生物工程概论复习题

1第二章基因工程复习题一、选择题1限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是（D）A修复自身的遗传缺陷B促进自身的基因重组C强化自身的核酸代谢D提高自身的防御能力2生物工程的上游技术是（D）A基因工程及分离工程B基因工程及发酵工程C基因工程及细胞工程D基因工程及蛋白质工程3基因工程操作的三大基本元件是I供体II受体III载体IV抗体V配体（A）AIIIIIIBIIIIIVCIIIIIIVDIIIVV4多聚接头（POLYLINKER）指的是（A）A含有多种限制性内切酶识别及切割顺序的人工DNA片段B含有多种复制起始区的人工DNA片段C含有多种SD顺序的人工DNA片段D含有多种启动基因的人工DNA片段5下列五个DNA片段中含有回文结构的是（D）AGAAACTGCTTTGACBGAAACTGGAAACTGCGAAACTGGTCAAAGDGAAACTGCAGTTTC6若将含有5末端4碱基突出的外源DNA片段插入到含有3末端4碱基突出的载体质粒上，又必须保证连接区域的碱基对数目既不增加也不减少，则需用的工具酶是（D）IT4DNA聚合酶IIKLENOWIIIT4DNA连接酶IV碱性磷酸单酯酶AIIIBIIIICIIIIIDIIIIII7下列有关连接反应的叙述，错误的是（A）A连接反应的最佳温度为37B连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10C连接反应缓冲体系的ATP浓度不能高于1MMD连接酶通常应过量25倍8T4DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起，其底物的关键基团是（D）A2OH和5PB2OH和3PC3OH和5PD5OH和3P9载体的功能是I运送外源基因高效进入受体细胞II为外源基因提供复制能力III为外源基因提供整合能力（D）AIBIIIICIIIIIDIIIIII10克隆菌扩增的目的是I增殖外源基因拷贝II表达标记基因III表达外源基因（D）AIIIBIIIICIIIIIDIIIIII211下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是（C）A大肠杆菌繁殖迅速B枯草杆菌分泌机制健全C链霉菌遗传稳定D酵母菌表达产物具有真核性12考斯质粒（COSMID）是一种（B）A天然质粒载体B由DNA的COS区与一质粒重组而成的载体C具有溶原性质的载体D能在受体细胞内复制并包装的载体13某一重组DNA（62KB）的载体部分有两个SMAI酶切位点。用SMAI酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的SMAI酶切位点共有（D）A4个B3个C2个D至少2个14外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达的优点是I融合基因能稳定扩增II融合蛋白能抗蛋白酶的降解III表达产物易于亲和层析分离（D）AIIIBIIICIIIIDIIIII15提高重组率的方法包括I加大外源DNA与载体的分子之比II载体分子除磷III连接酶过量IV延长连接反应时间（A）AIIIBIIIIIICIIIIIVDIIIIIIV16识别基因序列不同，但酶切后产生的粘性末端相同的一类酶为（B）A同工酶B同尾酶C同裂酶D同位酶17PBR322质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件（ABD）AAMPR和TETRBORI复制子CLACZ标记D多克隆位点18噬菌体外包装目的基因片段的大小应为（D）A小于噬菌体DNA的50B小于噬菌体DNA的75C大于噬菌体DNA的105D为噬菌体DNA的7510519DNA连接酶的功能是ABA恢复3OH与5P之间的磷酸二酯键B恢复缺口C恢复裂口D可使平末端与粘性末端连接20PUC质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件ABCDAAMPRBORI复制子CLACZ标记D多克隆位点21下列属于获取目的基因的方法的是D利用MRNA反转录形成从基因组文库中提取从受体细胞中提取利用PCR技术利用DNA转录人工合成ABCD22的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的主要作用是BA提高受体细胞在自然环境中的耐药性B有利于对目的基因是否导入进行检测C增加质粒分子的分子量D便于与外源基因连接23有关基因工程的叙述正确的是D3A限制酶只在获得目的基因时才用B重组质粒的形成是在细胞内完成的C质粒都可作为运载体D蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料24哪项不是基因表达载体的组成部分BA启动子B终止密码C标记基因D目的基因25下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法BA基因枪法B显微注射法C农杆菌转化法D花粉管通道法26以下说法正确的是（C）A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列B、质粒是基因工程中唯一的运载体C、运载体必须具备的条件之一是具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D、基因控制的性状都能在后代表现出来27不属于质粒