临床微生物实验室基本操作流程.ppt

微生物实验室,临床微生物实验室基本操作流程,药敏试验,标本前处理,报告,标本筛选,实验室质量控制环节,分析前,分析中,分析后,室间质评,微生物结果的影响因素,针对性的检验申请,病人准备,标本的采取,标本的运输,标本检验,危急值报告,标本的保存和处理,结果审核和批准,4-15%,18.5-47%,分析前,分析中,分析后,微生物标本采集过程中,临床医师和护士,血培养BloodCulture,采集时间,根据研究表明细菌通常在寒战和发烧前1小时入血考虑到可操作性，血培养标本应同时采集或在尽量短的间隔期内采集。间隔式采血法仅适用于确诊持续性菌血症如：细菌性心内膜炎或其他脉管内感染如导管相关性感染,虽然血培养阳性率与体温变化看上去相关性不大，但临床仍应遵从“（下一次）用药前”或“停药24小时后”采血！,推荐的血培养组合的数量,血培养次数,怀疑菌血症的成人患者：采集2-3套血培养标本（不同部位）。婴幼儿患者：采集2次血培养标本（不同部位）除特殊情况外，在采取血培养后的2-5天内，无需重复采取血培养。可疑为持续性菌血症：如心内膜炎、导管相关血流感染，间隔(1-24h)几次取血监测、捕捉、指导治疗。,采血量,成年患者：推荐的采血量为每套不少于10ml，每瓶不少于5ml；婴幼儿患者：推荐的采血量，每瓶不少于2ml。备注：如果实验室收到采血量不足的标本仍需进行培养，则需在报告单上注明：“送检血液标本量未达到要求，会影响结果的灵敏度”。,血培养的采集,从静脉取血；不宜从静脉导管或静脉留置口取血；如必须从留置导管内采血，应同时从外周静脉采集另外一个血培养标本，以帮助阳性结果判读。不主张换针头入瓶有血的培养瓶不可放入冰箱和冻箱保存。,血培养的运送,采集后血培养瓶应立即送往实验室（2小时内）接种前后的血培养瓶不得冷藏或冷冻。任何延误送入自动连续监测血培养仪的行为将会延误或阻止细菌生长的检测；血培养瓶保留在室温不得超过数小时；,血培养污染BloodCultureContamination,血培养存在的主要问题,如果皮肤定植的细菌没有被杀死，这些细菌将通过针头被吸入血培养瓶并在瓶中生长这些细菌(主要为凝固酶阴性葡萄球菌)引起导管相关性败血症(住院患者血培养第一位)医生不能将真的凝固酶葡萄球菌感染和皮肤定植菌“污染”相区分，因此他们很可能会用万古霉素治疗患者。,污染细菌,血培养污染定义为在几次血培养中单个血培养下列细菌阳性:凝固酶阴性葡萄球菌棒状杆菌微球菌丙酸杆菌芽孢杆菌,呼吸道标本RespiratoryCultures,上呼吸道标本UpperRespiratoryTractSpecimens,咽拭子运送培养基,可以运送需氧、厌氧、苛养菌4或RT24或48小时,尼龙植绒拭子,传统的人造纤维拭子,鼻拭子,深部鼻拭子一般与咽拭子的信息等值。相对于诊断深部感染，鼻拭子更适用于侦测健康携带者。深部鼻拭子可用于诊断化脓链球菌和白喉棒状杆菌感染，或金黄色葡萄球菌与化脓性链球菌暴发感染时调查用。,鼻窦炎标本,采集脓液或窦吸出液/盐水清洗液进行革兰氏染色和需氧、厌氧平板培养。,下呼吸道标本LowerRespiratoryTractSpecimens,下呼吸道标本LowerRespiratoryTractSpecimen,自然咳痰,诱导痰,气管内吸取物,支气管肺泡灌洗液,保护性毛刷,支气管灌洗液,肺部组织,下呼吸道标本收集,所有病人的下呼吸道标本应在采集后立即送至微生物室，并于1小时内接种室温下放置1h会降低肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的分离率而定植于上呼吸道的非致病菌则会过度生长。