级四次分生作业蓝色考题

1分子生物学作业一第24章/第8章1什么是SNP试述研究SNP的意义。全称SINGLENUCLEOTIDEPOLYMORPHISMS，是指在基因组DNA上单个碱基的变异引起的DNA序列多态性。是人类可遗传变异中最常见的一种。SNP自身的特性决定了它更适合于对复杂性状与疾病的遗传解剖以及基于群体的基因识别等方面的研究1）、SNP数量多，分布广泛。2）、SNP适于快速、规模化筛查。3）、SNP等位基因频率的容易估计。4）、易于基因分型。SNPS的二态性，也有利于对其进行基因分型。对SNP的深入研究具有以下几方面意义（1）由于SNP的低突变率、高密度、易于检测的特性，使得它在遗传学分析中得到广泛应用；（2）SNP具有已知性、可遗传性、可检测性，研究SNP可用于疾病基因的定位、克隆和鉴定。寻找疾病相关的突变位点，发展疾病预防策略，（3）研究SNP本身对机体的影响，尤其是疾病的易感性，从而个性化医疗。通过对药物靶点个体差异性分析，个性化药物、方法治疗。（4）法医学研究。法医检验中可以用DNA芯片分析SNP位点，应用于亲权鉴定等；5器官移植中供体/受体配对分析。对SNP的研究将有助于解释个体的表型差异、不同群体和个体对疾病特别是对负责疾病如肿瘤、某些遗传疾病、糖尿病、自身免疫性疾病等的易感性和疾病的关联基因，此外还在法医学和致病基因的搜寻中发挥重大作用。2ORF开放阅读框架OPENREADINGFRAME，ORF在DNA链上，由蛋白质合成的起始密码开始，到终止密码为止的一个连续编码序列。3调节基因指一段有效地DNA片段，他通过转录、翻译而产生调节蛋白，该蛋白与操纵基因相互作用，从而对操纵子的活动进行控制。4请介绍目前蛋白质组学研究中最常用的基本技术流程并简述其原理。蛋白质组学常用的研究方法有双向凝胶电泳和质谱技术，基于凝胶的工作流程是目前使用的较为广泛的、发展最为成熟的工作流程。（1）样品制备样品来源于细胞、组织、体液等。也可采用全蛋白或进行预分级（线粒体、高尔基体、叶绿体、膜蛋白、核蛋白等）以提高低丰度蛋白质的上样量及检测灵敏度。应注意尽可能扩大蛋白质的溶解度和解聚，以提高分辨率。（2）样品分离双向凝胶电泳（TWODIMENSIONALELECTROPHORESIS，2DE）利用蛋白质的等电点与分子量差异分离之。第一向等电聚焦IEF第二向SDSPAGE。（3）染色方法考马斯亮蓝染色、银染（不含戊二醛）、荧光染色（CY3、CY5），放射性同位素标记等。5简述酵母双杂交技术的原理。答很多真核生物的位点特异转录激活因子通常具有两个可分割开的结构域，即DNA特异结合域（BD）与转录激活域（AD）。这两个结构域各具功能，互不影响。但一个完整的激活特定基因表达的激活因子必须同时含有这两个结构域,否则无法完成激活功能。不同来源激活因子的BD区与AD结合后则特异地激活被BD结合的基因表达。基于这个原理，可将两个待测蛋白分别与这两个结构域建成融合蛋白，并共表达于同一个酵母细胞内。如果两个待测蛋白间能发生相互作用，就会通过待测蛋白的桥梁作用使AD与BD形成一个完整的转录激活因子并激活相应的报告基因表达。通过对报告基因表型的测定可以很容易地知道待测蛋白分子间是否发生了相互作用。26分子克隆技术包括哪些基本步骤目的基因和载体连接主要有哪些方法基本步骤一、目的基因的获取二、载体的选择三、目的基因和载体的酶切与连接四、重组DNA导入受体细胞五、重组体的筛选和鉴定目的基因和载体连接方法主要有一粘性末端连接，用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；本法适用于在质粒和目的基因上有相同单或双酶切位点；二平末端连接，质粒和目的基因上没有相同单或双酶切位点，人工接头，通过同聚尾连接；用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上POLY（DA）POLY（DT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来；（三）先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。