被选为基因运载体的理由是（D）A、能复制B、有多个限制酶切点C、具有标记基因D、它是环状DNA28有关基因工程的叙述中，错误的是（A）A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来B、限制性内切酶用于目的基因的获得C、目的基因须由运载体导入受体细胞D、人工合成目的基因不用限制性内切酶29有关基因工程的叙述正确的是（D）A、限制酶只在获得目的基因时才用B、重组质粒的形成在细胞内完成C、质粒都可作为运载体D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料30基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（C）A、人工合成目的基因B、目的基因与运载体结合C、将目的基因导入受体细胞D、目的基因的检测和表达31下列获取目的基因的方法中需要模板链是（B）A从基因文库中获取目的基因B利用PCR技术扩增目的基因C反转录法D通过DNA合成仪利用化学方法人工合成32下列有关基因工程的叙述中，错误的是AC4A、DNA连接酶将粘性末端的碱基对连接起来B、基因探针是指用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子C、基因治疗主要是对有缺陷的进行修复D、蛋白质中氨基酸序列可为合成目的基因提供资料二、是非判断题1DNA连接酶是一种能催化二条DNA链之间形成磷酸二酯键的酶，因此该酶既可修复基因序列中的缺口，也可修复裂口。（）2质粒提取后，在琼脂糖电泳出现一条带时说明质粒提取纯度高，当为三条带时为纯度不高。（）3、入噬菌体的插入型载体只有一个单一限制酶切点，替换型载体有2个成对的限制性酶切点。（）4、原核细胞和真核细胞转录的MRNA均具有与RRNA结合的SD序列，以利于进行有效的转录。（）5、CDNA文库是包含有细胞中所有MRNA，因此该文库能包含细胞所有的遗传信息。（X）1基因工程可改变生物或其分子的遗传物质（）2通过限制性核酸内切酶和DNA连接酶等作用，在体外将不同来源的DNA片断重新组合成新的DNA分子重组DNA。（）3基因的“剪刀”是限制性内切酶（）4基因的“针线”是DNA连接酶（）5基因的“运输工具”是载体（）6基因的“剪刀”是DNA连接酶（）7基因的“针线”是限制性内切酶（）8将目的基因与载体连接过程是由限制性内切酶来完成。（）9将目的基因与载体连接过程是由DNA连接酶连接酶来完成。（）10通过基因工程菌可生产胰岛素、人生长激素、干扰素等蛋白质药物。（）三、填空题1、在LACI标记基因插入外源基因，经IPTG诱导，在XGAL培养基中显白色，为阳性克隆，未插入基因的克隆显蓝色，为阴性克隆。2、理想的质粒克隆载体应具备以下基本条件，如能自主复制、一种或多种限制酶的酶切位点、筛选标记、分子量小易拷贝。3、点突变的基因系列在碱基替换中，若为一个嘌呤换成另一个嘌呤或一个嘧啶换成另一个嘧啶者称转换，若一个嘌呤换成一个嘧啶或一个嘧啶换成一个嘌呤者称颠换。4、基因表达的四大表达系统分别为大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞、昆虫细胞。5、基因与载体的平末端连接方法有哪些T4连接酶连接法。末端核苷酸转移酶加同聚物尾巴后，再用DNA连接酶进行连接；化学合成衔接物后连接DNA分子。5、目的基因与载体连接方式有哪些1粘性末端连接；2）平头末端连接；3）人工接头法；4）同源多聚尾连接法6、如何利用抗性标记基因筛选阳性克隆抗性标记筛选；抗性基因插入失活筛选；LACZ基因失活筛选。7、核酸操作的基本技术有哪些核酸提取与纯化核酸的检测与保存核酸的凝胶电泳5核酸分子杂交8、基因工程所需的基本条件1、用于核酸操作的工具酶；2、用于基因克隆的载体；3、用于基因转移的受体菌或细胞。9、KLENOW酶在有DNTP情况下，呈现DNA聚合酶活性，在没有DNTP情况下呈现外切酶活性。10、利用PCR技术扩增目的基因概念PCR全称为_聚合酶链式反应_，是一项在生物_体外_复制_特定DNA片段_的核酸合成技术原理_DNA复制_条件_已知基因的核苷酸序列_四种脱氧核苷酸_一对引物_、_DNA聚合酶_前提条件方式以_指数_方式扩增，即_2N_（N为扩增循环的次数）结果使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增11PCR技术扩增过程A、DNA变性（9095）双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成_单链DNAB、复性（5560）系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部_双链_。C、延伸（7075）在TAQ酶的作用下，从引物的5端3端延伸，合成与模板互补的_DNA链_。DNA的四种核酸的碱基分别是胸腺嘧啶、胞嘧啶、腺嘌呤和鸟嘌呤。25在基因工程中应用的酶类统称为工具酶。四、名词解释1同尾酶某些限制性内切酶识别的碱基顺序不同，但酶切后产生同样粘性末端的两种酶2柯斯（C0S）质粒带有噬菌体的COS位点和整个PBR322的DNA顺序的大肠杆菌质粒。3SD序列为MRNA能在细菌核糖体上产生有效结合和转译的特殊序列。4质粒不亲和性在没有选择压力的情况下，两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中稳定地共存的现象。5CDNA文库是指某生物某一发育时期所转录形成的CDNA片段与某种载体连接而成的克隆的集合。