下呼吸道标本勿放冰箱或运输时勿置于冰块中,痰液标本,采集时间：用抗生素前采集方法：自然咳痰：必须用清水漱口3次，应包括咽喉部，立即用力咳出痰，于灭菌容器或输送培养基中。支气管镜或支气管毛刷:由医生采集，建议直接种入输送培养基。运送要求于2小时内送达检验室如无法马上送出，标本置于4保存,标本质量,带血痰,唾液or诱导痰(?),脓痰,粘液样痰,用革兰氏染色来评估呼吸道标本是否合格,痰标本10鳞状上皮细胞/每低倍视野=拒收,有PMN的痰标本，中性粒细胞多，且鳞状上皮细胞特别少=接受，进行培养,粘液丝,细胞内细菌,胞内细菌提示感染,柱状纤毛上皮细胞,肺泡巨噬细胞,滑石颗粒,淀粉样小体,见于迁延长时间的呼吸道疾病,弹性纤维,库什曼螺旋体,呈链排列的革兰阳性球菌和革兰阴性球杆菌。缺乏鳞状上皮细胞提示混合厌氧菌感染,你看见多少种形态？,几种细菌的混合形态，缺乏鳞状上皮细胞=混合厌氧菌感染。如果是呼吸道标本可能是吸入性肺炎。报告临床医生“提示吸入性肺炎”,呼吸道标本中未被染色的，有折射的杆菌=抗酸杆菌,呈链排列的革兰阳性球菌？或革兰阳性分枝杆菌？,肺中的结节吸出物，不规则“球菌”，分叉，无短链，链的末端的呈尖状，都证明是分枝状的革兰阳性杆菌，可能是放线菌或诺卡菌（通常来自脑或肺组织的标本）,呼吸道标本的涂片评估模式,配合诊断肺部感染的其它标本,血液标本：体温38的CAP病人，应在抗生素使用前无菌手续取静脉血。全自动血培养仪：10ml血/瓶胸腔积液：合并有胸水时，应及时无菌抽取胸水置全自动血培养仪中细菌培养。,脑脊液CEREBROSPINALFLUID,严格无菌操作,脑脊液CEREBROSPINALFLUID,无菌操作，腰椎穿刺采样最少1mL，最好5mL打入3个小管中，以第二根小管送检培养分枝杆菌培养标本需要2mL以上，置于4保存即时送检绝对不能冷藏！,尿培养标本UrineCulture,尿道感染,每年850万例尿路感染,90%为女性1/2.5个妇女在一生中会得UTI下行性感染：血流肾脏膀胱（金黄色葡萄球菌，酵母菌，结核分枝杆菌）上行性感染：尿道膀胱肾盂血流,用于尿液培养的标本,肾活检或肾抽吸物（外科）耻骨上膀胱抽吸物（孕妇，婴儿，全膀胱）微导管尿（内部导管和外部导管）-老年人中段尿，清洁留取急诊成年人留置导尿管中采集的标本（经常被三种以上细菌污染）,尿液标本,采集中段尿时要先用肥皂清洗女性的外阴和男性的外生殖器包括包皮内，然后用清水冲洗长期留置导尿管的患者应在更换新管时留取尿标本。做厌氧培养时应耻骨上膀胱穿刺采集尿。,尿液运输方法,如不能及时送检，需冷藏。4小时延迟送检，须废弃标本。,评价尿培养的标准,出现如下情况时，怎样判断？,生殖道标本LowerGenitalTractSpecimens,女性生殖道标本送检,宫颈或宫颈内部：淋病奈瑟菌，沙眼衣原体，人乳头瘤病毒,阴道高位拭子：酵母菌，阴道毛滴虫，细菌性阴道感染,肛门或直肠拭子：淋病奈瑟菌，B群链球菌（+阴道拭子）,女性下生殖道标本采集,正常阴道内微生物-以培养为基础,乳酸杆菌,葡萄球菌,普雷沃菌属,消化链球菌,链球菌,产色素菌,肠杆菌,脲原体,95%,66%,52%,42%,38%,25%,25%,80%,支原体,14%,传统方法检测的与细菌性阴道病相关的致病菌,二路普雷沃尔菌