7简述分子克隆中常用的工具酶及其作用。限制性核酸内切酶的主要用途1）在分子克隆过程中切割DNA以获取目的基因片段、切割载体形成切口，使目的基因能插入载体。2）分析限制性片段长度多态性（RFLP），用于遗传病的诊断，法医DNA指纹分析等。3）用于构建DNA的物理图谱、基因定位及DNA同源性分析等。DNA聚合酶1、DNA聚合酶和KLENOW片段KLENOW片段的主要功能有1补齐双链DNA的3末端，同时可使3末端DNA标记同位素；2在CDNA克隆中，合成CDNA第二链；3DNA序列分析。2、TAQDNA聚合酶TAQDNA聚合酶可用于DNA测序及通过PCR对DNA分子的特定序列进行体外扩增。3、逆转录酶依赖RNA的DNA聚合酶，它以RNA为模板、4种DNTP为底物，催化合成DNA，其功能主要有1逆转录作用；2核酸酶H的水解作用；3依赖DNA的DNA聚合酶作用。4、末端脱氧核糖核苷酰转移酶功能主要有1在载体或目的基因3末端加上互补的同质多聚尾，形成人工粘性末端，便于DNA重组连接。2用于DNA3末端的同位素探针标记。DNA连接酶（DNALIGASE）在DNA重组中的主要功能是催化两个DNA分子的5磷酸基团与3羟基形成3,5磷酸二酯键，将具有相同粘性末端或平末端的两条双链DNA片段连接起来，实现DNA的体外重组。碱性磷酸酶作用是催化除去DNA、RNA或DNTP上的5磷酸基团，其主要用途有出去DNA片段上的5磷酸，以防自身连接。在使用T4多核苷酸激酶和32P同位素标记前出去RNA或DNA上端的5磷酸。核酸酶S1可水解双链DNA、RNA或DNARNA杂交分子中的单链部分，其作用是出去双链DNA的粘性末端以产生平末端、出去CDNA合成时形成的发夹结构以及分析RNA的颈环结构和DNARNA分子的杂3交情况等。8举例说明载体应具备的基本要素以及双抗生素筛选和蓝白斑筛选的原理。1载体应具有以下特征能自我复制并具有较高的拷贝数，并有适宜的相对分子量，一般应10KB带有遗传筛选标记；有适当的限制酶切位点，便于外源基因的插入和筛选。（2）双抗生素筛选原理某些质粒载体如PBR322质粒中装有AMPR和TETR抗性基因，在含四环素和氨苄青霉素的平皿上都能够生长的细菌只含有空载体，此筛选方法称为双抗生素对照筛选。3BLUE/WHITESCREEN蓝白斑筛选。即半乳糖苷酶基因失活筛选。其原理是某些质粒载体带有大肠杆菌乳糖操纵子的LACZ基因，该基因含一段编码半乳糖苷酶氨基末端145个氨基酸肽的DNA片断，IPTG可诱导此片断合成，此片断能与宿主细胞所编码的缺陷型半乳糖苷酶实现基因内互补，形成完整的半乳糖苷酶。该酶能催化指使剂底物XGAL形成蓝色菌落。当外源基因插入LACZ基因中MCS多克隆位点，LAC肽基因阅读框架被破坏，细菌内将无半乳糖苷酶活性，结果重组克隆呈白色菌落。9有哪些常用的探针标记物如何进行探针的标记放射性同位素标记常用标记探针的同位素32P，半衰期短（143D），标记核苷三磷酸，灵敏度很高，分辨率不高。35S，标记蛋氨酸或取代核苷酸位磷酸基中的氧，灵敏度高，分辨率较高，核酸序列测定和原位杂交。3H，半衰期长（4417D），使用较少。125I，分辨率高，操作简单，安全防护要求较高，原位杂交。同位素标记方法1缺口平移法（双链）2随机引物法（单链）3DNA探针的末端标记4PCR标记DNA探针5单向体外转录制备RNA探针非放射性标记1）酶标记核酸探针辣根过氧化物酶（HRP）易进入细胞内部，便宜，易观察，应用最广泛。常用标记方法是戊二醛交联法和过碘酸钠法2）生物素（BIOTIN）标记核酸探针应用广泛，可替代同位素标记。