6穿梭质粒载体指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记，因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制的质粒载体。7基因GENE具有特定功能的DNA片段，这些片段有的编码蛋白质，有的编码RRNA、TRNA，有的则是与复制、转录调控有关的DNA序列。8基因重组由于不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合，形成新DNA分子的过程。9基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。6是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的新的生物类型和生物产品10目的基因OBJECTIVEGENE又叫靶基因TARGETGENE，是指根据基因工程的目的,设计的所需要的某些DNA分子片段，它含有一种或几种遗传信息的全套密码CODE11基因表达基因表达GENEEXPRESSION是指细胞在生命过程中,把储存在DNA顺序中遗传信息经过转录和翻译,转变成具有生物活性的蛋白质分子生物体内的各种功能蛋白质和酶都是同相应的结构基因编码的12双功能抗体将识别效应细胞的抗体和识别靶细胞的抗体联结在一起,制成双功能性抗体,称为双特异性抗体如由识别肿瘤抗原的抗体和识别细胞毒性免疫效应细胞CTL细胞,NK细胞,LAK细胞表面分子的抗体CD3抗体或CD16抗体制成的双特异性抗体,有利于免疫效应细胞发挥抗肿瘤作用五问答题1真核细胞基因组中的基因常有内含子存在，能否在原核细胞中表达能，为什么不能，为什么不能，因为原核细胞缺乏对真核基因中内含子的剪接功能和转录后加工系统。原核生物必须有相应的原核RNA聚合酶可识别原核细胞的启动子,以催化RNA的合成。基因表达是以操纵子为单位，操纵子由数个相关的结构基因和调控功能的部位组成的。因此在构建原核表达载体时必须有1个强的原核启动子及其两侧的调控序列。2质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率目的基因片断与载体由相同的单一限制性核酸内切酶（如ECORI）消化酶切后,两者的两端均具有相同的粘性末端,称为单酶切点的粘性末端,又称全同源性粘性末端高背景载体经单一限制性核酸内切酶切割后,载体分子易于自我环化,既不利于目的基因的重组连接,大大降低阳性克隆效率,又可使非重组性载体造成高背景。为了防止载体的自我环化，通常用碱性磷酸酶去除载体粘性末端的5P以抑制DNA的自我环化。在连接反应中,具有5P，的目的基因DNA片断可有效地与去磷酸化质粒DNA载体通过粘性末端发生互补连接,尽管产生的重组DNA分子于连接点含有两个缺口的开环分子,尽管在转化时其转化效率高于线性低于闭和环,但转化大肠杆菌后,在菌体内其缺口可获得修复。双向插入经单一限制核酸内切酶（如ECORI）切割的目的基因和载体,因二者的粘性末端是相同的,因此在连接反应中,目的基因可发生双向插入,载体对目的基因表达是有方向的,而目的基因可双向与之相连,这种连接若以克隆目的基因片段为目的没有影响,若以表达为目的,我们就要对插入的片段进行方向鉴定,因目的基因由起始密码子向终止密码子方向表达是定向转录的,一旦启动子与目的基因编码顺序方向相反就不能正确转录目的基因的MRNA。若构建表达DNA重组体选用双酶切切割目的基因和载体，可使目的基因与载体的连接发生定向连接重组,以便定向克隆。3将外源性DNA克隆到LACZ区段的插入型噬菌体上后，如何筛选重组噬菌体半乳糖苷酶失活的插入型载体，在其基因组中含有一个大肠杆菌的LACZ区段，此区段编码有半乳糖苷酶基因LACZ，在诱导物IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）存在下，半乳糖苷酶能作用XGAL5溴4氯3吲哚D半乳糖苷形成蓝色化合物（5溴4氯靛蓝）。这样由这种载体感染的大肠杆菌LAC指示菌（LAC基因缺陷菌），涂布在补加有IPTG和XGAL的培养基平板上，会形成蓝色的噬斑，但若在LACZ区段上插入外源DNA片段，就会阻断半乳糖苷酶基因LACZ的编码序列，这种重组体感染的LAC指示菌由7于不能合成半乳糖苷酶，只能形成无色的噬菌斑，相反未发生外源基因插入则出现蓝色噬菌斑，以利筛选。4基因与载体的平末端连接方法有哪些简要或图示说明均可。（1）T4DNA连接酶法连接平末端DNA分子的方法有2种，一种是直接用T4连接酶连接，另一种是先用末端核苷酸转移酶给平末端DNA分子加上同聚物尾巴之后再用DNA连接酶进行连接。T4DNA连接酶同一般的大肠杆菌DNA连接酶不同。T4DNA连接酶除了能够封闭具有3OH和5P末端的双链DNA的缺口之外,在存在ATP和加入高浓度酶的条件下,它还能够连接具有完全配对碱基的平末端DNA分子,但其连接效率比粘性端要低的多。（2）同聚物加尾法运用末端核苷酰转移酶，能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到DNA分子单链延伸末端的3OH基因上,它并不需要模板链的存在,它一个一个加上核苷酸,构成由核苷酸组成的尾巴,长度可达100个核苷酸。5如何从所克隆到基因重组体中鉴定目的基因的存在和正确性根据插入基因的遗传性状进行筛选只有当已知需克隆基因所编码蛋白质的功能,且该蛋白质又为细菌的生命活动所必需时,即可用该方法筛选。