首都医科研究生免疫学考试答案

20132014上半学年免疫进展课考试说明1课程结束后两周将作业交上（见附件1考题），作为本次课程的考试成绩。交作业的具体时间为2013年12月27日下午120400；交作业的地点为第二教学楼二层第七阶梯教室（若当天阶梯教室有课，我会在门口等大家）。2作业格式首页打印考试题（写明专业、学号和姓名），答案附在后面，采用A4纸单面书写（答案必需手写，答案打印者本门课程考试成绩记为0分）。3给分说明（1）PAMP/DAMP概念5分；引起的吞噬、炎症作用和佐剂中的应用各5分，共计20分；（2）每种方法的检测原理各2分，ELISA的优缺点4分，胞内染色优缺点5分，CBA的优缺点5分，共计20分；（3）本题为开放性题目，答案要点主要包括假说合理（4分）、实验设计合理（实验方法多样，对照合理）（12分）、结论合理（4分）即可给分；共计20分；（4）细胞细胞间的直接接触调节免疫应答10分；通过细胞因子发挥调节作用10分；共计20分；（5）EOS与气道炎症反应10分；EOS与气道重塑10分；共计20分；（6）PREBCR的构成6分，作用每条35分；共计20分。4作业其他要求（1）严禁出现雷同，一经发现，本门课程考试成绩记为0分；（2）作业必需按时上交，交作业当天需签到（可以代交，但必须留下本人联系方式）（3）收作业当天不合格者需重修本门课程。1病原微生物表面存在一些人体宿主所没有的，但可为许多相关微生物所共享，结构恒定且进化保守的分子结构，称为病原体相关分子模式（PATHOGENASSOCIATEDMOLECULARPATTERNS,PAMP）,固有免疫识别的PAMP，往往是病原体赖以生存，因而变化较少的主要部分，如病毒的双链RNA和细菌的脂多糖，对此，病原体很难产生突变而逃脱固有免疫的作用。PAMP主要包括两类以糖类和脂类为主的细菌胞壁成分。如脂多糖、肽聚糖、脂磷壁酸、甘露糖、类脂、脂阿拉伯甘露聚糖、脂蛋白和鞭毛素等。其中最为常见且具有代表性的是革兰阴性菌产生的脂多糖1IPOSACHRIDE，LPS；革兰阳性菌产生的肽聚糖PROTEOGLYCAN；分枝杆菌产生的糖脂GLICOLIPID和酵母菌产生的甘露糖。病毒产物及细菌胞核成分，如非甲基化寡核苷酸CPGDNA、单链RNA、双链RNA。需要指出的是，上述PAMP可以表达在病原体表面或游离于免疫细胞之外，也可以出现在免疫细胞的胞质溶胶，以及溶胶中各种携带病原体的胞内区室INTRACELLULARCOMPARTMENT，如内体和吞噬溶酶体。从宿主细胞释放的内源性危险信号是杜撰的东西作为损伤相关分子模式（DAMPS）ENDOGENOUSDANGERSIGNALSARETHINGSCOINEDASDAMAGEASSOCIATEDMOLECULARPATTERNSDAMPSRELEASEDFROMHOSTCELLS组织损伤释放的内源性配体，即DAMP组织细胞起始破坏及炎症信号途径激活,可能与局部缺血组织或细胞间基质损伤所释放内源性损伤/危险相关分子模式信号DAMAGE/DANGERASSOCIATEDMOLECULARPATTERN,DAMP有关。天然免疫细胞表面TOLL样受体TOLLLIKERECEPTOR,TLR是脊柱动物识别病原体感染最原始的一种方式,其通过识别、结合特异性分子模式而启动胞内信号转导途径,进而激活核转录因子NFB,诱导炎性细胞因子表达和多种生物学效应。TLR在天然免疫和适应性免疫应答间发挥重要的桥梁作用。现已发现,TLR识别的分子模式不仅包括病原微生物及其产物所共有的某些非特异性、高度保守的病原相关分子模式PATHOGENASSOCIATEDMOLECULARPATTERN,PAMP,如脂多糖LPS、磷壁酸LTA、肽聚糖、细菌DNA、双链RNA等,还包括组织细胞损伤破坏时所释放的一系列内源性“危险信号”,如热休克蛋白HSP、氧自由基、核甘酸、神经介质、白介素等。TLR1，TLR2，TLR4，TLR5，TLR6与位于细胞表面。