用链亲和素系统检测。酶促标记法操作复杂，价格昂贵。光敏生物素（PHOTOBIOTIN）标记方法简单，价格适宜。地高辛（DIG）标记于DUTP上，通过随机引物或缺口平移法引入DNA分子中。可长期保存，不受组织、细胞中内源性生物素的干扰，敏感性高，检测产物反差好，背景染色低。广泛应用于SOUTHERN印迹杂交、斑点杂交、菌落杂交尤其是原位杂交。荧光素（FLUORESCEIN）标记方法有直接法和间接法。非放射性标记方法1化学修饰法简单、成本低、较通用。2酶促反应标记法灵敏度高，过程较复杂，成本较高。10影响核酸分子杂交的因素有那些如何进行杂交条件的优化影响核酸分子杂交的因素（1）温度和时间一般认为比TM低25左右的温度是复性的最佳条件，越远离此温度，复性速度就越慢；复性时温度下降必须是一缓慢过程，若在超过TM的温度下迅速冷却至低温（如4以下），复性几乎是不可能的。（2）DNA浓度DNA复性的第一步是两个单链分子间的相互作用“成核”，“成核”速度与DNA浓度的平方成正比；溶液中DNA分子越多，相互碰撞结合“成核”的机会越大。（3）DNA分子大小和复杂度DNA分子越大，复性速率越慢；DNA分子越复杂，复性速率也越慢。（4）离子强度对增加盐浓度可加快互补链合成双链的速度，盐中和DNA单链中磷酸基团的负电荷，4减少互补链静电排斥。优化方法探针的选择检测靶单个碱基改变选用寡核苷酸探针；在检测单链靶序列选用与其互补的DNA单链探针或RNA探针。长的双链DNA探针特异性较强，适宜检测复杂的靶核苷酸序列和病原体；100BP左右的探针适合原位杂交。探针的标记方法在检测单拷贝基因序列时，应选用标记效率高、显示灵敏的探针标记方法；在对灵敏要求不高时，可采用保存时间长的生物素探针技术和价廉的HRP显示系统等。探针的浓度随探针浓度增加，杂交率也增加，在较窄的范围内，随探针浓度增加，敏感性增加；膜杂交中32P标记探针与非放射性标记探针的用量分别为510NG/ML和251000NG/ML；原位杂交中，一般各种标记探针，其用量均为0550G/ML。杂交最适温度杂交技术最重要的因素之一是选择最适的杂交反应温度。若反应温度低于TM1015，碱基顺序高度同源的互补链可形成稳定的双链，错配对减少；最适复性温度比TM低25。一般情况下，在不含变性剂甲酰胺时，大多数杂交反应在65进行，当含50甲酰胺时，在42进行。反应时间和洗膜温度杂交时间短了，反应无法完成；长了引起非特异结合增多。一般杂交反应要进行20H左右；杂交后的最终洗膜温度一般应低于TM值512进行。作业二生物分子的分离纯化聚合酶链反应PCR一、名解荧光光度法利用测量荧光强度而建立起来的一类测定物质含量的分析方法，称为荧光光度法。酚抽提法以含EDTA、SDS及无DNA酶的RNA酶裂解缓冲液破碎细胞，经蛋白酶K处理后，用PH80的TRIS饱和酚抽提DNA，重复抽提至一定纯度后，根据不同需要进行透析或沉淀处理获得所需的DNA样品。碱裂解法在NAOH提供的高PH（120126）条件下，用强阳离子去垢剂SDS破坏细胞壁，裂解细胞，与NAOH共同使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性，释放出质粒DNA。比活单位蛋白质重量中靶蛋白的含量或生物学活性（比活常以活力单位数/毫克蛋白质表示）凝胶过滤层析凝胶过滤层析亦称凝胶色谱、排阻色谱或分子筛，是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法。凝胶色谱的机理是分子筛效应，在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部，而沿凝胶颗粒间的空隙最先流出柱外；而小分子可以进入凝胶颗粒内部的多孔网状结构，路径长、流速慢，以至最后流出柱外。因此，混合样品如同“过筛”一样，因分子大小的不同得以彼此分开。