如已知蛋白质中的亮氨酸（LEU）为LEU营养缺陷菌所必需,当外源目的基因可表达亮氨酸,将该基因的重组子转入LEU缺陷菌中,在不含亮氨酸的基本培养基平板中,只有重组子表达的亮氨酸才能被LEU缺陷菌所利用而能生长繁殖,形成菌落。因而能生长的细菌集落，均为阳性的重组子克隆，而无该重组子的LEU缺陷菌在不含亮氨酸的平板上则不能生长，不能形成菌落。根据重组子的结构特征筛选1重组子大小鉴别筛选重组子中因装有一段较大分子量的外源基因DNA,因此其分子量明显比原载体大得多,因此可从平板上挑取菌落分别提取重组载体（如质粒重组子）和原载体（质粒），无需用限制性内切酶消化，直接进行凝胶电泳，携带外源性目的基因的重组子质粒因分子量大，电泳迁移率较小，其电泳条带在后，而原载体质粒因分子量较小，电泳迁移率较大，其电泳条带在前。通过比较可初步判断重组子中是否插入外源基因片段。本方法适用于插入片段较大的重组子的初步筛选。2酶切鉴定对于筛选出的具有重组子的菌株，应经小量培养后，再分别提取原载体或重组体载体（重组质粒或重组噬菌体DNA），根据已知重组时外源基因两端的酶切位点，分别用相应的两种内切酶进行酶解，经琼脂糖电泳后，原载体因无外源性目的基因，切开后变成线性，电泳呈一条带，若载体上有外源性目的基因插入，切开后电泳出现两条带一条为载体质粒线性条带，一条为释放出的插入基因片断的小分子条带，这样就可以看出载体中是否有插入的目的基因片断，以及由DNAMARKER条带对比分析可得知插入基因片段的大小3目的基因序列测定6基因工程诞生的理论基础是什么是现代分子生物学领域理论上的三大发现和技术上的三大发明。理论上的三大发现证实了DNA是遗传物质揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定技术上的三大发明限制核酸内切酶的发现与DNA切割DNA连接酶的发现与DNA片段的连接基因工程载体的研究与应用7如何有效地提高外源基因的表达效率8提高启动子强度缩短启动子同克隆基因间距离高效的翻译起始序列高效的转录终止区提高质粒拷贝数及稳定性用以下方法提高翻译水平调整SD序列与AUG间的距离用点突变的方法改变某些碱基增加MRNA的稳定性的减轻细胞的代谢负荷诱导表达表达载体的诱导复制提高表达蛋白的稳定性，防止其降解克隆一段原核序列，表达融合蛋白采用某种突变菌株表达分泌蛋白质8大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么优点大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚，对其基因表达调控的分子机理也比较了解，而且历经二十年的基因工程实践，大肠杆菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系，有多种适用的寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。缺点在通常情况下，细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子；许多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰，如正确的折叠和组装，而细菌中通常并没有这样的修饰机制，从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白；外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别，并被当做“异已分子”降解掉。9什么是互补筛选质粒载体具有半乳糖苷酶基因（LACZ），当外源DNA插入到它的LACZ，可造成表达后的半乳糖苷酶失活，利用这一点就可以通过大肠杆菌转化子菌落在添加有XGALIPTG培养基中的颜色变化鉴别出重组子和非重组子。有些大肠杆菌上带有LACZ基因的部分编码序列，质粒载体中含有别一部分编码序列，当质粒转入载体后，可形成具有酶活性的蛋白质。这种LACZ基因上缺失了一部分编码序列的突变体与带有这一部分编码序列的突变体之间实现互补的现象叫互补。10真核细胞基因结构和原核细胞的有何相同点和不同点1）相同点都是由能够编码蛋白质的编码区和具有调控作用的非编码区组成。2）不同点原核细胞基因的编码区是连续的，真核细胞基因的编码区是间隔的，不连续的。11基因克隆常用的载体必须具备的基本条件具有独立复制能力具备多个限制酶的识别位点多克隆位点具有遗传表型或筛选标记有足够的容量以容纳外源DNA片段可导入受体细胞。复习题2基因重组与基因工程一、A型题1实验室内常用的连接外源性DNA和载体DNA的酶是（A）ADNA连接酶BDNA聚合酶CDNA聚合酶DDNA聚合酶E反转录酶2用来鉴定DNA的技术是（B）ANORTHERN印迹BSOUTHERN印迹CWESTERN印迹D亲和层析E离子交换层析3下列那项不是重组DNA技术中常用的工具酶（D）A限制性核酸内切酶BDNA连接酶CDNA聚合酶DRNA聚合酶E反转录酶4关于限制性核酸内切酶的叙述，下列哪项是错误的（E）A限制性核酸内切酶分为三类，用于基因工程的为酶9B限制性核酸内切酶切割后可产生粘性末端或平端C识别的核苷酸序列个数可以是6个或8个D识别的序列一般具有回文结构E识别的DNA为单链5关于基因工程的叙述，下列哪项是错误的（B）A基因工程也称基因克隆B只有质粒DNA可作为载体C重组体DNA转化或转染宿主细胞D需获得目的基因E需对重组DNA进行纯化、筛选6有关质粒的叙述，下列哪项是错误的（E）A小型环状双链DNA分子B可小到23KB大到数百个KBC能在宿主细胞中独立自