残留检测质量控制规范概述

上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,残留检测质量控制规范概述,上海出入境检验检疫局朱坚jianzhu,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,主要内容一、概述二、残留分析测试的质量保证三、标准操作程序的制定四、检测质量控制五、分析仪器的质量保证六、分析结果的可追溯性七、能力比对测试,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,(一）残留分析的“质量”,在残留分析测试中，从采样、样品制备到分析的全过程，直到计算结果，各个环节都存在质量问题，“质量”这一概念在分析实验室中常包含数据本身的质量、分析方法的质量和分析体系的质量,一、概述,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,一、概述,(二)分析质量控制是用现代科学管理技术和数理统计方法来控制分析实验室的质量，把分析误差控制在限度内，保证分析结果有一定的精密度和准确度，使分析数据在给定的置信水平内有把握达到所要求的质量。,实验室的质量控制主要包括实验室内部质量控制实验室间质量控制,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,影响测定结果的常见因素分析过程分析前分析中分析后样品因素生物学采样理化人为因素工作态度工作能力环境影响实验因素方法学试剂质量实验用水标准品质控品仪器管理因素人员配置操作规程质量措施,二、残留分析测试的质量保证QualityAssurance(QA),上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,二、残留分析测试的质量保证QualityAssurance(QA),质量评定,质量控制,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,质量控制的内容主要包括：样品分析前的质量保证、分析中的质量控制和分析后的质量评估三个主要过程的质控,二、残留分析测试的质量保证QualityAssurance(QA),上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（一）、残留分析测试的质量保证体系,分析后质量评估,分析中质量控制,取样工具,取样计划的制定,样品采集,样品运输,样品制备,人员素质工作环境标准品室内质控,仪器质量保证方法选择与评价试剂选择与评价,按操作规程前处理及分析测定,监管人员,反馈信息,室内复查,保留样品随时复查,发送报告客户投诉室间质评,登记填发报告,分析前质量保证,分析中质量控制,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（二）质量控制的基本步骤,1有专人负责全面质控工作。2对工作人员进行业务培训，普及质控知识。3科学的管理和严格的规章制度是质控方案得以实施的保证。4有标准化的操作规程。5有分析前和分析后的质量控制程序。6仪器量器的定期鉴定、校正和正确使用。7。实验用水、试剂、质控品及校准品的质量符合要求。8所采用的各种测定方法的准确度、精密度等技术性能良好。9选择合适的室内质量控制方法，开展室内质控，对失控结果及时采取相应的处理措施。10参加实验室间的质量评价活动或能力比对检验，认真分析回报结果，对失控的项目要及时检查原因，并采取相应的改正措施。,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（一）目标所有残留检测方法，包括残留监控检测方法和日常出口残留检测方法，应建立SOP，所有方法应尽可能通过ISO/IEC17025认可,三、标准操作程序的制定StandardOperatingProcedure,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（二）编写依据残留分析质量控制指南残留检测标准操作程序(SOP)编写指南起草残留检测标准操作程序SOP的格式要求本实验室的验证残留检测标准操作程序（SOP）的作业指导书,标准操作程序的制定StandardOperatingProcedure,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,1、SOP需要提供的参数分析物和基质特异性（特异性）标准曲线（范围）检出限定量限回收率室内精密度（包括日内重复性和日间重现性）室间精密度（若条件许可，做室间重现性）,（三）对验证残留检测标准操作程序（SOP）作业指导书的基本要求,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,2、应明确本实验室做方法验证的具体细则，包括：具体操作步骤标准品添加的方法标准品添加的水平平行样的个数定性标准（定性离子的丰度比）定量方法定量限的确定依据,（三）对验证残留检测标准操作程序（SOP）作业指导书的基本要求,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（三）对验证残留检测标准操作程序（SOP）作业指导书的基本要求,3、应尽量提供的参数判断限(CC)检测能力(CC)耐用性稳定性(溶液和基质)不确定度,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,4.