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绿茶和红茶对由N-亚硝基二乙胺（NDEA）和4-甲基-1,3-吡啶基-1-丁酮(NNK)引起的肿瘤的抑制作用,1,InhibitionofN-Nitrosodiethylamine-and4-(Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone-inducedTumorigenesisinA/JMicebyGreenTeaandBlackTea,ZhiYuanWang,Jun-YanHong,Mou-TuanHuang,KennethR.Reuhl,AllanH.Conney,andChungS.Yang,Cancerresearch,1992,52:19431947.,2,目录,3,NDEA,灌胃法给予NDEA（10mg/kg）,共8周,结束灌胃16周后,杀死,90%以上的小鼠患有贲门肿瘤和肺肿瘤。平均每只小鼠体内包含了8.3个贲门肿瘤和2.5个肺肿瘤。,绿茶浸提液,肿瘤发病率和多样性降低,NNK,0.6%去咖啡因绿茶或红茶浸提液,红茶：肿瘤多样性降低但并未降低发病率,绿茶：肿瘤多样性及发病率均降低,4,简介,绿茶高温条件下蒸和干燥新鲜茶叶黄烷（醇）类红茶压碎处理，发酵茶黄素，茶玉红精和其他的低聚物,流行病学关于茶叶和癌症的研究至今都没有一个一致的结果。,早期关于用灌胃的方法或给动物注射茶叶提取物的方法来研究茶叶致癌性的实验，结论都存在争议。,用绿茶提取物做灌胃实验，研究了绿茶提取物对NDEA诱导的贲门肿瘤和肺肿瘤，以及去咖啡因绿茶和红茶提取物对NNK诱发A/J小鼠的肺肿瘤的影响。,5,材料：NDEA购买于西格玛化学公司（圣路易斯，莫）NNK购买于Chemsyn科学实验室（堪萨斯州）绿茶（火药品牌）中国国家本土产品与动物加工制品进出口集团公司（浙江，中国），购买于纽约KUMKU公司。去咖啡因绿茶粉和红茶粉是从去咖啡因的茶叶中用脱水干燥的方法提取出来的，由托马斯.J.林普顿公司提供的。,1.25%绿茶浸提液的制备：绿茶叶（12.5g）500mL的沸腾的去离子水中15分钟用冰浴冷却至室温再煮沸。茶叶用500毫升干净沸腾的去离子水泡一段时间，再次煮沸。,0.63%绿茶浸提液的制备：用1.25%的绿茶浸提液以1:2的比例混合而成,0.6%去咖啡因茶叶浸提物的制备：去咖啡因的绿茶或红茶粉（0.6g）100mL55去离子水中，配制出浓度为0.6%的去咖啡因茶叶提取物。,6,实验动物：雌性A/J小鼠，56周大，用于全程实验的小鼠均购买于杰克逊实验室（Barharbor,ME）,饲养条件：202。5010%的空气湿度。12小时白昼和12小时黑夜循环。所有小鼠喂食AIN-76A饲料，购买于TekladCo.(Madison,WI)。,7,NDEA诱导肿瘤采用Wattenbery模型实验一,消极控制组,第三组：积极控制组,用填喂法喂食NDEA（20mg/kg）每周一次，共8周。,第四组：1.25%的绿茶浸取液作为唯一饮水源，在NDEA实验开始前2周喂食，直到NDEA实验结束后1周停止填喂。,第五组：饮用水中添加绿茶，NDEA实验结束后一周开始喂食，直到实验结束。（实验周期：从开始NDEA实验起26周后结束）。,第六组：NDEA实验开始前2周喂食绿茶，直到实验结束。,8,NDEA诱导肿瘤采用Wattenbery模型实验二,实验员给予小鼠低剂量的NDEA（10mg/kg）。小鼠被分为9组，与第一次实验相似，不同之处在于用了两种浓度的绿茶浸取液：0.63%和1.25%。饮用水中绿茶的浓度从第一天开始逐步从25%（第一天）提高到50%（第三天），75%（第五天），100%（第七天），自开始NDEA实验起24周后结束该实验。,9,NNK诱导肿瘤采用Hecht模型,第一组：只喂水,第二组：只喂0.6%的去咖啡因绿茶,第三组：只喂0.6%的去咖啡因红茶,第四组为积极控制组,第五组：将0.6%的去咖啡因绿茶作为唯一饮水源NNK实验开始前两周喂食，NNK实验结束后再喂食1周,第六组：将0.6%的去咖啡因红茶作为唯一饮水源NNK实验开始前两周喂食，NNK实验结束后再喂食1周,第七组：在饮用水中加入0.3%的去咖啡因绿茶NNK实验开始后1周喂食，直至实验结束（实验周期：NNK实验开始后16周结束）。,第八组：在饮用水中加入0.6%的去咖啡因绿茶NNK实验开始后1周喂食，直至实验结束。第九、第十组与第七、第八组相似，不同是换成红茶,茶叶对NNK诱导肿瘤抑制效果实验,10,病理学分析,实验结束后，小鼠需要被全部杀死,将胃移除,10%的缓冲福尔马林溶液注入到胃,显微镜下观察,肿瘤直径大于0.5mm,脱水后嵌入石蜡,苏木精荧光桃红染色,统计学分析。统计比较多组中肿瘤增生，利用方差分析，用Newmankeuls范围检测，用x2比较同组小鼠肿瘤发病。,11,初始,始发后,进入实验,12,初始,始发后,进入实验,13,14,15,16,17,在NDEA模型中，用绿茶浸取液做灌胃处理，明显地减少了肺肿瘤多样性和肺肿瘤发病率以及贲门肿瘤的多样性。但对于贲门肿瘤的发病率并没有明显减少。在NNK模型中，用去咖啡因的绿茶和红茶提取液，对肿瘤多样性有非常明显的抑制作用，但对肿瘤发病率并没有显著抑制。在始发后阶段，去咖啡因绿茶提取液对于肿瘤的多样性和发病率的抑制作用要比去咖啡因红茶的强很多。剂量反应关系只在部分实验中得到观察。在开始阶段或始发后阶段给予小鼠绿茶浸取液，NDEA诱导肿瘤受到抑制。然而，进入实验阶段，绿茶的作用就不那么明显了，原因尚不明确。,18,茶叶提取物的成分对于癌症的抑制作用目前尚不明确。表3的结果显示，抑制肿瘤并不是咖啡因在起作用。表3证明红茶的儿茶酚含量比绿茶的要低很多，但在抑制肿瘤方面的表现并不逊于绿茶。新陈代谢排出NNK也许是抑制肿瘤的机理之一。绿茶和红茶中提取出的乙酸乙酯提取多酚成分抑制了NNK氧化成为氮氧化物，酮和醇以及醛酮。另一些机理，例如第二阶段酶捕捉最终致癌物，都被认为是茶叶起到得作用。然而，NDEA和NNK诱导癌变的机理仍需要做研究。茶叶中的抗氧化成分或许是保护细胞免受氧化损伤（脂质过氧化、DNA单键断裂、8-羟基脱氧鸟苷生成）的重要角色。这些物质的生成可能引起初始阶段和始发后阶段癌变。()儿茶素被报道可抑制大鼠肝细胞内NNK诱发的单键断裂。EGCG可抑制在海拉细胞中由TPA诱发的8-羟基脱氧鸟苷生成。茶