主地进行复制D常含有耐药基因E只有一种限制性核酸内切酶切口7下列哪项不是重组DNA的连接方式（C）A粘性末端与粘性末端的连接B平端与平端的连接C粘性末端与平端的连接D人工接头连接E同聚物加尾连接8DNA克隆不包括下列哪项步骤（E）A选择一个适合的载体B限制性核酸内切酶在特异位点裂解质粒和目的基因C用连接酶连接载体DNA和目的DNA，形成重组体D用载体的相应抗生素抗性筛选含重组体的细菌E重组体用融合法导入细胞9基因重组是指DNA分子的（A）A共价连接B氢键连接C离子键连接D交换E退火10在分子生物学中，重组DNA又称为（D）A酶工程B蛋白质工程C细胞工程D基因工程EDNA工程11基因工程中，不常用到的酶是（E）A限制性核酸内切酶BDNA聚合酶CDNA连接酶D逆转录酶EDNA解酶12能识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类酶称为（B）ADNA内切酶B限制性内切核酸酶C非限制性内切核酸酶D限制性外切核酸酶E非限制性外切核酸酶13CDNA是指（A）A在体外经反转录合成的与RNA互补的DNAB在体外经反转录合成的与DNA互补的DNAC在体外经反转录合成的与RNA互补的RNAD在体内经反转录合成的与RNA互补的RNAE在体内经反转录合成的与RNA互补的DNA14质粒的分子结构是（A）A环状双链DNAB环状单链DNAC环状单链RNAD线状双链DNAE线状单链DNA15聚合酶链式反应常常缩写为（E）APRCBPERCPDRDBCREPCR16用于PCR反应的酶是（E）ADNA连接酶B碱性磷酸酶C逆转录酶10D限制性内切核酸ETAQDNA聚合酶17基因工程中使目的基因与载体拼接的酶是（C）ADNA聚合酶BRNA聚合酶CDNA连接酶DRNA连接酶E限制性核酸内切酶18互补筛选属于（C）A抗药性标志筛选B酶联免疫筛选C标志补救筛选D原位杂交筛选E免疫化学筛选19确切地讲，CDNA文库包含（E）A一个物种的全部基因信息B一个物种的全部RNA信息C一个生物体组织或细胞的全部基因信息D一个生物体组织或细胞的全部RNA信息E一个生物体组织或细胞所表达MRNA信息20下烈描述最能确切表达质粒DNA作为克隆载体特性的是（D）A小型环状双链DNA分子B携带有某些耐药基因C在细胞分裂时恒定地传递给子代细胞D具有自我复制能力E获得目的基因21基因工程中常用限制性内切酶的识别序列，正确的说法是（E）A聚胞苷酸B聚腺苷酸C6或8个任意核苷酸D4或6个任意核苷酸E具有回文结构22基因工程的基本过程不包含（E）ADNA重组体的形成及转化B限制酶的切割C载体及目的基因的分离D重组体的筛选与鉴定E重组体的序列分析23有关理想质粒载体的特征，正确的是（B）A其复制受宿主控制B含有多种限制性内切酶的单一切点C含有同一限制酶的多个切点D为线性单链DNAE不含耐药基因24下列那个物质一般不用作基因工程的载体（C）A噬菌体B质粒C大肠杆菌基因组D反转录病毒DNAE人工酵母染色体25基因工程的操作程序可简单的概括为（E）A将重组体导入宿主细胞并筛选B限制酶的应用C将载体和目的基因接合成重组体D目的基因和载体的分离提纯与鉴定E分、切、接、转、筛26基因表达的多级调控不包括（A）ADNA复制B转录起始C转录后加工11D翻译起始E翻译后加工27下列基因工程中的目的基因的来源，最不常用的是（C）A人工合成DNAB从MRNA合成CDNAC从真核生物染色体DNA中直接分离D从基因文库中获取E从细菌基因组DNA中直接分离28型限制性内切酶是（B）A有内切酶和甲基化酶活性B仅有内切酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供C有外切酶和甲基化酶活性D限制性识别非甲基化的核苷酸序列E仅有外切酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供29基因工程操作应用的许多载体质粒都有抗生素的抗性基因，这是为了便于（D）A外源基因插入质粒B宿主菌的生物繁殖C质粒的转化D带有目的基因的宿主菌的筛选E目的基因的表达30有关目的基因与载体连接的叙述错误的是（E）A可以同一限制酶切割产生粘性末端连接B平末端切口可采用“尾接法”C平末端切口可直接连接D均需DNA连接酶参与E不同限制型内切酶切割不能连接1基因工程的单元操作顺序是（A）酶切，连接，转化，筛选，验证酶切，转化，连接，筛选，验证连接，转化，筛选，验证，酶切验证，酶切，连接，筛选，转化酶切，连接，筛选，转化，验证2下列五个DNA片段中含有回文结构的是（D、E）GAAACTGCTTTGACGAAACTGGAAACTGGAAACTGGTCAAAGGAAACTGCAGTTTCGAAACTGCAGAAAG3T4DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起，其底物的关键基团是（D）2OH和5P2OH和3P3OH和2P3OH和5P5OH和3P4噬菌体LDNA体外包装的上下限是天然LDNA长度的（D）25505010075100751051001258分子杂交的化学原理是形成（E）共价键离子键疏水键配位键氢键9促红细胞生长素（EPO）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为（E）人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用人的促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活12