P.disiens；,人体普雷沃菌、利氏拟杆菌,动弯杆菌属,四消化链球菌、厌氧消化链球菌；,草绿色链球菌,阴道加德纳菌,人型支原体,早发B群链球菌病,1%的新生儿因母亲定植（10-30%的孕妇）发展为EOD50%病死率25%的美国女性在L24:531538,男性生殖道标本送检,男性的生殖道致病菌与女性绝大部分一致；尿道炎通常由淋病奈瑟氏菌或非淋病奈瑟氏菌引起；可能并发于生殖器溃疡；,淋病奈瑟氏菌感染,挤压尿道或直接获取尿道口分泌物；直接涂片如果培养，须直接接种温暖的筛选性平板，保温并即刻送微生物室培养。,任何不能及时送检的生殖道标本，都应采用运送培养基采样保存。,禁止冷藏,伤口、皮肤、组织Wound、Skin、Tissue,标本采样和送检,临床常常送检脓液和渗出液的拭子给实验室做检查。风险标本不足量拭子干燥拭子吸附细菌，难于释放到平板培养尽可能抽吸或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样深部伤口和特殊原因造成的伤口，如动物咬伤，应考虑厌氧培养；,标本采集,对开放性病灶的采集：如眼结膜脓性分泌物、扁桃体、外耳道、手术后切口、导管治疗感染、瘘管内脓液、生殖道分泌物等均属于开放性病灶。应先用灭菌生理盐水冲洗表面污染菌，去除旧的分泌物，用灭菌拭子采集病灶深部的分泌物，也可取感染部位下的组织送检。,标本采集,闭锁性脓肿如淋巴脓肿、肺脓肿、肝脓肿、腹腔脓肿、盆腔脓肿等，对封闭的脓肿常采用穿刺或引流的的方法采样，应在用药前采集，注意脓液的气味、性状、颜色注意厌氧菌存在的可能。不能及时送检应用输送培养基。,组织和抽吸物涂片检查,粪便标本,采集时间腹泻患者应在用药前、急性期采集；沙门菌感染、肠热症应在2周内采；厌氧菌出现症状即采集。采集方法自然排便采集标本时，取有脓血、粘液、组织碎片部分的粪便1-3g。液体粪便择取絮状物，1-3ml，直接装入无菌、带盖、广口的培养杯中送检，送检的标本中不能加入防腐剂。不易获得粪便患者及幼儿：用直肠拭子采集后置保存液或输送培养基中送检。,粪便标本,注意事项：要用无菌容器在用药前采集标本。应床边接种或置输送培养基送检。厌氧细菌（难辨梭菌）培养的标本应尽量减少与空气接触。,拒收标本指标,除非不能再采集的标本，否则不予检测；如果培养或检测，要对结果进行说明。书写错误容器问题干燥拭子厌养菌容器,无菌无防腐剂足够大安全严密不易碎运送培养基无生长因子或保持特定菌的培养基避免用木质的棉拭子对细菌有毒害,微生物标本的运送及贮存条件,细菌培养标本质量评估指标,利用细胞学检视咳痰，气管插管抽痰污染率血液，体液，尿液培养标本体积及数量脑脊髓液，血培养,各类标本质量评估指标,尿液培养结果污染率20%2种菌株，且100,000cfu/mL血培养污染率3%棒状杆菌、微球菌、非炭疽芽孢杆菌属、疮疱丙酸杆菌及凝固酶阴性葡萄球菌24小时内只送单套血培养5%,分析前质量保证的措施,详细制定并向临床发放标本采集手册；每年对临床医护人员、运送中心人员、新进人员进行“标本采集、运送”培训，至少一次；加强工作人员的培训，严格遵守SOP文件，认真做好分析前质量保证的各种记录。每月对不合格标本阳性率、血培养污染率等进行统计分析，反馈给相关部门，加强标本的质量，提高微生物检验水平。