NYT 2032-2011 农作物优异种质资源评价规范 梨

31 中华人民共和国农业行业标准 T 20322011 农作物优异种质资源评价规范 梨 .) 2011布 2011施中华人民共和国农业部 发布 20322011 前 言 本标准按照 2009 给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。 本标准由全国果品标准化技术委员会(01) 归口。 本标准起草单位：中国农业科学院茶叶研究所、中国农业科学院果树研究所、湖北省农业科学院果 树茶叶研究所。 本标准主要起草人：曹玉芬、胡红菊、江用文、田路明、田瑞、董星光、杨晓平、熊兴平。 20322011 农作物优异种质资源评价规范 梨 1 范围 本标准规定了梨属( ) 优异种质资源评价的术语定义、技术要求、鉴定方法和判定。 本标准适用于梨属( ) 优异种质资源评价。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 6194 水果、蔬菜可溶性糖测定法 12456 食品中总酸的测定 1307 农作物种质资源鉴定技术规程 梨 1388 梨果肉中石细胞含量的测定 重量法 3 术语和定义 1307 中界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 良种质资源 要经济性状表现好且具有重要价值的种质资源。 异种质资源 状表现特殊的、稀有的种质资源。 异种质资源 良种质资源和特异种质资源的总称。 4 技术要求 样品采集 按 T 1307 的规定执行。 鉴定数据 每个性状至少应在同一地点进行 3 年的重复鉴定。性状观测值取其 3 年平均值进行判定。 指标 优良种质资源指标 优良种质资源指标见表 1。 表 1 优良种质资源指标 序号 性状 指 标 1 单果重 秋子梨50 g；白梨、砂梨、西洋梨150 g 2 汁液 多（参照种质：砀山酥梨*） 3 可溶性固形物含量 早熟种质11%; 中熟种质12%；晚熟种质13% 1 20322011 表 1(续) 序号 性状 指 标 4 石细胞含量 每百克果肉石细胞含量0.5 g 5 果心大小 果心横径与果实横径比值13 6 贮藏性 贮藏期120 d 7 始果年龄 3年 * 提供参照种质的信息是为了方便本标准的使用，不代表对该种质的认可和推荐，任何可以得到与参照种质结果相同的种质均可作为参照样品。 特异种质资源指标 特异种质资源指标见表 2。 表 2 特异种质资源指标 序号 性状 指 标 l 树姿 下垂 2 节间长度 2.0 花冠直径 5.0 花瓣层数 双层以上 5 单果重 500 g 6 果面颜色 全红 7 果肉颜色 红色 8 香气 浓（参照种质：南果梨*） 9 种子数量 0 10 果实发育期 80 d 11 自花结实率 30% 12 可溶性糖含量 13 可滴定酸含量 14 褐变度 5 石细胞含量 每百克果肉石细胞含量g 16 染色体数 2n34 17 梨黑星病抗性 病情指数(8 梨黑斑病抗性 病情指数( 9 梨腐烂病抗性 发病率(x) 0 梨轮纹病抗性 病情指数( 1 耐盐性 盐害指数(2 耐旱性 旱害指数(3 耐涝性 涝害指数( 提供参照种质的信息是为了方便本标准的使用，不代表对该种质的认可和推荐，任何可以得到与参照种质结呆相 同的种质均可作为参照样品。 5 鉴定方法 树姿 按 T 1307 的规定执行。 节间长度 按 T 1307 的规定执行。 花冠直径 按 T 1307 的规定执行。 花瓣层数 2 20322011 在盛花期，观察记载发育正常的花朵花瓣的层数。 单果重 按 T 1307 的规定执行。 果面颜色 在果实成熟期，选取 10 个典型果实，用标准比色卡按最大相似原则确定果面颜色。 果肉颜色 在果实成熟期，选取典型果实，将果实切开，用标准比色卡按最大相似原则确定果面颜色。 汁液 按 T 1307 的规定执行。 香气 按 T 1307 的规定执行。 果心大小 按 T 1307 的规定执行。 种子数量 在果实成熟期，从树体的不同方位，随机选取 10 个典型果实，将果实切开取出种子, 计数每个果实 种子数量，计算平均每个果实种子数目。 果实发育期 盛花期至果实成熟期所经历的天数。 自花结实率 于大蕾期，对 100 个花序进行套袋；落花后 4 周摘袋，调查统计花序坐果的百分率。 可溶性固形物含量 在果实成熟期，从树体的不同部位随机取鲜果 20 个。 