TLR2形成与TLR1或TLR6形成异二聚体。TLR3，TLR7，TLR9和从内质网转运下列细胞刺激到内溶酶体区室。在CLR中是细胞表面受体，而最接近现代种和RLRS驻留在细胞质中。与其同源配体导致的信号级联，导致炎症反应的起始一个PRR的相互作用。细菌抗原（红色）和的PAMP（蓝色）存在于相同的吞噬体。TLR介导的识别细菌的PAMP的促进细菌抗原的MHCII类最佳演示文稿的选择。TLR信号也导致共刺激分子和必需的活化和T细胞分化的细胞因子的诱导。树突状细胞（DCS）直接感染了病毒通过RIGI识别的PAMP（蓝色）细胞质内样受体（RLRS）。胞质病毒蛋白（红色）进行处理，并提出了关于MHCI类（通过传统的内质网途径）或MHCII类（通过自噬）。RLR信号导致共刺激分子和必需的活化和T细胞在MHCI类途径的情况下分化的细胞因子的诱导，这可能依赖于病毒抗原的丰度为MHCII类，它可以依赖于靶向病毒抗原（红色三角形）的自噬机械。病毒感染的NONAPC通过RLRS识别的PAMP（蓝线表示病毒核酸）的细胞质内，导致I型干扰素（干扰素）和激活DC等因素的分泌。感染的死细胞均是由非感染DCS，以及病毒的PAMP（蓝色）是通过胞内TOLL样受体识别。病毒抗原（红色三角形）进行处理，并提出了关于MHCII类（通过传统的内体途径）或MHCI类（通过交叉呈递）。TLR信号导致共刺激分子和必需的活化和T细胞分化的细胞因子的诱导。在感染过程中所面临的细菌的特异性免疫反应是由他们占据了亚细胞区室决定的部分。胞菌受到吞噬专业吞噬细胞和补体介导的裂解。血管内和胞浆内的细菌受到由吞噬细胞自噬并通过溶酶体融合与膜结合隔间查杀。由细胞外或细胞内受体检测细菌的PAMP激活的信号级联反应，导致促炎转录反应。检测在细胞质中的细菌的PAMP的也触发激活INFLAMMASOMES，其中激活的炎性细胞因子。在这些途径已知细菌被抑制的步骤都标有一个红色的X。蓝色椭圆形和圆形，杆状和球菌的细菌，分别橙色六边形，补，绿钻石，溶酶体内降解酶黄星，炎性粉红细胞表面“杯”，TOLL样受体（细胞外的PRRS）白色箭头，促炎细胞因子的转录响应。微生物相关分子模式（MAMPS）或损伤相关的分子模式（DAMPS）接合表面或细胞内的模式识别受体（模式识别受体），因此激活自噬机械，其靶向细胞内的病原体为溶酶体降解。AGER，高级糖基化终产物特异性受体，ALR，AIM2样受体BECN1，1的BECLINNLR，NOD样受体RLR，RIGI样受体和TLR，TOLL样受体。病毒劫持宿主机制来合成核酸（DNA或RNA）和所需要的新的病毒颗粒的装配其它部件。这样新综合来的病毒成分可以通过各种多种SLRS的识别并定向到溶酶体降解。TLR配体可以被隔离在自噬体，这方便的同源胞内TOLL样受体的结合。这个过程可以刺激类型的分泌I型干扰素（IFN），从而增强抗原呈递。缩写如下IRF7，IFN调节因子7MYD88，髓样分化初级反应88和PDC，浆细胞树突状细胞。MHCII类。,被APCS捕获的细胞外的抗原被传递到自噬体，它利用水解酶从核内体（如组织蛋白酶），以产生免疫原性肽和它们加载到MHCII类分子呈现给CD4T细胞,，不变链MIIC，MHCII类装载舱。免疫突触,一个IS的APCS和T淋巴细胞之间的形成导致的丝氨酸苏氨酸激酶11（STK11）和AMP活化蛋白激酶（AMPK），它抑制哺乳动物雷帕霉素靶的活化，从而促进自体吞噬,在此设置中，自噬是面向IS和降低突触部件，最终动摇它和抑制T细胞的活化,缩写如下ICAM1，细胞间粘附分子1ITGB2，整合素，B2，和TCR，T细胞受体,AMPHISOMES,在吞噬细胞内自噬体抗原可依次通过AMPHISOMES（与内涵体后形成自噬体的融合）和蛋白酶消化。蛋白酶体的降解产物可输送回AMPHISOMES通过与抗原加工（TAP）的相关转运，因而装上循环MHCI类分子对抗原呈递至CD8T细胞,另外，溶酶体水解酶可以独立的蛋白酶消化细胞内的抗原。