免疫毒性及评价分析.ppt

免疫毒性及其评价,2010.6,免疫毒性及其评价,2,免疫毒理学：Immunotoxicology,研究外源性因素对机体免疫系统产生的有害作用及其机理。,2010.6,免疫毒性及其评价,3,免疫毒理学（Immunotoxicology）：是毒理学与免疫学间的边缘学科，也是毒理学的一个新分支，它是研究外源化学物质（xenobiotics）和物理因素对机体免疫系统产生的有害作用及其机理。,2010.6,免疫毒性及其评价,4,免疫毒理学的主要研究内容,（一）阐明免疫毒性及其机制（二）进行免疫毒性的危险度评价（三）完善和发展免疫毒性评价方法,2010.6,免疫毒性及其评价,5,外源化学物质对免疫系统的影响：,外源化学物质对免疫系统的影响表现在三个方面，即免疫抑制、超敏反应和自身免疫反应。,2010.6,免疫毒性及其评价,6,外源化学物质对免疫系统的影响：,免疫抑制（immunosuppression、immunodepression）超敏反应（hypersensitivity）自身免疫（autoimmunity）,2010.6,免疫毒性及其评价,7,外源化学物质对免疫系统的影响,2010.6,免疫毒性及其评价,8,型超敏反应即速发型超敏反应,2010.6,免疫毒性及其评价,9,吸入,花粉、尘螨、真菌孢子、动物毛屑。,过敏性哮喘,型超敏反应即速发型超敏反应,表现：,过敏性鼻炎,2010.6,免疫毒性及其评价,10,“麸质过敏症(CeliacDisease)”，又称乳糜泻。麸质过敏症的病人容易出现严重腹泻、腹痛、胀气、粪便酸臭的症状。,型超敏反应即速发型超敏反应,2010.6,免疫毒性及其评价,11,表现：溶血性贫血粒细胞减少症血小板减少性紫癜,型超敏反应（细胞毒型或溶细胞型）：,2010.6,免疫毒性及其评价,12,慢性肾小球肾炎类风湿性关节炎“农民肺”（超敏性肺炎）：“蘑菇工人肺”“麦芽工人肺”“纸浆工人肺”,型超敏反应（免疫复合物型）：,2010.6,免疫毒性及其评价,13,接触性皮炎,型超敏反应（迟发型超敏反应）：,2010.6,免疫毒性及其评价,14,山梨酸钾-无色至白色鳞片状结晶或结晶性粉末，无臭或稍有臭味。在空气中不稳定。能被氧化着色。分子量150.22。有吸湿性。易溶于水、乙醇。,型超敏反应即迟发型超敏反应,2010.6,免疫毒性及其评价,15,引起免疫抑制的外源化学物：,2010.6,免疫毒性及其评价,16,2010.6,免疫毒性及其评价,17,寂静的春天蕾切尔卡逊著有这样一个村镇，那里的一切生物同其周围的环境看来相处的非常和谐：它坐落在象棋盘般排列整齐的繁荣的农场的中央，周围是庄稼地，小山下果树成林。春天，繁花点缀在绿色的原野上；秋天，透过松林的屏风，橡树、枫树和白桦树散射出火火焰般的彩色光辉；冬天，道路两旁也是美丽的，无数的小鸟飞来，洁净而清凉的小溪从山中流出，形成了生活着鳝鱼的绿荫池塘！小镇一直是这个样子，直到许多年前的一天，第一批居民来到这里修建房舍，挖井筑仓，情况才发生了变化。从那时起，一个奇怪的阴影就笼罩了这个地区，一切都发生了变化，不祥的朕兆降临到村落里：神秘莫测的疾病袭击了成群的小鸡，牛羊纷纷病倒、死亡，到处是死神的幽灵；农夫们诉说着他们多病的家庭，医生们则为病人中出现的新病感到困惑不安。一种奇怪的寂静笼罩了这个地方。园中觅食的鸟儿不见了，曾经荡漾着乌鸦、鸽子的合唱的早晨没有了，只有一片寂静覆盖着田野、树林和沼地。曾经是多么吸引人的小路的两旁，现在排列着仿佛是火灾浩劫后的焦黄枯萎的植物。甚至小溪也失去了生命，因为所有的雨已经死亡。这里已被生命所抛弃，留下的只是一个寂静的春天，无声无息.,2010.6,免疫毒性及其评价,18,中文名称滴滴涕(DDT),英文名称2,2-bis(4-Chlorophenyl)-1,1,1-trichloroethane别名2,2-双(4-氯苯基)-1,1,1-三氯乙烷(即p,p-DDT)；侵入途径：吸入、食入、经皮吸收。,2010.6,免疫毒性及其评价,19,可诱发超敏反应的外源性化学物质：,2010.6,免疫毒性及其评价,20,常春藤联盟由美国东北部之八所学校组合而成：布朗大学、哥伦比亚大学、康奈尔大学、达特茅斯学院、哈佛大学、宾夕法尼亚大学、普林斯顿大学、及耶鲁大学。,2010.6,免疫毒性及其评价,21,常春藤联盟各校校徽,2010.6,免疫毒性及其评价,22,哈佛一角,2010.6,免疫毒性及其评价,23,2010.6,免疫毒性及其评价,24,哥伦比亚大学,2010.6,免疫毒性及其评价,25,康乃尔大学,2010.6,免疫毒性及其评价,26,布朗大学,2010.6,免疫毒性及其评价,27,可致自身免疫病的外源性化学物质,2010.6,免疫毒性及其评价,28,免疫毒性的主要特点,（一）免疫系统易感性（二）毒性反应复杂性1.反应的选择性2.反应呈双相性3.