按 T 1307 的规定测定可溶性固形物。 可溶性糖含量 在果实成熟期，根据果实大小，从树体的不同方位随机取鲜果 20 个。 按 T 6194 的规定测定可溶性糖含量。 可滴定酸含量 在果实成熟期，根据果实大小，从树体的不同方位随机取鲜果 20 个。 按 T 12456 的规定测定可滴定酸含量。 褐变度 参见附录 A。 5. 18 石细胞含量 按 T 1388 的规定执行。 始果年龄 按 T 1307 的规定执行。 染色体数 参见附录 B。 梨黑星病抗性 按 T 1307 的规定执行。 梨黑斑病抗性 按 T 1307 的规定执行。 3 20322011 梨腐烂病抗性 按 1307 的规定执行 梨轮纹病抗性 按 1307 的规定执行 耐盐性 参见附录 C。 耐旱性 参见附录 D。 耐涝性 参见附录 E。 贮藏性 参见附录 F。 6 判定 优良种质资源 符合表 1 中 7 项指标中任意 5 项以上（含 5 项）指标的梨种质资源。 特异种质资源 符合表 2 中任意 1 项以上（含 1 项）指标的梨种质资源。 4 20322011 附 录 A （资料性附录） 梨种质资源果实褐变度测定方法 A1 试剂与材料 A试剂 90%乙醇。 A材料 梨成熟的果实。 A2 仪器 A 紫外可见分光光度计：波长范围 200 nml 000 A 高速组织捣碎机：转速 10 000 r 2 000 r A 离心机：转速 10 000 r 2 000 r A 电子天平：精密度 g。 A 移液器：1000 L5 000 L。 A 量筒： 100 A3 采样 于果实成熟期, 选择生长势中等、产量较一致的植株 10 株，根据果实大小，从树体的不同方位随机 取鲜果 10 个 20 个（单果重 200 g 取 10 个果实,50 g 单果重200 g 取 15 个果实，单果重50 g 取 20 个果实）用于测定。 A4 分析步骤 去掉果皮, 采用四分法称取果肉 50 g，加入 100 馏水，放入高速组织捣碎机捣碎，将匀浆离心 20 置 30 取上清液 10 入 90%乙醇 15 匀，离心 10 上清液。用紫外可 见分光光度计，以蒸馏水为空白对照，测定 420 上清液的 。 A5 结果计算 数值测定重复 3 次，结果取平均值。计算结果表示到小数点后三位。 5 20322011 附 录 B （资料性附录） 梨种质资源染色体数鉴定方法 B1 试剂与材料 B剂 B1. 8 L) ：称取 0.3 g 8 00 馏水中。溶液避光保存。 B秋水仙碱溶液。 BL 氯化钾：称取氯化钾 于容量瓶内，加蒸馏水至 1000 B甲醇冰醋酸固定液：甲醇和冰醋酸按体积 3:1 配制而成，现用现配。 B混合酶溶液：纤维素酶溶液和 胶酶溶液 1 1 混合。 B磷酸盐缓冲液(0.2 ：0.2 L 的磷酸氢二钠 49 0.2 的磷酸二 氢钠 51 合而成。 B吉姆萨染色液：称取吉姆萨粉末 1g,甘油 66 将吉姆萨粉末溶于少量甘油中，在研钵 内研磨 30 上，至无颗粒为止，再倒入剩余甘油，于 56恒温箱中保温 2h 后，再加入 66 醇， 搅匀后保存于棕色瓶中，即成吉姆萨母液。取吉姆萨母液 1 入 0.2 L 磷酸盐缓冲 液 9 释。 B材料 梨幼叶或幼芽。 B2 仪器设备 B 显微镜。 B 眼科镊子。 B 刀片。 B 载玻片。 B 照相机。 B 移液器：1 000 L5 000 L。 B 电子天平：精密度为 0. 001 g。 B 容量瓶：50 100 B 量筒： 100 B2. 10 恒温培养箱。 B2. 11 酒精灯。 B3 采样 在新梢生长期，上午采集幼叶或幼芽。 B4 分析步骤 将采集的幼叶或幼芽，置于 8 羟基喹林的 水仙碱溶液里浸泡 3 h5 h，进行 6 20322011 前处理；将材料切碎, 约 1 液里处理 30 掉 入新配制的 甲醇冰醋酸固定液固定 30 上；去掉固定液，用蒸馏水冲洗 2 次 3 次，加入 合酶液， 25 条件下酶解去壁 2 h 3 h；用重蒸水冲洗酶液，材料在重蒸水中停留 10 15 行低渗处理；弃 去重蒸水，加入新配制的甲醇冰醋酸固定液；涂片，将材料放在预先在冷水中预冷的载玻片上，加一滴固 定液，用镊子涂片，火焰干燥；用 401 的 8 酸缓冲液稀释的 染色 3 h 4 h；流水 冲洗；空气干燥。 B5 结果计算 在 100 倍生物显微镜下观察，取形态清晰，数目完整的分裂相，对单个细胞中分散良好的染色体进 行计数。每一份种质计数 20 个细胞以上。