浙科版选修1 大肠杆菌的培养和分离 课件 （16张）.pptx

实验1大肠杆菌的培养和分离,一、基础知识,指的是结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。如酵母、细菌、放线菌、霉菌、蓝细菌和病毒等。,蓝细菌,酵母菌,病毒,大肠杆菌,（一）微生物,大肠杆菌,革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌，在肠道中一般对人体无害，但也有一些菌株是对人体有害的，可以侵袭肠粘膜并产生毒素。但是，任何大肠杆菌如果进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。大肠杆菌也是基因工程技术中被广泛采用的工具。它以分裂方式繁殖，分裂速度较快。,小资料：革兰氏染色法是一种用于细菌的染色法。此法将细菌分为两大类，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓革兰氏阳性就是用革兰氏染液染色后，再用脱色液处理，细菌仍保留染色液的颜色；革兰氏阴性则相反。这两种细菌的差别在于细胞壁的成分不同。,（二）培养基,由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。,lb（luria-bertani）液体培养基：蛋白胨10g/l，酵母提取液5g/l，氯化钠10g/l。,lb（luria-bertani）固体培养基：50mllb（luria-bertani）液体培养基中再加入1g琼脂制得。,（可用于大肠杆菌的扩大培养）,（可用于大肠杆菌的划线分离）,通用的细菌培养基：,（三）无菌技术,泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。,1、消毒：,是指杀灭大部分病原微生物的方法。,（1）100煮沸5-6min（2）巴氏消毒法：70-75下煮30min或80下煮15min（3）用75%酒精等进行皮肤消毒（4）紫外线消毒,常用消毒方法：,（1）灼烧灭菌,2、灭菌：,是指杀灭或清除环境中一切微生物（包括芽胞、孢子）的方法。,（2）干热灭菌：160-170下加热1-2h。,（3）高压蒸气灭菌：100kpa、121下维持15-30min.,高压蒸汽灭菌锅,恒温干燥箱,二、大肠杆菌的培养和分离实验步骤,（一）培养基的制备与灭菌,取两个250ml的三角瓶，分别装入50mllb液体培养基和50mllb固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，用牛皮纸包装后放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。,lb液体培养基细菌的扩大培养lb固体培养基细菌的划线分离,封口膜：既通气又不使菌进入,（二）倒平板,待灭菌后的固体培养基冷却到60时，在超净台上分别将培养基倒入4个培养皿中，每倒入一个培养皿后立即将培养皿置于水平位置上，并轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝固后形成平面。,无菌操作台用超净紫外灯和过滤风灭菌；桌面及人手用酒精棉球消毒,操作时右手无名指和小指夹住封口膜，另外三指持三角瓶，左手拿培养皿并打开上盖的一边，在酒精灯火焰旁操作。,（三）大肠杆菌的接种,将斜面上培养的大肠杆菌菌种用接种环接种到灭菌后的lb液体培养基中，将三角瓶的封口膜和斜面的棉塞复原。,注意事项:1.在火焰旁从斜面上用接种环取菌;2.取菌前接种环要用酒精灯灼烧灭菌，冷却后方能取菌；3.接种时右手拿着接种环，右手无名指和小指夹住斜面的棉塞和三角瓶封口膜；4.取菌后封口膜和棉塞复原.,三角瓶在37，每分钟200转的摇床上振荡培养12h。,（四）大肠杆菌的扩大培养,（五）大肠杆菌的划线分离,1、操作步骤（1）灼烧接种环；（2）接种环冷却后，从在摇床上培养了12h的菌液中蘸取菌液；（3）在近火焰处，用带菌液接种环在固体培养基上划线。,划线分离、培养、菌种保存,划线后盖好培养皿，将培养皿倒置,在37恒温培养箱中培养12-24h,划线的末端出现不连续的单个菌落，表明菌已被分离。,在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再用划线法接种在斜面上，37培养24h后，置于4冰箱中保存。,2、问题讨论,（3）为什么每次划线之前都要灼烧接种环？,每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落。,（1）在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？,以免接种环温度太高，杀死菌种。,（2）划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？,划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而