病毒载体研究进展ppt课件

.,病毒载体研究进展,中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室（北京宣武区迎新街100号）,.,.,病毒载体概述（1）,要求：1、携带外源基因并能包装成感染性病毒颗粒2、介导外源基因转移和表达3、对机体不致病,容量：自身基因组大小的105%110%,组成：1、病毒复制和包装元件2、病毒基因3、插入的外源基因或元件4、病毒外壳/外膜,用途：基因转移和表达1、基因治疗2、疫苗3、器官移植4、组织工程5、转基因动物6、基因功能研究,.,病毒载体概述（2）,优点：1、利用病毒天然的感染性进入细胞，转导效率高；2、复杂的装配过程由细胞完成；3、不同的病毒载体具有不同的表达特点。,.,常用的病毒载体的特点：,.,病毒载体研究方向,1、病毒包装系统,2、无病毒基因的病毒载体,6、自我扩增型病毒载体,7、条件增殖型病毒载体,5、嵌合型病毒载体,3、靶向性病毒载体,4、可调控表达的病毒载体,8、新病毒载体,.,病毒载体包装系统,组成：1、宿主细胞2、辅助元件（辅助质粒、辅助病毒）3、被包装的DNA/RNA包含顺式作用元件,单因素生产系统（one-componentsystem),双因素生产系统(two-componentsystem),gagpolenv,图1反转录病毒包装系统示意图,图2腺病毒包装系统示意图,293cell,E1a,b,JM17,AdShuttle,293cell,E1a,b,.,多因素生产系统(multi-componentsystem),图3腺病毒伴随病毒包装系统示意图,Hostcell+vectorDNA,Helpervirus+helperplasmid,图4双因素系统生产重组AAV病毒示意图,proviralcell,Recombinanthelpervirus(rHSV-repcap),.,无病毒基因的病毒载体,被包装的DNA/RNA中不含任何病毒编码基因，只保留其复制和包装所必需的顺式作用元件。获得的重组病毒颗粒具有野生型病毒的外壳/外膜和感染性，但不表达病毒蛋白。,腺伴随病毒载体：,反转录病毒载体：,腺病毒载体：,单纯疱疹病毒载体：,gene,ITR,ITR,pA,.,无辅助病毒包装系统,图5重组AAV无辅毒包装系统,AdenoviruswithpackagingsignalflankedbyloxP,图6mini-adnovirus无辅毒包装系统,.,靶向性病毒载体,转导靶向性,转录靶向性（特异性）,改造病毒外壳/外膜,连接靶向性结合分子,Modifiedadenovirus,cell,组织特异性启动子,肿瘤选择性启动子,细胞周期调控启动子,肿瘤血管内皮导向启动子,双特异性启动子,病毒增殖的特异性转录调控,.,可调控表达的病毒载体,细胞的调控元件,病毒的调控元件,人工合成的调控元件,细胞特异性转录,细胞启动子病毒启动子albuminMVMP4TyrosinaseorTRP-1B19promoterPSAHBVMBPJCVMCKEBVGFAPNSEKDR/flt-1AFPCEAerbB2HREMDR1,四环素调控,合成的转录因子,FKB12,ZFHD-1,FRAP,P65,rapamycin,RU486,Diphenolindene,muristerone,.,.,重组病毒的生产和纯化,小量制备和纯化,大量制备和纯化,场所细胞培养细胞裂解病毒分离病毒纯化制剂保存,培养瓶转瓶、细胞工厂、发酵罐,反复冻融机械法或化学法裂解,实验室中试车间,离心离心、超滤、萃取,密度梯度超速离心浓缩、柱层析,配方,缓冲液,低温,.,病毒载体与基因治疗产业化,基因治疗产品的知识产权构成1、治疗基因2、调控元件3、改造的外壳/外膜4、靶向分子5、包装系统6、生产和纯化技术7、制剂和保存技术,产业化的组织和实施：1、合作开发2、专业分工3、政府支持和企业投资4、利益分配,基因治疗的三个核心部分1、基因载体系统2、基因表达系统3、治疗基因,.,知识产权和基础研究,专利对学术研究的影响1、无影响（对非常早期研究）2、有影响（对临床试验和可能的商业开发）,基因治疗领域的知识产权主要通过专利系统来保护,对于基因治疗公司最重要的专利是：1、载体系统；2、生产过程；3、整体治疗方案治疗基因和表达系统可以从其它方购买使用权。,政府支持对基因治疗产业化的重要作用1、政策上促进基因治疗的科研、临床和商业开发2、资助