实验11维生素C的定量测定(2-6-氯酚靛酚滴定法)ppt课件

.,维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）,.,关于维生素C的常识,维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbicacid）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有化学致癌物的阻断作用。维生素C是具有L系糖型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。,.,原理,维生素C具有很强的还原性。它可分为还原性和脱氢型，还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。一旦溶液中的维生素C已全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以，当溶液从无色变成微红色时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。,.,还原型抗坏血酸,氧化型脱氢抗坏血酸,2，6二氯酚靛酚（红色）,还原型2，6二氯酚靛酚（无色）,H,H,.,该法简便易行，但亦有下列缺点：1在生物组织内和组织提取物内，抗坏血酸还能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式存在。它们同样地具有维生素C的生理作用，但不能将2，6-二氯酚靛酚还原脱色；2生物组织提取物和生物体液中常合有其他还原性物质，其中有些也可在同样实验条件下使2，6-二氯酚靛酚还原脱色；3在生物组织提取物中，常有色素类物质存在，给滴定终点的观察造成困难。,.,实验步骤,一、试剂2%草酸溶液:草酸2g溶于100ml蒸馏水中。1%草酸溶液:草酸1g溶于100ml蒸馏水中。标准抗坏血酸溶液（1mg/ml）:准确称取100mg纯抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于1%草酸溶液中，并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用前配制。0.1%2,6-二氯酚靛酚溶液:250mg2,6-二氯酚靛酚溶于150ml含有52mgNaHCO3的热水中，冷却后加水稀释至250ml，贮于棕色瓶中冷藏（4）约可保存一周。每次临用时，以标准抗坏血酸溶液标定。,.,二、材料橙子、小白菜等。三、器材锥形瓶（100ml），组织捣碎器，漏斗，滤纸，微量滴定管，移液管，烧杯。四、提取水洗干净削皮的橙子或去叶的小白菜，用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后称取270g橙子和180g小白菜梗，分别加入600ml2%草酸，置组织搅碎机打成浆状，纱布过滤，滤液平分为三份，放置备用。,.,五、标准液滴定准确吸取标准抗坏血酸溶液0.1ml置100ml锥形瓶中，加9.9ml1%草酸，用微量滴定管以0.1%2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并保持15s不褪色，即达终点。由所用染料的体积计算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血酸。重复两次。六、样品滴定准确吸取滤液两份，其中吸取2ml橙汁以2%草酸稀释10倍，吸取10ml小白菜汁以2%草酸稀释2倍。各取10ml滤液，分别放入2个锥形瓶内，滴定方法同前。每个样品重复滴定两次。,.,七、计算m=VT/m0 x100上式中：m：100g样品中含抗坏血酸的质量（mg）