裸鼠移植瘤方法建立

1. 细胞准备：1.1用 PBS 清洗细胞两遍，加入胰酶消化，吹打离心，无血清培养基清洗两次，然后用 无血清培养基将细胞重悬，进行细胞计数，使得 200L 悬浮液里面含有 1107个细胞。总共需要细胞: 18（只）*200ul*1.2=4.32ml107个，将混合好的细胞放于4C冰盒运至动物房。2. 裸鼠准备：2.1 3周龄小鼠饲养一周后， 每只于右侧腋腹壁皮下接种MDA-MB-231和MCF-7细胞 1107/200 L。每日观察肿瘤生长情况, 待出瘤后使用游标卡尺测量肿瘤体积, 肿瘤体积=(Dd 2 )/2(D表示肿瘤的长径, d表示肿瘤的短径)。（注射器型号BD一次性使用无菌胰岛素注射器 规格：1ml 25G）2.2 当肿瘤体积约为80 mm 3 时(100至150左右)，将裸鼠进行随机分成3 组（肿瘤大小，体重尽量接近），每组3只。对照组，TO901317组，DADS组。每天（每天给药？会不会太频繁？可以查阅相关类似成药的半衰期或综合国外文献的数据）将实验组灌胃TO901317，剂量为 25mg/kg/d，将粉末状的 TO901317 溶解到蓖麻油（或芝麻油以及生理盐水）里，每只裸鼠注射含有 TO901317 的蓖麻油 200L；对照组注射等体积的蓖麻油。连续注射两周。（12号灌胃针头，每次用后一定要煮沸消毒）（灌胃进针时针头偏右，一般就不会进肺了）腹腔注射DADS，剂量为50mg/kg (含10%小牛血清的D ME M培养液 （最好使用生理盐水）)每次注射200 L , 隔日注射, 连续7次给药。2.3每23d观察测量1次, 计算肿瘤相对体积(RTV)。 以每组动物移植瘤体积的平均值, 绘制移植瘤生长曲线。实验结束时在超净工作台上对裸鼠进行拍照，完整剥离肿瘤，用游标卡尺对肿瘤的大小进行测量，用电子天平称量移植瘤重量，用手术剪取出肿瘤，拍照。照相结束后，用剪刀将每个肿瘤分成 3 份，一份用来提取总 RNA，一份用来提取组织内总蛋白质，这两份组织放到冻存管里，冻于液氮罐中，第三份用来做免疫组化，因此，该样本须置于 4%的多聚甲醛（有毒，小心配置）固定剂中进行固定。备注：1. 裸鼠饲养情况 裸鼠有专门的SPF饲养动物房，买裸鼠前动物住的盒子、垫料、水和饲料要消毒。提前准备好，一般送裸鼠的单位会配备专门的SPF箱子，接到裸鼠后在专门裸鼠动物房进行交接。这个有个通风台也要提前消毒预备好。裸鼠到达目的饲养地后一般是饲养1-2周才开始试验，这也是国际上的通行规定。盒子要每2-3天消毒一次，根据裸鼠的排泄情况而定，所以要有替换的盒子。一般来说各个医院的动物房这些盒子比较紧缺，需要提前计算好。别到时候需要更换的时候找不到盒子。2.动物接种数量 根据你离心后细胞计数的数量。然后是用多少的液体稀释，一般是PBS。如果你培养后经过离心收集到的细胞总数是1*108次方。也就是10*107次方/5106个= 20个。那你可以稀释到4ml，每次给予0.2ml，正好可以接种20只裸鼠。根据肿瘤细胞的类型和你所给予的干预情况，一般接种3周瘤子可以达到0.5-1.2cm左右。用左手揪起来一块皮，然后在揪起来的皮和身体之间那里注射，就是皮下而不是皮内了先把针头插进去，然后挑起来，看清楚不是体内而是皮下，也没有戳穿皮肤，然后再开始注射裸鼠的皮皱皱的，很容易揪起来一块，如果不麻醉就是用手拎着注射针头很容易戳到别的地方放在4度3040分钟对细胞活力影响不大。用哪种液体悬浮细胞也都行，用无血清培养基效果可能会好一点点。应该是用PBS或HANKS液处理的,建议不要用无血清培养基或者其他培养液.里头成分复杂:1,虽然裸鼠免疫缺陷,但是培养基成分复杂,有时还会有致敏原什么的,引起不必要的麻烦.2,只要能够维持一定的渗透压,持续一个小时肯定是没有问题的,这点PBS或HANKS液就够了,而且影响因素少.裸鼠对于实验环境又很敏感，特别是在给予药物处理之后。不知道大家给药的灌胃器或注射器是否消毒？药液是否无菌过滤？3、操作是否严格我们以前也会遇到这样的情况，我们现在对于裸鼠的操作都在超净台里进行（包括对于饲养人员的换水换料也是在超净台里进行的），对不同笼子的动物进行操作的时候要用酒精擦手。平时多注意对裸鼠的观察如果有异常表现如体重忽然下降、弓背、皮屑增多，应马上对其进行隔离观察。总之一定要多观察细节，对于打架的动物也应及时隔离。4、环境因素我个人认为这个是最重要的，首先免疫缺陷鼠应在单独的SPF级房间内进行饲养绝对不能和其它非免疫缺陷鼠在同一个房间内时行饲养，并且减少人员流动，物品进出屏障一定要严格消毒，只有大家共同维护好环境才是保障实验成功的关键。我碰到过裸鼠身上起白皮，体重也下降挺严重的，一是动物质量的问题，二是有感染某种菌，三可能是药物的作用。我当时也是在做药效中发生的，没有太好的方法，我就是每次做时用酒精棉球擦拭全身，不过还是可以恢复的，好后与正常鼠没区别。其实裸鼠很强壮，没有想象中那么娇嫩，但是最怕鼠肝炎，所以要在隔绝与正常大小鼠的直接或者间接接触