,标本处理,血培养脑脊液培养粪便培养生殖道标本培养痰标本咽部标本培养尿培养真菌培养抽吸物和组织标本的培养（需氧、厌氧培养）,全自动接种仪,消耗品仓开盖后可进行耗材的更换（接种涂布器和吸头）标本仓开盖后可进行标本的取放打印机仓门开盖后可以进行条码卷的更换废物收集箱内置垃圾箱触摸屏进入仪器控制软件,PREVIIsola仪器概况,运行前检查,查看仪器状态是否为“Ready”确保所有耗材足够（Tips,Applicators,LabelsandPlates)WasteBins垃圾箱不是满的确保选择了适当的平板卡架设置且输入卡架中装入了对应的平板。确保输出平板架为空的,0,装载Applicators,装载Tips,0,OK,安装Labels,MoreinformationseeInstructionintheUserManualpage8-21,选择适当的平板卡架模式,装载标本开始运行,临床标本常见病原微生物,临床标本常见病原微生物,血液及骨髓标本常见病原菌,临床标本常见病原微生物,穿刺液标本常见病原菌1.脑脊液：2.胆汁：多为肠道菌且多为厌氧需氧菌混合感染,临床标本常见病原微生物,粪便标本常见病原菌1.原发性肠道感染：革兰氏阴性杆菌（沙门、志贺、弧菌、小肠结肠耶尔森、致病性大肠等）、弯曲菌、结核、金葡、炭疽、蜡样芽胞杆菌、梭菌属、轮状病毒、原虫。2.继发性肠道感染：多因广泛应用广谱抗生素、血液科、肿瘤科患者、激素类药物的不规范应用、侵入性操作：艰难梭菌、金葡、念珠菌、铜绿、变形、弗劳地、致病性大肠、非结核分枝杆菌、偶见轮状病毒、隐球菌等。,临床标本常见病原微生物,泌尿生殖道标本常见病原菌1.尿液：大肠、金葡、腐葡、表葡、A群、肠球、淋球、厌氧链球菌、肠杆菌科细菌、阴道加德纳、念珠菌、结核分枝杆菌、沙眼衣原体、解脲脲原体、生殖道支原体等。2.生殖道：淋球、念珠菌、阴道加德纳、杜克雷、B群、梅毒螺旋体、沙眼衣原体、解脲脲原体、人型支原体、生殖道支原体、拟杆菌、厌氧链球菌等。,有意义的细菌浓度(CFU/ml),临床标本常见病原微生物,痰及下呼吸道标本常见病原菌1.社区获得性肺炎：流感、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、单纯疱疹病毒、肺炎支原体、衣原体、嗜肺军团菌、多杀巴斯特菌等。典型：肺链、流感嗜血、卡他、化脓性链球菌等。2.医院获得性肺炎：肺克、铜绿、鲍曼、嗜麦芽、大肠、阴沟、粘质沙雷、MRS、耐青霉素肺链、肠球、弗劳地、变形、念珠菌、曲霉菌、毛霉菌、非结核、诺卡、厌氧菌、放线菌等。,定植or感染,临床标本常见病原微生物,泌尿生殖道标本常见病原菌1.尿液：大肠、金葡、腐葡、表葡、A群、肠球、淋球、厌氧链球菌、肠杆菌科细菌、阴道加德纳、念珠菌、结核分枝杆菌、沙眼衣原体、解脲脲原体、生殖道支原体等。2.生殖道：淋球、念珠菌、阴道加德纳、杜克雷、B群、梅毒螺旋体、沙眼衣原体、解脲脲原体、人型支原体、生殖道支原体、拟杆菌、厌氧链球菌等。,抽吸物和组织标本的厌氧培养主要致病菌:金黄色葡萄球菌、化脓链球菌、其他-溶血链球菌、铜绿假单胞菌、其他革兰阴性杆菌、梭状芽孢杆菌、梭菌属、拟杆菌属、其他厌氧菌非致病菌:凝固酶阴性葡萄球菌、少量棒状革兰阳性杆菌,用酒精消毒皮肤后或者在手术时采集标本将抽吸物或组织置于厌氧转运小玻璃瓶中拭子不能用于厌氧培养将体液置于血培养瓶和ACD管中,#1,#2,#3,在CO2孵箱中将BAPUsewithproperattribution,#5,.如果为组织，在无菌的小盘上将其捣碎，然后在含硫肉汤中将其研磨成匀浆,将研磨后的组织接种于BAP,Mac,Bru,BBE,CM肉汤,&LKV