免疫毒性剂量-反应关系的复杂性,2010.6,免疫毒性及其评价,29,（一）免疫系统易感性,例如：1.如小鼠长期接触低剂量甲基汞、四乙基铅或砷酸钠，在未出现其他系统毒性时就可表现出免疫功能改变。2.原苏联学者研究大气和水体中化学污染物的毒性时，发现许多污染物引起变态反应的浓度比出现一般毒性作用的浓度低若干数量级。,2010.6,免疫毒性及其评价,30,（二）毒性反应复杂性,1.反应的选择性很多外来化合物可选择性地损伤免疫系统的不同部位或免疫细胞的不同亚类。例如：皮质类固醇损伤辅助T细胞，而环孢菌素对各类T细胞均有损伤作用。,2010.6,免疫毒性及其评价,31,（二）毒性反应复杂性,2.反应呈双相性同一外源性化学物质在不同的染毒方式下（染毒剂量、途径及检测时间等）对机体免疫可产生免疫抑制或免疫增强两种效应，例如：在抗原致敏前后给实验动物腹腔注射镉，对动物抗体生成细胞（PFC）分别产生促进及抑制效应。,2010.6,免疫毒性及其评价,32,外源性化学物质免疫毒性的检测,2010.6,免疫毒性及其评价,33,一、免疫毒性检测方法,（一）免疫病理学检查（二）免疫功能评价（三）超敏反应与自身免疫反应的检测,2010.6,免疫毒性及其评价,34,观察试验动物免疫器官（胸腺、骨髓、脾脏、和淋巴结）的大体形态、脏器系数，常规染色后进行组织病理学检查。,（一）免疫病理学检查,2010.6,免疫毒性及其评价,35,（一）免疫病理学检查,1.观察免疫器官的大体形态、大小/重量和脏器系数。2.组织病理学检查3.检测淋巴细胞表面标记,2010.6,免疫毒性及其评价,36,荧光激活细胞分类仪（fluorescenceactivatedcellsotor,FACS）是用于流式细胞术的一种自动分析仪器，它将高度特异性的单克隆抗体与流式细胞术结合在一起。目前用这种技术对T、B淋巴细胞、NK等细胞及T淋巴细胞亚群即T辅助细胞（Th）及T抑制细胞（Ts）之比进行检测。,检测淋巴细胞表面标记,2010.6,免疫毒性及其评价,37,荧光激活细胞分类仪（fluorescenceactivatedcellsotor,FACS）是用于流式细胞术的一种自动分析仪器，它将高度特异性的单克隆抗体与流式细胞术结合在一起。,2010.6,免疫毒性及其评价,38,因此T淋巴细胞亚群的检测对控制这些疾病的发生、发展、了解发病机制、指导临床治疗都有极其重要的理论意义和临床意义，它已成为临床检验的一项重要指标。,2010.6,免疫毒性及其评价,39,常用的三种方法：（1）淋巴细胞增殖试验（2）细胞毒性T细胞杀伤试验（CTL）（3）迟发型超敏反应试验（DTH）,3.细胞免疫功能评价,2010.6,免疫毒性及其评价,40,（1）淋巴细胞增殖试验,淋巴细胞在体外经丝裂原刺激后可发生增殖，是检测B淋巴细胞和T淋巴细胞功能的一个重要方法。常用的丝裂原有：植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）主要刺激T淋巴细胞；金黄色葡萄球菌（SAE）、大肠杆菌脂多糖（LPS）主要刺激B淋巴细胞。,2010.6,免疫毒性及其评价,41,（1）淋巴细胞增殖试验,观察淋巴细胞增殖的方法主要有：形态学方法放射性核素掺入法比色法,2010.6,免疫毒性及其评价,42,形态学方法,T淋巴细胞在体外经有丝分裂原（植物血凝素，PHA）或特异性抗原刺激后，可发生由小淋巴细胞转变成体积较大、代谢旺盛，并能进行分裂的淋巴母细胞。母细胞化过程中可产生一系列变化如细胞变大、细胞浆扩大，出现空泡、核仁明显、核染色质疏松等。通过母细胞转化率，可以了解机体的细胞免疫状态。形态学方法简便易行，便于基层实验室推广采用，但判读结果受主观因素影响较大。,2010.6,免疫毒性及其评价,43,原理：淋巴细胞在体外经丝裂原刺激后可发生增殖，是检测B淋巴细胞和T淋巴细胞功能的一个重要方法。,淋巴细胞增殖试验,2010.6,免疫毒性及其评价,44,放射性核素掺入法,原理T淋巴细胞在丝裂原刺激下发生增殖，DNA和RNA合成明显增加，如在培养液中加入3H胸腺嘧啶核苷（3HTdR），通过其掺入到淋巴细胞DNA合成的量来判断淋巴细胞增殖的程度。,2010.6,免疫毒性及其评价,45,放射性核素掺入法,方法评注该方法是一种检测淋巴细胞增殖客观、灵敏的方法，但需有较昂贵的液体闪烁仪，并有同位素污染的问题，在应用上有一定困难。在整个实验中应避免同位素污染。,2010.6,免疫毒性及其评价,46,比色法,颜色反应法（MTT法）T淋巴细胞经丝裂原刺激后，发生增殖，在细胞培养68h后加入MTT增殖细胞通过线粒体水解酶将MTT分解为兰紫色结晶被称作甲臢（formazan）,根据颜色深浅来判断细胞的增殖。MTT：3(4,5dimethy1-thiazo1-zyl)2.5-diphenyltetrazoliumbromide)，四甲基偶氮唑盐,2010.6,免疫毒性及其评价,