巢式PCR巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应PCR，使用两对PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因他们在第一次PCR扩增片段的内部）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。荧光定量PCR基于荧光能量传递技术（FRET），是距离很近的两个荧光分子间产生的一种能量转移现象。当供体荧光分子的发射光谱与受体荧光分子的吸收光谱重叠，并且两个分子的距离在10NM范围以内时，就会发生一种非放射性的能量转移，即FRET现象，使得供体的荧光强度比它单独存在时要低的多（荧光猝灭），而受体发射的荧光却大大增强（敏化荧光）。CT值扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环数。此时扩增是呈对数期增长。二、问答1、根据作用原理生物分子的分离纯化有那几类答根据作用原理生物分子的分离、纯化可分为以下几种类型（1）根据分子极性大小和溶解度的不同，如溶剂提取技术、盐析法、分配层析法、分级沉淀法等；5（2）根据分子形状和大小不同，如凝胶过滤层析等；（3）根据物质吸附性质不同，如选择性吸附与吸附层析法等；（4）根据分子带电性（电离性质）的差异，如离子交换层析、电泳、等电聚焦法等。（5）根据配体特异性，如亲和层析。2、分离纯化过程中，如何保持核酸的完整性答在整个操作过程中应尽量避免各种有害因素对核酸的破坏。1）温度不要过高04；高温破坏氢键2）控制PH值范围PH值410极端酸碱破坏磷酸二酯键3）保持一定离子强度4）减少物理因素对核酸的机械剪切力3、什么原因易引起DNA降解，该如何解决答引起DNA降解的原因有1）材料不新鲜或反复冻融2）未很好抑制内源核酸酶的活性3）提取过程操作过于剧烈，DNA被机械打断4）外源核酸酶污染5）反复冻融解决方法有1）尽量取新鲜材料，低温保存材料避免反复冻融2）液氮研磨或匀浆组织后，应在解冻前加入裂解缓冲液3）在提取内源核酸酶含量丰富的材料的DNA时，可增加裂解液中螯合剂的含量4）细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔5）所有试剂用无菌水配制，耗材经高温灭菌6）将DNA分装保存于缓冲液中，避免反复冻融4、在蛋白质分离纯化过程中应注意哪些因素答蛋白质是一类结构复杂、有生物活性的生物大分子，离开天然的存在体系，其结构与活性变得极不稳定，因此从生物材料中提纯各种靶蛋白均需要特定的条件。应注意各种因素对靶蛋白的影响1缓冲液2盐、金属离子和螯合剂3还原剂4去垢剂5增溶剂6蛋白酶抑制剂（PRONASEINHIBITOR）7蛋白质的环境因素，包括表面效应的影响温度的影响储存5简述PCR技术的基本原理答PCR技术的基本原理是DNA的半保留复制，在模板DNA、引物和四种DNTP存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促反应。PCR的基本原理PCR是在试管中进行的DNA复制反应，基本原理是依据细胞内DNA半保留复制的机理，以及体外DNA分子于不同温度下双链和单链可以互相转变的性质，人为地控制体外合成系统的温度，以促使双链DNA变成单链，单链DNA与人工合成的引物退火，然后耐热DNA聚合酶以DNTP为原料使引物沿着单链模板延伸为双链DNA。PCR全过程每一步的转换是通过温度的改变来控制的。需要重复进行DNA模板解链、引物与模板6DNA结合、DNA聚合酶催化新生DNA的合成，即高温（9095）变性、低温（4060）退火、中温（7075）延伸3个步骤构成PCR反应的一个循环，此循环的反复进行，就可使目的DNA得以迅速扩增。