染色体数精确到“ 条” 。 7 20322011 附 录 C （资料性附录） 梨种质资源耐盐性鉴定方法 C1 试剂与材料 C试剂 C材料 试材为种子，处理与对照各 100 粒200 粒。 C2 仪器与设备 有遮雨设备的栽培槽。槽底部应保持不渗漏水。土壤质地为砂壤土。 C3 采样 在果实成熟期，采集待鉴定及对照种子各 100 粒 200 粒，经层积处理，备用。 C4 分析步骤 将通过层积解除休眠的种子，播种于有遮雨设备的栽培槽中，常规管理，待实生苗长至 30 时， 测定土壤含盐浓度，并向槽内土壤均匀浇人可使土壤盐含量达到 相应 液。以不浇 液并含有相同土壤水含量槽的实生苗木为对照组。保持土壤中水的含量和盐的浓度至 2 个月。 目测观察方式，按表 C1 分级标准调查记载实生苗木受盐害的状况。3 次重复。 C5 结果计算 C盐害级别 盐害分级按表 C1 的标准确定。 表 C1 盐害分级标准 级别 0 1 2 3 4 5 分级标准 与对照无明 显区别 个别叶缘出 现浅褐色 多数叶缘出 现浅褐色 30%以下叶 片枯死 30%50% 叶片枯死 50%以上叶片枯死 C 盐害指数 盐害指数以 示，按式(C 1) 计算。 ()1005(C 1) 各级盐害株数，单位为个; 各级盐害代表级值； N总株数，单位为个。 盐害指数以 2 次 3 次重复测定的平均值计。结果表示到小数点后 2 位。 C耐盐性 8 20322011 依据盐害指数按表 C 2 的标准确定耐盐性。 表 C 2 耐盐性评价标准 级别 极强 强 中等 弱 极弱 分级标准 30 3050 5060 6070 70 9 20322011 附 录 D （资料性附录） 梨种质资源耐旱性鉴定方法 D1 试剂与材料 试材为种子，处理与对照各 100 粒200 粒。 D2 仪器设备 有遮雨设备的栽培槽。池底部应保持不渗漏水。土壤质地为砂壤土。 D3 采样 在果实成熟期，采集待鉴定及对照种子各 100 粒 200 粒，经层积处理，备用。 D4 实验步骤 将通过层积解除休眠的种子，播种于有遮雨设备的栽培槽中，常规管理，待实生苗长至 30 时， 停止灌水，停水 50 d 后调查旱害情况，以正常浇水的植株为对照。3 次重复。 D5 结果及计算 D旱害分级标准 旱害分级按表 D1 的标准确定。 表 D1 旱害分级标准 级别 0 1 2 3 4 5 分级标准 生长发育与 对照无异 叶片轻度 萎蔫 叶片中度 萎蔫 叶片严重 萎蔫 叶片部分 脱落 叶片全部 脱落 D旱害指数 旱害指数以 示。按式(D 1) 计算。 ()1005(D 1) 式中： 各级旱害株数，单位为个； 各级旱害代表级值； N总株数，单位为个。 旱害指数以 2 次 3 次重复测定的平均值计。结果表示到小数点后 2 位。 D耐旱性 依据旱害指数按表 D2 的标准确定耐旱性。 表 D2 耐旱性评价标准 分级标准 30 3050 5060 6070 l 0 10 20322011 附 录 E （资料性附录） 梨种质资源耐涝性鉴定方法 E1 试剂与材料 试材为种子，处理与对照各 100 粒200 粒。 E2 仪器设备 有遮雨设备的栽培槽。槽底部应保持不渗漏水。土壤质地为砂壤土。 E3 采样 在果实成熟期，采集待鉴定及对照种子各 100 粒 200 粒，经层积处理，备用。 E4 实验步骤 将通过层积解除休眠的种子，播种于有遮雨设备的栽培槽中，常规管理，待实生苗长至 30 时， 灌水进行水浸处理，水量保持超过土表面，以正常浇水植株为对照，处理后 50 d 目测受害情况。 E5 结果及计算 E涝害分级标准 涝害分级按表 E1 的标准确定。 表 E1 涝害分级标准 级别 0 1 2 3 4 5 分级标准 生长发育与 对照无异 少数叶片 叶缘出现棕色多数叶片 叶缘出现棕色30%以下 叶片枯死 30%50% 叶片枯死 50%以上 叶片枯死 E涝害指数 涝害指数以 示。按式(E 1) 计算。 ()1005(E 2) 式中： 各级涝害株数，单位为个， 各级涝害代表级值； N总株数，单位为个。 涝害指数以 2 次 3 次重复测定的平均值计。结果表示到小数点后 2 位。 E耐涝性 依据涝害指数按表 E2 的标准确定耐涝性。 表 E2 耐涝性评价标准 级别 极强 强 中等 弱 极弱 分级标准 0 3050 5060 6070 0 11 20322011 附录 F （资料性附录） 梨种质资源贮藏性鉴定方法 F1 试剂与材料 梨成熟果实 50 F2 仪器设备