人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化10鸟枪法克隆目的基因的战略适用于（A）原核细菌酵母菌丝状真菌植物人类11CDNA第一链合成所需的引物是（D）POLYAPOLYCPOLYGPOLYT发夹结构12CDNA法获得目的基因的优点是（B）成功率高不含内含子操作简便表达产物可以分泌能纠正密码子的偏爱性13人工合成DNA的单元操作包括（E）I去保护II偶联III封端IV氧化IIIIIIVIIIIIIIIIIIIVIIIIIIIV二、B型题A抗药性筛选B分子杂交筛选CRNA反转录D免疫学方法E体外翻译1用于鉴定质粒是否转化的一般方法是（A）2用于鉴定转化子细胞是否含有目的基因的常用方法是（B）3利用目的基因表达产物的特异性抗体来筛选含有目的基因的转化子细胞价方法是（D）A限制性核酸内切酶BDNA连接酶C反转录酶DTAQDNA聚合酶E碱性磷酸酶4识别DNA回文结构并对其双链进行切割的是（A）5用于PCR反应的酶是（D）6将目的基因与载体进行拼接的酶是（B）A转染B转化C感染D转导E转位7以质粒为载体，细菌为宿主的导入方式是（B）8以噬菌体为载体，细菌为宿主的导入方式是（D）9以病毒为载体，哺乳动物细胞为宿主的导入方式是（C）A94B85C50D72E10010PCR变性温度一般为（A）11PCR退火温度一般为（C）12PCR延伸温度一般为（D）A分B切C接D转E筛13获取目的基因属于基因工程中的步骤是（A）14DNA连接酶用于基因工程中的步骤是（C）15DNA重组子转化宿主细胞的步骤是（D）16限制性内切酶切割目的基因和载体的步骤是（B）17对含有DNA重组体的宿主细胞进行筛选的步骤是（E）三、C型题A、含有该生物的全部基因B、含有该生物的结构基因C、两者都是D、两者都不是1、基因组文库（A）2、CDNA文库（B）A、需要逆转录酶B、需要限制性内切酶C、两者都是D、两者都不是3、建立CDNA文库（C）4、建立基因组文库（B）13A、连接酶B、逆转录酶C、两者都是D、两者都不是5、建立CDNA文库需要（C）6、建立基因组文库需要（A）四、X型题1可用于基因工程载体的DNA分子有BDEA染色体DNAB病毒DNAC细菌DNAD噬菌体DNAE质粒DNA2重组DNA技术的基本过程包括ACDEA目的基因的获取BPCR反应C克隆载体的构建D目的基因与载体的连接E重组体分子导入受体菌3基因克隆又称为ACA重组DNAB重组RNACDNA克隆DRNA克隆E蛋白质复制4组成PCR反应体系的物质包括BDARNA引物BTAQDNA聚合酶CRNA聚合酶DDNA模板EDDNTP5对于重组体的筛选，属于直接选择法的是BCDA免疫化学法B原位杂交法CSOUTHERN印迹D补救标志筛选E抗药性标志筛选6对于重组体的筛选，属于非直接选择法的是AEA免疫化学法B原位杂交法CSOUTHERN印迹D补救标志筛选E酶联免疫筛选7限制性核酸内切酶切割DNA时可产生ABCEA5粘性末端B3粘性末端C平末端D单链缺口E粘性末端8基因工程中目的基因的来源有ABCDEA化学合成BPCR合成CCDNA文库D基因组文库E组织细胞中染色体DNA直接提取9基因工程中外源性基因又称为ABDA目的基因B目的DNAC目的RNADTARGETDNAE外源RNA10重组DNA技术中常用的工具酶有ABCDEA限制性核酸内切酶BDNA聚合酶CDNA连接酶D反转录酶E末端转移酶11作为基因工程的载体必须具备的条件是ABCDA能独立自主复制B易转化C易检测（含有抗药性基因等）D具有限制性内切核酸酶的位点E易提取获得五、填空题1基因工程的一个理想的载体必须具备的条件有_至少有一个复制起点_、_有克隆位点、具备转化的功能、遗传标记基因_、_具有较高的装载能力_。2基因工程常用的载体DNA分子有_、_和_。3一个完整的DNA克隆过程应包括_的获取、_的选择与构建、_与载体的拼接、重组体导入_、筛选与鉴定出_。4目的基因获取的途径或来源有_、_、_、_。5基因工程过程中重组体直接筛选法的方式有_、_、_。6当细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，_就可以从一个细胞（细菌）转移到另一细胞（细菌），这种类型的DNA转移称为_作用。7重组DNA技术中常用的工具酶有_、_、_、_。8KLENOW没的活性有53聚合酶活性；35外切酶活性149人工化学合成DNA新形成的核苷酸的合成方向是35，合成的DNA5末端是OH3末端是OH10进行PCR扩增DNA时，反应体系应加入模板DNA，TAQ酶、一对引物、DNTP和缓冲液。5现代生物工程主要包括基因工程，酶工程，细胞工程，发酵工程。6使DNA的结构分析问题从根本上得到了解决的两项关键性工程技术分别是DNA分子的体外切割与连接技术和DNA分子的核酸序列分析技术。7基因工程的工具酶主要有限制性核酸内切酶和DNA连接酶。8基因克隆载体主要有质粒、噬菌体、病毒三大类。9基因克隆载体应具备的条件是有克隆位点（外源DNA插入点），能携带外源DNA进入受体细胞，能自主复制；具有选择标记，便于重组体的筛选和鉴定；10将外源性重组DNA导入受体细胞的途径有转化（或转染）、杂交、转导、细胞融合、显微注射等方式。11目的基因导入受体细胞成功的关键是选用合适的克隆载体、选用合适的受体细胞、选用合适的基因转移方法。12基因克隆受体细胞有原核细胞和真核细胞。13克隆基因的进一步鉴定常采用限制性内切酶分析、分子杂交、PCR扩增、DNA侧序等方法。18限制性酶的发现标志着DNA重组时代的开始。