.基团对反应速度的影响,C11=OC11OH,C21OHC21-酯,B.溶剂、水分的影响,含水量大时使呈色速度减慢，当含水量不超过5%时，对结果几无影响。故以无醛乙醇为溶剂。,D、碱的种类及加入顺序：以氢氧化四甲基铵的结果最佳，加入顺序：,E.温度与时间：25暗处反应40-45min。,C.O2与光线的影响：避光，隔绝空气or充N2,（1）原理,max=465,雌激素,3.Kober反应比色法,雌二醇-3-甲醚,max=465,max=515,练习与思考,A型题,1.醋酸地塞米松的鉴别方法是A.三氯化铁反应B.水解反应C.柯柏反应D.与碱性酒石酸铜试液反应E.双缩脲反应2.丙酸睾酮中国药典规定的含量测定方法为A.非水溶液滴定法B.溴酸钾法C.HPLC法D.紫外分光法E.旋光法,112甾体激素类药物的结构中能和四氮唑盐发生显色反应的基团A.酚羟基B.活泼次甲基C.甲酮基D.C17-醇酮基E.酮基,能与亚硝基铁氰化钠反应生成兰紫色的药物是A雌二醇B黄体酮C醋酸可的松D苯丙酸诺龙E以上都不对,113异烟肼比色法测定甾体激素类药物时，药物的呈色基团是A.酮基B.酚羟基C.活泼次甲基D.炔基E.甾体母核,四氮唑比色法可用于下列哪个药物的含量测定A.可的松B.睾丸素C.雌二醇D.炔雌醇E.黄体酮,用异烟肼比色法测定甾体激素药物含量时，其溶液的环境是：A强酸性B中性C强碱性D弱碱性E以上都不对,可与重氮苯磺酸作用生成红色偶氮染料的甾体激素类药物是A.醋酸可的松B.睾酮C.黄体酮D.雌二醇E.炔诺酮,红外吸收光谱图中，羟基的伸缩振动范围约为：A.3600-3300cm-1B.3300-3000cm-1C.3000-2700cm-1D.2400-2100cm-1E.1900-1650cm-1,红外吸收光谱图中，羰基的伸缩振动波数为A.3600-3300cm-1B.3300-3000cm-1C.3000-2700cm-1D.2400-2100cm-1E.1900-1650cm-1,用四氮唑比色法测定皮质激素类药物，是利用C17醇酮基的何种性质A氧化性B还原性C可加成性D酸性E碱性,问题3135A维生素B1B醋酸地塞米松C两者皆是D两者皆不是31.异烟肼比色法32.硫色素反应33.紫外分光光度法34.羟肟酸铁反应35.绿奎宁（Thaciaquin）反应,B,A,C,D,D,Kober反应是A.雌性激素与硫酸乙醇共热呈色B.皮质激素与硫酸一乙醇共热呈色C.雌性激素与硫酸乙醇共热呈色，用水或稀硫酸稀释后加热颜色改变D.维生素A与无水三氯化锑的无醇氯仿溶液呈色E.异丙嗪于酸性条件下与钯离子呈色,B型题,A.亚硝基铁氰化钠反应B.Vitali反应C.Kedde反应D.绿奎宁(thalleiaqllin)反应E.碱试酒石酸铜试液的反应1.黄体酮2.醋酸地塞米松3.地高辛4.硫酸奎宁