对各验证参数的要求(1)特异性Specificity,基质:具有典型性基质空白在分析物出峰时间段判断基质干扰(信号，色谱峰，离子流)对于验证基质，应分类别分别验证，例如肌肉、肝脏、肾脏、脂肪、皮肤、奶、蛋、鱼、虾、蜂蜜、蜂王浆、肠衣等，并在验证报告中具体写明验证所采用的具体基质，例如鸡肝还是鸭肝,（三）对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,4.对各验证参数的要求(1)特异性Specificity分析物:与分析物相近化合物如异构体,代谢物,降解产物:将异构体,代谢物,降解产物添加到基质中，进行评估研究:错误判断?干扰物?折中的定量方法,（三）对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,用已知浓度的被测物试验出能被可靠地检测出最低浓度或量.,(2)检测限,2仪器分析信噪比法用于能显示基线噪音的分析方法.以3倍信噪比（S/N=3)相对应浓度确定检测限量.,对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,（2）检测限(LimitofDetection,LOQ),上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,指样品中被测物能被定量测定的最低量.（应具有一定的准确度和精密度）,(3)定量限,确定方法:1仪器分析S/N=102非仪器分析目视法,（三）对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,(4).回收率,使用有证物质或者空白添加添加浓度:1、1.5和2xMRPL,0.5、1和1.5xMRL,n6计算:回收率%=100 x(测得的浓度/添加的浓度),（三）对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,(5).准确度,确证方法准确度：重复分析标准物质，测定的含量（经回收率校正后）平均值与真值的偏差指导范围如下：,（三）对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,没有标准物质(CRM)时，准确度可以通过测定空白基质中加入已知量分析物的回收率获得,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,重复性是指在重复性条件下的精密度-室内精密度；重复性条件是指在同一实验室，由同一人操作，使用相同的设备，用同样方法获得独立测量结果的条件。重现性是指在重现性条件下的精密度-室间精密度；重现性条件是指在不同实验室，由不同的人员操作，使用不同的设备，用同样方法获得测量结果的条件。,(三)对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,(6).精密度(变异系数),上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,(6).精密度(变异系数),在重现性条件下，对参考标准或加标样重复分析的实验室间变异系数（CV），不得超出Horwita方程计算的水平。该方程如下：CV=2xE(1-0.5logC),在重复性条件下，实验室内CV通常在上述数值的一半到三份之二之间。在实验室内重现性条件下进行的分析，其实验室内CV不应大于上述重现性CV。质量分数低于100g/kg时，用Horwitz方程给出无法接受的高值。因此，浓度低于100g/kg的CV应尽可能低,(三)对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,重现性,与其他实验室进行比对或者进行协同实验（按照ISO5725-2）实验室内重现性不同分析员对同一批样品进行分析（尽可能使用不同试剂、不同仪器）,(三)对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,(6).精密度(变异系数),上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（7）标准曲线,至少5个水平(包括原点)即0,0.5,1.0,1.5,2.0,4.0倍MRL/MRPL可接受范围线性回归方程y=kx+b相关系数:R2(0.97或更好,理想的为0.99),(三)对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,(三)对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,5.对确证方法的要求,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,(三)对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,5.对确证方法的要求,一般性能标准确证方法应提供分析物的化学结构信息。当方法采用内标时，在提取步骤开始时就应将适当的内标加入到测试部分中去。