这些肽被装载到回收的独立丝锥MHCI类分子（并且因此向CD8T细胞）,PRR可以组装成高分子量的，被称为“炎症”CASPASE1激活平台，控制成熟和白细胞介素如IL1和IL18，其强效促炎性活动直接宿主反应来感染和损伤炎症小体是一组蛋白复合物，识别诱导炎症的刺激，包括来自的PAMP和DAMPS和控制生产的重要的促炎细胞因子如白细胞介素1（IL1）和IL18的一组不同的刺激一个正常的急性炎症反应，是由。来自的PAMP所检测到的模式识别受体感染的典型特征,消灭病原体消除了刺激，再加上造成了一些可逆的旁系的组织损伤，并设置的分辨率/修复阶段的平台，从而恢复正常组织稳态的刺激,引起的非免疫病理生理过程，在这种或那种方式触发一个初始的无菌炎性反应，常常无痛和容易通过生产损伤相关分子模式（DAMPS）的慢性炎症性疾病的典型特征。这种最初的反应就变成了由细胞因子和趋化因子放大。因为这个回应并没有消除最初的刺激，持续无缓解地出现炎症，最终导致组织损伤。炎症反应本身可以积极地影响了生产DAMPS，它提供了一个额外的正反馈回路中。例如，在动脉粥样硬化的情况下，活性氧中间体（ROI）和活性氮中间体（RNI）可以修改内皮下脂蛋白中，以一定的方式放大了它们促进炎症的能力佐剂宿主（老鼠或人类）与疫苗或疫苗佐剂配方PTC（的PAMP治疗复杂）激活先天免疫途径的免疫（TLRS的，的CLR，RLRS，最接近现代种和DNA传感器），诱导炎性细胞因子和I型干扰素的分泌。这些细胞因子进一步通过B和T淋巴细胞激活适应性免疫组件。适应性免疫记忆细胞可保护宿主免受感染。自从巴斯德的时代，疫苗已用经验的方法杀死或减毒活微生物，病原体（亚单位疫苗），部分纯化的组分，脱毒的毒素或多糖的组成主要是发达国家。这些疫苗已经非常成功地消除了许多严重的疾病。在过去的30年中，新技术的后续波所说的，是不可能用经验的方法可能的疫苗。白细胞介素2IL2免疫佐剂作用与弱抗原的亚单位疫苗联合应用,增强免疫原性批准上市2ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，称为酶联免疫吸附实验（ENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAY，ELISA）。ELISA已被证明在蛋白与核酸检测中十分有用的一种技术。绝大多数ELISA使用以下3种策略1间接ELISA（INDIRECTELISA）用于筛检抗体（抗特定抗原成分的特异性抗体）。此法是测定抗体最常用的方法。2夹心ELISA（SANDWICHELISA）用于检测目的抗原的量。其优点是避免了对特异性抗体的直接标记，但增加了操作步骤和测定时间。3竞争ELISA（COMPETITIVEELISA）用于确定抗原特异性或待检标本中含交叉反应成分时为了提高实验的特异性而使用的一种方法。根据标记抗原与同种未标记待测抗原与抗体间发生竞争性结合的原理，主要用于测定小分子抗原。除了以上3种，直接法用于检测抗原或抗体（特别是总抗体浓度）方法已经不常用。实验中选用何种形式取决于实验的目的，特别是待检测标本的类型。特异性检测可溶性细胞因子或趋化因子一般采用夹心ELISA技术，细胞因子夹心ELISA的实验方法是用高纯度的抗细胞因子的抗体（捕获抗体）非共价吸附在塑料微孔板上。板子经过洗涤后，固定的抗体可特异性捕获样本中存在的可溶性细胞因子蛋白。洗涤未结合的物质，通过加生物素联接的抗细胞因子抗体（检测抗体）来检测被捕获的细胞因子，然后再加酶标记的亲合素或链亲合素。最后加显色底物溶液，显色的程度通过ELISA酶标检测仪测定光密度（ODOPTICALDENSITY）记录。通过细胞因子的标准蛋白做已知浓度系列稀释，测出OD值后绘制出标准曲线，根据标准曲线可推算出标本中细胞因子的含量，一般使用计算机软件可以很快得到结果细胞因子胞内染色依赖于预先对细胞进行固定、破膜处理后鉴定细胞因子特异性抗体染色的荧光信号。预先对细胞进行固定可以保持细胞形态和细胞内的抗原性，而且可以使细胞对随后的破膜过程产生耐受。