6PCR实验中，假阴性现象如何排除1取10L扩增混合液作模板再进行PCR扩增；2增加TAPDNA聚合酶的浓度；3增加靶DNA的量；4若模板为粗制品，提纯样品；5增加扩增循环次数；6适当降低退火温度。7在PCR过程中应注意哪些事项（1）防止污染，设置对照由于PCR反应极强的扩增能力和检测的灵敏性，微量样品污染便有可能导致假阳性结果的出现。为此在实验操作中应谨防污染的发生，并设置严格的对照，以提高PCR结果的正确性。在有条件的情况下，PCR实验室应设样品制备区、PCR操作区及反应产物分析区。在进行PCR反应时，应设阳性对照、阴性对照和试剂对照。（2）扩增产物总是阴性结果（无产物）时，应采取的措施取10L扩增混合液作模板再进行PCR扩增；增加TAPDNA聚合酶的浓度；增加靶DNA的量；若模板为粗制品，提纯样品；增加扩增循环次数；适当降低退火温度。（3）出现非特异性产物时，应采取的措施增加退火温度；减少TAPDNA聚合酶的浓度；减少退火及延伸时间；减少引物浓度；减少扩增循环次数。PCRSSCP单链构型多态性分析法（PCRSINGLESTRANDCONFORMATIONPOLYMORPHISM，简称PCRSSCP），本法就是将PCR产物双链DNA（DSDNA）变性为单链DNA（SSDNA），加样于变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，由于DNA分子在凝胶中的电泳迁移率与其分子量和空间结构有关，而空间结构又与SSDNA序列有关。因此，电泳结束后，SSDNA带位置的差异即可反映出PCR产物序列的差异。PCRRFLPPCR限制性片段长度多态性分析法（POLYMERASECHAINREACTIONBASEDONRESTRICTIONFRAGMENTLENGTHPOLYMORPHISM，PCRRFLP）不同的限制性核酸内切酶可识别特异DNA序列，所以用特定的限制性核酸内切酶对目的DNA分子进行消化，得到的酶切片段其大小和数量可以在一定程度上反应出目的DNA分子的序列信息；PCR扩增产物的检测方法凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法PCR限制性片段长度多态性分析法（PCRRFLP）单链构型多态性分析法（PCRSSCP）核酸探针杂交法PCR产物测序荧光PCR荧光定量PCR（FQPCR）基于荧光能量传递技术（FRET），是距离很近的两个荧光分子间产生的一种能量转移现象。当供体荧光分子的发射光谱与受体荧光分子的吸收光谱重叠，并且两个分子的距离在10NM范围以内时，就会发生一种非放射性的能量转移，即FRET现象，使得供体的荧光强度比它单独存在时要低的多（荧光猝灭），而受体发射的荧光却大大增强（敏化荧光）。基因芯片又称DNA芯片或DNA微阵列，将大量的基因片段有序地、高密度地排列在玻璃片或纤维膜等载体上，称之为基因芯片。7原位杂交是以特定标记的已知序列的核酸分子作为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交并对其进行检测的方法。代谢组学是通过考察生物体系（细胞、组织或生物体）受刺激或扰动后（如将某个特定的基因变异或环境变化后），其代谢产物的变化或随时间的变化，来研究生物体系的一门科学。检测方法气质联用、液质联用、毛细管电泳质谱联用技术和核磁共振技术。作业三基因诊断基因治疗一、列举主要的几种基因诊断技术及其应用答基因诊断分为DNA诊断和RNA诊断（1）DNA诊断技术包括PCR；SEQUENCING；DNAMICROARRAYPCR技术（聚合酶链反应）实现了痕量核酸模板的体外扩增，提高了检测灵敏度和反应特异性。开展获得性基因病（病原微生物）的基因诊断。