如果没有合适的内标可用，可以用共色谱法对分析物进行定性。在这种情况下,只应有一个色谱峰，且峰高（或峰面积）的增加相当于加入分析物的量。用GC或LC时，半峰宽应在原来峰宽的90-110%以内，保留时间的变化应在5%以内。分析物含量等于或接近容许限或判断限的标样或加标样（阳性控制样品），以及阴性控制样和试剂空白都应在对每批样品进行分析时同时执行整个分析过程。在分析仪器上的进样顺序是：试剂空白、阴性控制样、要确证的样品、阴性控制样品再进样，最后是阳性控制样品。顺序的任何调整都应有充分理由证明其合理性。,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,6.对质谱确证方法的要求,全扫描：当用单级质谱记录全扫描图谱时，至少要有四种离子的相对丰度大于等于基峰的10%。如果分子离子峰在参考图谱中的相对丰度10%，则必须包括在内。选择离子监测质谱方法时要求:96/23/EC指令附录IA组4识别点96/23/EC指令附录IB组3识别点,(三)对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,6.对质谱确证方法的要求,(三)对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,质量碎片类型和识别点的关系,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,6.对质谱确证方法的要求,对于每个诊断离子，信噪比3:1测定至少一对离子丰度比相对离子丰度最大容许偏差不能超过下表,(三)对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,7.对其他确证方法的要求,(三)对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,仅对于B组物质适用（限用物质）对于A组物质有1个识别点LC或GC带IR检测器LC带全扫描UV/VIS检测器LC带荧光检测器2-DHPTLC带全扫描UV/VIS,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,7.对其他确证方法的要求,(三)对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,仅对于B组物质适用（限用物质）对于A组物质有1个识别点GC-ECD(用二根不同极性的色谱柱)LC-酶免测定(2种不同的色谱分离或第二种测定方法)LC-带UV/VIS单波长(2种不同的色谱分离或第二种测定方法),上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,8、存放稳定性,用于加标分析物在溶液中的稳定性2个浓度在空白基质提取物添加分析物基质标准(在MRPL/MRL浓度)4种保存条件在暗的条件，20oC下在暗的条件，+4oC下在暗的条件，室温下光照，室温下,(三)对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,8存放稳定性-Matrix,保存时间可选择为1周、2周、4周或必要时更长，例如保存到经定性和/或定量测定开始发现降解现象时为止应记录最长保存时间和最适宜的保存条件,(三)对残留检测标准操作程序（SOP）编写作业指导书的基本要求,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（一）实验室内部质量控制,实验室内部质量控制是实验室分析人员对分析质量进行自我控制的全过程，它是保证实验室提供准确可靠分析结果的必要基础，它主要反映分析质量的稳定性。,四、检测质量控制,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,质量控制,技术标准,SRM，StandardReferenceMaterial,标准参考物质QC，QualityControl,质量控制,检测质量控制是通过对标准参考物质或质量控制样品的质量评定来进行的。,四、检测质量控制,（一）实验室内部质量控制,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,1、分析过程的质量控制,测量方法的选择线性范围准确度精密度灵敏度检出限,测量方法的校准标准方法校准标准物质校准仪器设备的周期性维护和校正,四、检测质量控制,（一）实验室内部质量控制,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,2、校准曲线的绘制,校准曲线是用于描述待测物质浓度（或量）与相应的测量仪器的响应量之间定量关系的曲线。,工作曲线绘制校准曲线的标准溶液的分析步骤与样品分析步骤完全相同,标准曲线绘制校准曲线的标准溶液的分析步骤与样品分析步骤相比有所省略。,四、检测质量控制,（一）实验室内部质量控制,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,2、校准曲线的绘制,每批样品检测需要制作点以上（包括点）的标准曲线3、进样程序制定作业指导书，并遵照执行,四、检测质量控制,（一）实验室内部质量控制,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,四、检测质量控制,3、质量控制样品每批检测样品需要同时检测阴性、阳性质量控制样品和盲样，欧盟专家建议数量：阴性质量控制样品个、阳性质量控制样品个、盲样个。