破膜过程可以使荧光标记的细胞因子抗体穿过细胞膜和细胞器膜，与细胞因子进行特异性地结合，从而产生荧光信号，可通过流式细胞仪进行检测“CYTOMETRICBEADARRAY（CBA），即微量样本多指标流式蛋白定量技术，是一个基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法，它能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。CBA系统的工作原理简单，对应受检系统中的每一个检测指标都设有不同的捕获微球，不同的捕获微球上包被有特异的捕获抗体，并具有不同的荧光强度，通过捕获微球与待测样品溶液混合后，微球上的特异性抗体就与样品（血清、血浆或细胞培养液）中的相应抗原或蛋白结合，最后，加入荧光的检测抗体以形成“三明治”夹心复合物，通过流式细胞样进行荧光检测，便可对样品中的各检测因子的含量进行分析。由于CBA系统中每一个微球都能够提供一个和特定蛋白结合的表面，因此，每个微球就相当于一个单独的、包被好的ELISA板；相对于传统的ELISA技术，荧光信号显色的灵敏度比一般化学发光的灵敏度高，加上利用流式细胞仪对于荧光信号的高敏感性及放大作用，使用这种技术检测未知样品中的指标所需要的样品浓度更低，实验时间更短；另外，常规的ELISA操作，每次只能对一个样本中的一个指标进行检测，各检测指标间的操作需分开进行，往往造成珍贵样本的耗费，如病患者血液中向免疫调节细胞因子包括IFN、TNF、IL2等，通过CBA系统，可同时对一个对样品中的多个指标进行检测，这为一些ELISA技术无法满足的实验提供了新的检测手段。日常实验中，常需对溶液体系中的可溶性蛋白进行定量检测，如细胞培养上清或血清中的细胞因子含量的定量分析，由于这些因子的含量较少，低于一般常规方法的检测下限，使用常用的蛋白检测方法WESTERNBLOT等很难检测。利用流式细胞仪可对荧光信号进行级数放大的特性，只需使受检的可溶性因子附着于一些具有近似细胞直径的微粒上，即可对受检样品中的各种可溶性因子进行检测。该技术能够实现从一份标本中同时检测多种指标，大大提高了科研人员的工作效率。其中代表技术是LUMINEX和BDCBA（CYTOMETRICBEADARRAYSYSTEM,CBA），但是由于LUMINEX技术必须用LUMINEX仪器进行检测和分析，而且该仪器价格昂贵，而CBA技术的检测也局限于BD公司流式细胞仪及相关软件，影响了该技术的推广和应用。自2004年，EBIOSCIENCE公司旗下BENDDERMEDSYSTEM公司开发了一系列在流式细胞仪平台上进行多参数细胞因子或其它可溶性分子检测的技术FLOWCYTOMIX技术，该技术克服了上述缺点，有利于多指标检测技术的应用和推广。4常将CD4CD25T细胞称为调节性T细胞REGULATORYTCEL,LTREG。5CAJ过敏性支气管哮喘气道炎症与嗜酸性粒细胞产生的关系2气道炎症及其与重塑的关系21炎性细胞的浸润气道的慢性炎症被认为是哮喘最重要的发病机制。其中炎性细胞的激活、浸润在此过程中起着非常重要的作用，肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞及血小板等等，在趋化因子和黏附因子的介导下，由外周血中向炎症部位聚集、浸润，这些细胞相互作用可以分泌50多种炎症介质和20种以上的细胞因子，哮喘的炎性反应也就是这些炎性细胞、炎性介质、细胞因子相互作用的结果。在众多的炎性细胞中，嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞的作用格外引人注意，在哮喘气道中，嗜酸性粒细胞的活性与哮喘的严重程度和气道高反应性密切相关。虽然整个气道均有嗜酸性粒细胞的浸润，但是在小气道和大气道气管壁中浸润的嗜酸性粒细胞的分布有所不同。在小气道，嗜酸性粒细胞分布主要在气道壁的外周平滑肌和肺泡粘附间，而在大气道，嗜酸性粒细胞主要分布在气道壁的内