（）191982年世界上第一个基因重组药物人胰岛素在美国问世产生了巨大的社会效益和经济效益。（）20根据基因操作的目的不同，可以将基因治疗分为基因置换治疗和基因增强治疗。（）21根据治疗对象不同可将基因治疗分为性细胞基因治疗和体细胞基因治疗。（）221982年世界上第一个基因重组药物人干扰素在美国问世产生了巨大的社会效益和经济效益。（）23根据基因操作的目的不同，可以将基因治疗分为性细胞基因治疗和体细胞基因治疗。（）24单克隆抗体技术是动物细胞工程技术。（）25用同一种限制酶切割含有目的基因的外源DNA和载体DNA，产生的DNA片段的粘性末端是相同的（）26用同一种限制酶切割含有目的基因的外源DNA和载体DNA，产生不同的DNA片段的粘性末端（）27基因工程、细胞工程、发酵工程和酶工程它们之间是相互关联和交叉渗透（）六、名词解释1回文结构（PALINDROME）2目的DNA（TARGETDNA）3互补（ALPHACOMPLEMENTATLON）4基因组DNA文库（GENOMICDNALIBRARY）5CDNA文库（CDNALIBRARY）6DNA克隆（DNACLONING七、简答题1什么叫基因克隆简述基因克隆的步骤。2限制性内切核酸酶有哪些特点3简述重组DNA技术中获取目的基因的途径。4已知有一MRNA分子，你怎样才能使它翻译出相应的蛋白质简述其过程。5作为基因工程的载体必须具备哪些条件八、论述题1简述互补筛选重组体质粒细菌的原理。2基因工程中重组体筛选的方法有哪些1何谓基因工程简述何谓基因工程简述人类基因组计划在医药方面的意义和和应用。15答基因工程在体外将不同生物的基因（DNA）和载体质粒、噬菌体、病毒DNA连接，构成遗传物质的新组合（重组DNA），然后转入微生物或细胞内寄主细胞进行克隆，使转入的基因在宿主细胞内表达产生所需要的蛋白质而能持续稳定地繁殖，并通过工程化为人类提供有用产品和服务的技术。人类基因组计划在医药方面的意义有基因治疗、基因制药、基因芯片；基因工程基因工程在医药科学中的应用（1）发现疾病基因（2）发展生物制药蛋白质肽类药物的生产（3）基因诊断和基因治疗（4）遗传病的预防5DNA结构分析靠哪两项关键技术简述基因操作常用的工具酶及其作用。答使DNA的结构分析问题从根本上得到了解决的两项关键性工程技术是（1）DNA分子的体外切割与连接技术；（2）DNA分子的核酸序列分析技术。基因操作常用的工具酶有限制性内切酶和DNA连接酶；两者所起的作用是限制性核酸内切酶简称限制酶分别对载体DNA和目的基因进行切断，以便于重组。DNA连接酶将目的基因（外源DNA）和载体DNA分子连接起来，形成重组DNA分子。6、何谓基因克隆载体基因克隆载体至少具备哪三个条件常用有哪几类载体答基因克隆载体是能承载外源DNA片段（目的基因）并将其带入受体细胞的传递者。基因克隆载体具备条件（1）有克隆位点（外源DNA插入点），常具有多个单一酶切位点（多克隆位点）；（2）能携带外源DNA进入受体细胞，能自主复制；（3）具有两个以上的遗传标记物，便于重组体的筛选和鉴定；（4）易从宿主细胞回收常用的载体VECTOR主要有三大类质粒、噬菌体、病毒。细胞工程复习题一、选择题1在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A结果是相同的B杂种细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同D诱导融合的手段相同2单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（C）淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞ABCD3动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的有（D）A诱导融合的方法完全相同B所用的技术手段完全相同C所采用的原理完全相同D都能形成杂种细胞4单克隆抗体是指（C）A单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体16B单个B淋巴细胞增殖产生的抗体C单个杂交瘤细胞增殖产生的抗体D单个抗体通过克隆化，产生大量抗体5将小鼠骨髓瘤细胞与一种B淋巴细胞融合，可使融合的细胞经培养产生单克隆抗体，其依据是（多选）（AC）AB淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖BB淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合后才能产生抗体C骨髓瘤细胞可以无限增殖，但不能产生抗体D骨髓瘤细胞可以产生抗体，但不能无限增殖6要想获得大量的单克隆抗体就必须用单个的B淋巴细胞进行无性繁殖，形成细胞群。