鼓励采用实物标样,（一）实验室内部质量控制,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,质量控制图是根据分析结果的变化应服从正态分布规律而绘制控制分析质量的一种简单有效的统计技术.可直观的反映分析结果的准确度或精密度的变化及时发现异常现象通过查找原因,采取相应的措施,使分析质量得到保证,4、质量控制图的制作,（一）实验室内部质量控制,四、检测质量控制,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,4、质量控制图的制作,将均匀、稳定的“控制标准样”（已知值的标准物质）与样品一起进行分析测试，将获得的数据绘图以检验测量系统是否在统计控制之下,（一）实验室内部质量控制,四、检测质量控制,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（1）设定靶值的方法暂定靶值的设定：为了确定靶值，新批号的质控品应当与当前的质控品一起进行测定，根据20次或更多独立批次获得的至少20次质控测定的结果，计算出平均值，作为暂定靶值。常用靶值的设立：以最初20个数据和三至五个月在控数据汇集的所有数据的累积平均数作为质控品有效期内的常用靶值，并以此作为以后室内质控图的平均数，对个别在有效期内浓度水平不断变化的项目，则须不断调整靶值。,4、质量控制图的制作,实验室应使用自己现行的测定方法，测定新批号质控品各个项目的靶值，定值质控品的标定值只能作为确定靶值的参考,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,稳定性较长的质控品,对新批号的质控品进行测定，根据至少20天的20次质控测定结果，计算出平均数和标准差，作为暂定靶值和暂定标准差。以此暂定靶值和标准差作为下一月室内质控图的靶值和标准差进行室内质控；一个月结束后将该月的在控结果与前20个质控测定结果汇集在一起，计算累积平均数和累积标准差（第一个月），以此累积的平均数和标准差作为下一个月质控图的靶值和标准差。重复上述操作过程，连续3至5个月，以最初20个数据和至5个月在控数据汇集的所有数据计算累积平均数和标准差，以此作为该质控品有效期内的常用靶值和常用标准差。,4、质量控制图的制作,（1）设定靶值的方法,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,稳定性较短的质控品,在34天内，每天分析每个水平的质控品34瓶每瓶进行23次重复测定，收集数据，计算平均数和标准差，以此作为该质控品有效期内的靶值和标准差。对于某些不是每天开展的、有效期较短的试剂盒项目，用上述方法计算获得平均数和标准差有很大的难度。采用Crubbs氏法，只需连续测定3次即可对第3次检验结果进行检验和控制。,（1）设定靶值的方法,4、质量控制图的制作,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（2）设定控制限的规定对新批号的质控品应确定控制限，控制限通常是以多个标准差表示，即以标准差的倍数表示。不同项目（定量测定）的控制限要根据其采用的控制规定来决定。暂定标准差和常用标准差的设定方法同暂定靶值和常用靶值的设定。,4、质量控制图的制作,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（3）质量控制图的制作方法,在常规样品分析中，每分析一批样品插入一个“控制标准样”（已知值的标准物质），或者在分析大批样品时，每膈1020样品插入一个“控制标准样”，其分析方法与试样完全相同，并至少独立分析20次以上。，然后以实验测定结果为纵坐标，实验顺序为横坐标，在普通方格纸绘制而成。,4、质量控制图的制作,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,例：回收率控制图,计算均值（）、标准差（S）和变异系数（CV），绘制-S质控图，得到均值线（）、警告线（2S）和失控线（3S）。与质控图制作相同批号的控制样品，每天随样本分析，结果点在图上，直线连接。,4、质量控制图的制作,（3）质量控制图的制作方法,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（4）结果分析正常分布规律95%数据落在2S内不能有连续5次结果在同一侧不能有5次结果渐升或渐降不能连续2个点落在2S以外不应该有落在3S以外的点,4、质量控制图的制作,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,d,均数,+2S,-2S,+3S,-3S,正常分布,质量控制图的制作,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（4）结果分析异常表现:漂移，提示存在系统误差趋势性变化，说明试剂或仪器的性能已发生变化精度变化，提示测定的偶然误差较大，如仪器、试剂不稳定等,4、质量控制图的制作,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,漂移,趋势变化,精度变化,均数标准差质控图,-3S,+3S,+2S,-2S,d,均数,质量控制图的制作,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（5）判断规则：12S警告规则：当2份质控样品中的任意1份测定值处于2S3S界限内，为“警报”信号。