SEQUENCING（测序）是基因突变检验的最直接、最准确的方法，它不仅可确定突变的不为，还可确定突变的性质，其他方法的诊断结果都可以用测序来进一步验证；DNAMICROARRAY（DNA芯片）速度快，检测效率高，成本低，自动化程度高，避免了交叉感染，且通过控制分子杂交的严谨度，是基因诊断的假阳性率、假阴性率显著降低；（2）RNA诊断包括RTPCR；NORTHERNBLOTTING；REALTIMEPCR；CDNAMICROARRAY。RTPCR（逆转录PCR）对基因转录产物进行定性与定量的检测，精度更高，且样品用量显著减少，利用此方法对难检测基因进行相应的检测与研究更易获得成功；NORTHERNBLOTTING（印迹杂交）是研究基因表达量常用的方法；REALTIMEPCR（实时荧光定量PCR）实现了核酸的实时定量检测（从定性到定量）表达谱芯片技术能更多地揭示基因之间表达变化的相互关系，从而研究基因与基因之间内在的作用关系；检测基因表达变化灵敏度高，节约费用和时间。目前这些技术应用最多的是1症状前诊断（疾病易感性）。2产前诊断（羊水、脐带血、绒毛膜）遗传性疾病。3着床（植入）前诊断。4临床诊断（国外已用于乳腺癌、结肠癌等）。二、感染性疾病的基因诊断策略感染性疾病是由细菌、病毒、支原体、衣原体、寄生虫等病原体侵入机体而引起的,以前对于这些病原体多采用微生物学、免疫学和血液学相关手段进行检测,但是这些方法受灵敏度和特异性的限制,不易早期诊断。随着各种病原体基因结构的阐明,利用分子诊断技术早期、快速、敏感、特异地检测感染性病原体本身RNA或DNA成为可能。应用分子技术直接测定这些病原体基因,不仅可以对微生物感染做出确诊,也能诊断出带菌毒者或潜在性感染,还可以对感染性病原体进行分型和耐药性监测。因此,对于感染性疾病的分子诊断检测对象主要包括感染性病毒、细菌、寄生虫、支原体、衣原体等在人体内存在的外源性生物DNA或RNA。从原理上讲,这类检测一般根据已知外源DNA或RNA顺序,采用PCR或RTPCR的方法就可以进行快速、简便而准确的诊断。因此,这类疾病的基因诊断应用性极强,在严格掌握质控的前提下,可在临床广泛运用。其诊断策略可以分为以下两种一是一般性检出策略,即只需要提供是否有某种病原体的感染二是完整检出策略,即不仅对病原体做出诊断,还要进行分型包括亚型和耐药性方面的检测。8三、基因治疗的病毒载体主要有哪几种各有怎样的特点答常用的载体有两类病毒载体和非病毒载体。1病毒载体逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、慢病毒载体、疱疹病毒载体等1腺病毒载体特点1）宿主范围广2）腺病毒蛋白表达不以宿主增殖为必要条件3）可获得高病毒效价4）重组体非常稳定5）不会引起肿瘤6）有较高的安全性7）无包膜，不易被补体灭活，可直接在体内应用8）不整合入染色体；2逆转录病毒载体的特点1）结构和感染过程与普通逆转录病毒相似；2）可使靶细胞变成稳定表达目的基因的转化细胞；3）感染靶细胞后不扩散；4）假病毒感染靶细胞的效率非常高；5）不感染非增殖细胞；3慢病毒载体特点高效感染宿主细胞，并且其感染范围广；能逃避人体免疫系统的监视，从而防止免疫排斥；缺点引起抑癌基因的受抑和原癌基因的激活，以及对细胞的毒性和产生变种病毒；4单疱疹病毒载体特点1）滴度高2）容量大3）增殖细胞和非增殖细胞均可感染4）不整合，但可长期存在并可稳定表达；5痘苗病毒载体它是线形双链DNA的有包膜病毒，其核心颗粒不依赖宿主细胞而独立引进转录和复制，宿主范围广泛且易于培养，容易获得高滴度的病毒颗粒。同时痘苗病毒基因组中大量非必需基因的缺乏并不影响其在宿主细胞的复制能力，可允许在同一或不同非必需区插入多个基因，以表达多种或一种外源蛋白。缺点细胞毒性；病毒能被人体的补体系统灭活并降解。四、查阅相关文献，说明基因治疗在SCID中的应用。答；重症联合免疫缺陷（SCID），为人类第一种应用体细胞基因治疗技术对之进行治疗的疾病，即将腺苷脱氨酶（ADA）导入一个4岁患有严重复合免疫缺陷综合征（SCID）的女孩。采