其原因是（D）A在体外培养条件下B淋巴细胞可以无限增殖B在动物体内B淋巴细胞可产生多达百万种以上的抗体C每一个B淋巴细胞都参与特异性免疫反应D每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体7关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是（D）A、可以制成诊断盒用于疾病的珍断B、可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗C、可以利用基因工程技术生产D、可以在生物体内生产，不能体外生产8以下不属于生长素的是DAIAABNAAC2,4DD6BA9植物细胞有而动物细胞没有的结构是DA细胞质B线粒体C内质网D叶绿体10拥有接触抑制的是BA原核细胞B动物细胞C植物细胞D真核细胞11产生自胸腺的淋巴细胞是AAT淋巴细胞BB淋巴细胞CC淋巴细胞DG淋巴细胞12细胞直接摄取外源DNA的过程叫BA转导B转化C转移D转入13世界上第一种克隆成功的生物是CA牛B人C羊D鸡14培养基中可能含有血清的是AA动物细胞培养基B植物细胞培养基C愈伤组织培养基D微生物培养基15以下不是动物细胞生物制药的是DA干扰素B单克隆抗体C病毒疫苗D人工胚乳16下列不是干细胞特征的是BA对称分裂B无限增殖C缓慢性D自稳性1717离体培养的动物细胞分为以下类型，除了BA贴壁依赖型B瓶底依赖型C兼性贴壁细胞D悬浮型18植物体细胞融合完成的标记是（A）A产生新的细胞壁B细胞质发生融合C细胞膜发生融合D细胞核发生融合19人工获得一个杂种植株，需要下列哪项步骤（A）A分离原生质体诱导原生质体融合组织培养得到杂种植株B分离原生质体原生质体融合杂种植株C获取细胞原生质融合组织培养杂种植株D获取细胞原生质直接融合组织培养20植物体细胞杂交尚未解决的问题是C）A去掉细胞壁，分离出有活力的原生质体B将杂种细胞培育成植株C让杂种细胞按照人们的需求表现出亲代的优良性状D尚未培育出属间杂种植物21动物细胞培养与植物组织培养的重要区别在于AA培养基不同；B动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。22单克隆抗体与血清抗体相比，优越之处在于CA单克隆抗体能够制成“生物导弹”；B单克隆抗体可以在体外制备；C单克隆抗体的特异性强，灵敏度高，产量也大大高于血清抗体；D单克隆抗体的制备过程简单。23诱导试管苗生根时，培养基的调整应（D）。A、加大盐的浓度B、加活性炭C、加大分裂素的浓度D、加大生长素的浓度24植物体细胞杂交可以解决不同生物之间的（B）问题。A、亲缘关系远B、生殖隔离C、地理隔离D、组织分化25植物体细胞杂交尚未解决的问题有CA、去掉细胞壁,分离出有活力的原生质体B、将杂种细胞培育成植株C、让杂种植物按照人们的需要表现出亲代的优良性D、尚未培育出属间杂种植物26不能人工诱导原生质体融合的方法是DA、振动B、电刺激、C、PEG试剂、D、重压1827植物组织培养形成的愈伤组织进行培养，又可以分化形成根、芽等器官，这一过程称为CA、脱分化B、去分化C、再分化D、脱分化或去分化28当植物细胞脱离了原来所在植物体的器官或组织而处于离体状态时，下列有可能使其表现出全能性，发育成完整的植株的是（D）A、细胞分裂素B、生长素C、一定的营养物质D、以上三者均是29细胞工程是一门综合科学技术。下列哪项技术不属于细胞工程（A）A、有性杂交B、体细胞杂交C、组织培养D、细胞核移植30在生物体的所有细胞中，全能性最高的是DA、卵细胞B、植物花粉C、体细胞D、受精卵31在生物体内，细胞没有表现出全能性，而是分化为不同的组织、器官，是因为（B）A细胞丧失了全能性B基因的表达有选择性C、不同的细胞内基因不完全相同D、在个体发育的不同时期，细胞内的基因发生了变化32植物体细胞杂交尚未解决的问题是（B）A、去掉细胞壁，分离出有活力的原生质体B、让杂种植物按照人们的需要表现出亲代的优良性状C杂种细胞培育成植株D、尚未培育出属间杂种植物33通过细胞杂交,获得一个杂种植株,需要的步骤是AA分离原生质诱导原生质融合生出细胞壁组织培养法得到杂种植株B分离原生质原生质自然融合组织培养杂种植株C获取细胞原生质融合组织培养杂种植株D获取细胞原生质直接融合组织培养杂种植株34在一个生物体内，细胞没有表现出全能性，原因是（C）细胞失去了全能性细胞中的基因部分丢失细胞中的基因选择性表达细胞中的基因变异不同35植物细胞融合完成的标志的是（A）A、产生新的细胞壁B、细胞膜发生融合C、细胞质发生融合D、细胞核发生融合36单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上能存活增殖的细胞是（D）A淋巴细胞B小鼠骨髓瘤细胞CB淋巴细胞自身融合细胞19D杂交瘤细胞37动物细胞培养的特点（A）细胞贴壁有丝分裂细胞分化接触抑制减数分裂原代培养一般传110代A、B、C、D、38一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件（D）无毒的环境无菌的环境培养基需要加入血清温度与动物体温相似需要O2，不需要CO2CO2能调节培养液PHA、B、C、D、39在动物细胞培养的有关叙述中正确的是（B）A、动物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞分泌蛋白B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散C、细胞的癌变发生在原代培养向传代培养的过渡过程中D、培养至50代后传代细胞遗传物质没有发生改变40动物细胞工程技术的基础是（D）A动物细胞融合B单克隆抗体C胚胎移植D动物细胞培养二、是非题1植物体细胞杂交能够在一定程度上克服远缘杂交不亲和的障碍，大大扩展了可用于杂交的亲本组合范围。（）2秋海棠的叶、马铃薯的块茎成熟的花粉、木质部中的导管细胞都能作为植物组织培养的材料（）3细胞的全能性是指生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能。但是不是生物体的每一个细胞都要包含有该物种所特有的全套遗传物质。（）4愈伤组织的形成是离体植物细胞分裂的结果（）5组织的形成是离体植物细胞愈伤脱分化的结果（）11细胞工程操作主要对象是细胞（）12细