12.5S规则：若有一个质控结果超过2.5S提示存在随机误差。13S规则：当2份质控样品中的任意1份测定值超过3S界限，为“失控”。提示存在随机误差。R4S规则：同一批中二个质控结果之差超出4S范围，其中一个超出2S限值，另一个超出2S限值，为“失控”，属随机误差过大。,4、质量控制图的制作,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（5）判断规则：22S规则：同批两个质控品结果同方向超出2S限值，或同一质控品连续两次质控结果超出2S限值为“失控”，多由系统误差造成。41S规则：当1份质控样品的测定结果连续4次超过1S或1S界限，或2份质控样品的测定结果同时连续2次超过1S或1S界限时，为“失控”，一般由系统误差所至。7T规则：当7个连续的质控结果呈现向上或向下的趋势，提示存在系统误差。10规则：当1份质控样品测定结果连续10次偏于均值一侧时，或2份质控样品的测定结果同时连续5次偏于一侧时，为“失控”，是系统误差所至。,4、质量控制图的制作,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（6）失控后处理操作者在测定质控时，如发现质控数据违背了质控规则，应填写失控报告单，对失控结果要进行回顾、检查、重复测定，或另取质控品分析，或检查仪器、试剂和操作等，以纠正失控。,4、质量控制图的制作,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,五、分析仪器的质量保证,（一）建立仪器的相关记录（二）建立仪器的操作程序（三）建立仪器的检定与校准程序（四）仪器的比对,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（一）建立仪器的相关记录应该保存每一台仪器对检验有重要意义的记录，如唯一标识仪器用途使用说明书工作条件工作状态适用范围故障出现及维修记录等,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（二）建立仪器的操作程序根据不同的目的，按说明书的要求，建立仪器的操作程序，并在实际操作中严格按操作程序实施,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（三）建立仪器的检定与校准程序（）除定期外部校准外，还应有期间核查及其记录（）对于精密天平（如称量标准品的天平）需要每天开机后进行标准（可采用内置砝码）（）对于移液枪的期间核查应至少月次（4）对于质谱仪应视需要和定期对其调谐，并保存纪录,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（四）仪器的比对对具有两台以上同类仪器，并有相同检测项目的实验室，应进行仪器间的比对实验，以确保结果的一致性。,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（一）样品接收与保存样品接收时应检查样品状态是否符合检测要求，送样单是否有缺项，是否符合残留监控要求，并予记录，对于不符合情况需要按本实验室的作业指导书进行处理并记录待检样品、检毕样品、阳性样品等分别储存，并且保存一年以上，样品需要上锁，并每天至少记录次温度,六、分析结果的可追溯性,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（二）标准品及标准溶液1.标准品及证书管理（）标准品应与证书符合一一对应关系，保证追溯性要求。（）标准品储存冰箱应上锁，并且专人保管，对冰箱温度每天记录。2.标准溶液配制记录及稀释记录对于标准溶液的配制和稀释均应记录，并保证追溯性要求3.标准溶液标签应包括名称、编号、浓度、溶剂、配制人、配制日期、保存期限和储存条件等必要信息,六、分析结果的可追溯性,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（三）原始记录1.原始记录单（）应包括所有必要信息，真正保证追溯性要求，样品编号应为唯一性编号，并存在于检测的全过程（）纪录所使用的所有仪器的编号(如天平、GC/MS、LC/MS等)（3）纪录所使用的色谱柱的编号（4）应有所有与检测结果有关的信息（如样品质量、分取情况、定容情况、标准品浓度等）,六、分析结果的可追溯性,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,（三）原始记录2.原始谱图应打印出本批次所有检测样品、标准品、空白样品、质量控制样品的原始谱图，对于质谱检测，需要明确显示出子离子丰度比，并符合2002/657/EC对确证检测相关要求,六、分析结果的可追溯性,上海出入境检验检疫食品伙伴网（）,七、能力比对测试近年来，许多国家已实行了实验室许可证制度；设立了能力比对分析（proficiencytesting，PT），现已成为全球性室间质量保证系统（externalqualityassurance