2015ITC--Graves病纵向十年

Graves病纵向十年：新突破，新亮点,1,甲状腺纵横十年：新突破，新亮点,Graves病纵向十年：新突破，新亮点,2,来自美国加州洛杉矶希德斯-西奈医疗中心的SandraMMclachlan教授阐述Graves病近10年的研究进展,SandraMMclachlan教授研究方向：Graves病细胞/分子间相互作用导致TSHR自身抗体产生及桥本甲状腺炎TPO和Tg自身抗体,Graves病纵向十年：新突破，新亮点,易感基因？,甲状腺自身免疫性疾病谱,T细胞(辅助性T细胞调节性T细胞)细胞因子,Graves病甲亢刺激性TSHR自身抗体甲状腺淋巴细胞浸润轻度/中度,桥本甲状腺炎甲减TPO自身抗体Tg自身抗体阻断型TSHR抗体(极少患者)甲状腺淋巴细胞浸润可为广泛性,？,GD动物模型,发病机制？,新治疗方案,3,2011Pujol-Borrell：实时定量PCR分析GD胸腺中TSHR基因的转录水平，探索GD的易感基因,4,TSHR属于组织限制性抗原(仅在甲状腺、胸腺高表达)，TSHR在胸腺表达并诱导中央T细胞耐受为探索TSHR基因多态性和GD之间的关联，本研究假设TSHR基因变异可影响胸腺中TSHR基因的转录水平从而影响GD易感性采用实时定量PCR法分析胸腺的TSHRmRNA，根据TSHRSNP的基因型分析数据，了解TSHR基因多态性与Graves病的相关性共分析137名GD患者和192名对照组的跨越TSHR基因的54个SNP,ColobranR,Pujol-BorrellR,etal.HumanMolecularGenetics,2011;20(17):34153423,GD=Graves病；TSHR=TSH受体；SNP=单核苷酸多态性,2011Pujol-Borrell：结果提示SNPrs179247与GD疾病风险强相关，且与发病年龄相关,5,表中为与GD致病相关的SNP，其中rs179247A等位基因与GD疾病风险的相关性最强，而且影响患者发病年龄（rs179247A/A基因型发病年龄为29.810.5，rs179247G/G基因型发病年龄为39.015.1）,ColobranR,Pujol-BorrellR,etal.HumanMolecularGenetics,2011;20(17):34153423,易感基因？,GD=Graves病；TSHR=TSH受体；SNP=单核苷酸多态性,2011Pujol-Borrell：结果提示SNPrs179247易感等位基因的胸腺转录水平显著降低,6,ColobranR,Pujol-BorrellR,etal.HumanMolecularGenetics,2011;20(17):34153423,GD=Graves病；TSHR=TSH受体；SNP=单核苷酸多态性,易感基因？,2014Tomer：SNPs如何启动GD?,7,易感基因？,既往研究提示几个SNPs与GD致病强相关，但未揭示SNPs如何致病过程。本研究假设由细胞因子微环境变化诱导的后天修饰导致了GD相关性SNPs的功能改变,YaronTomera,etal.PNAS.August26,2014;111(34):1256212567,2014Tomer：SNPrs12101261易感等位基因的胸腺转录水平显著降低,易感基因？,IFN：病毒诱发的细胞因子引发甲状腺自身免疫确定IFN引起的后成修饰：导致TSHR基因表达受损确定TSHR内含子1中的致病变异体SNPrs12101261易感基因型(T/T基因型)与转录抑制因子的交互作用降低了胸腺中TSHRmRNA的表达,研究结论,上述研究均提示GD发病机制与中央T细胞耐受缺陷相关,9,SNPrs12101261易感基因型(T/T基因型)与转录抑制因子的交互作用降低了胸腺中TSHRmRNA的表达,StefanM,TomerY,etal.PNAS.August26,2014;111(34):1256212567ColobranR,Pujol-BorrellR,etal.HumanMolecularGenetics,2011;20(17):34153423,TSHR基因中SNP易感基因型的胸腺TSHR转录表达降低均提示GD发病机制与中央T细胞耐受缺陷相关,2014Tomer研究,证实SNPrs179247等位基因AA型(易感基因)的TSHR转录水平降低,2011Pujol-Borrell研究,GD=Graves病；TSHR=TSH受体；SNP=单核苷酸多态性,GD发病：中央T细胞耐受缺陷,易感基因？,Graves病纵向十年：新突破，新亮点,易感基因？,甲状腺自身免疫性疾病谱,T细胞(辅助性T细胞调节性T细胞)细胞因子,Graves病甲亢刺激性TSHR自身抗体甲状腺淋巴细胞浸润轻度/中度,桥本甲状腺炎甲减TPO自身抗体Tg自身抗体阻断型TSHR抗体(极少患者)甲状腺淋巴细胞浸润可为广泛性,？,GD动物模型,发病机制？,新治疗方案,10,基于2011Pujol-Borrell和2014Tomer研究的GD发病机制理论假设：胸腺T细胞耐受缺陷,11,发病机制？,GD=Graves病；TSHR=TSH受体；SNP=单核苷酸多态性;Tg=甲状腺球蛋白；TPO=甲状腺过氧化物酶,2014XiaomingYin:mRNA-深度测序法检测甲状腺组织，是一种探寻GD分子学发病机制的新方法,12,本文目的是分析甲状腺组织内的基因表达情况以助于探索Graves病毒分子学机制提取9例行甲状腺全切术的GD患者(试验组)和12例行甲状腺结节清除(对照组)的甲状腺组织应用mRNA-测序法测序甲状腺组织的单末端、最小测序单位为100碱基的RNA,YinX,etal.JClinEndocrinolMetab.2014Oct;99(10)：E2076E2083,发病机制？,GD=Graves病,2014XiaomingYin:结果提示GD患者的签名基因表达过度,13,YinX,etal.JClinEndocrinolMetab.2014Oct;99(10)：E2076E2083,Graves病组,正常组,红色=过度表达,发病机制？,图为试验组和对照组的GD签名基因表达情况,GD=Graves病,2014XiaomingYin:结果提示GD患者的免疫防卫系统更活跃,正常者,100个甲状腺基因表达,GD患者,YinX,etal.JClinEndocrinolMetab.2014Oct;99(10)：E2076E2083,发病机制？,GD=Graves病,2014XiaomingYin:研究结论,15,GD患者HLA和相关基因在内的抗原表达路径存在过度表达现象同时分析了相关HLA类可能参与免疫过程。mRNA-深度测序法(可定量检测基因表达)是一种探寻GD分子学机制的全新方法,发病机制？,YinX,etal.JClinEndocrinolMetab.2014Oct;99(10)：E2076E2083,GD=Graves病,Graves病纵向十年：新突破，新亮点,易感基因？,甲状腺自身免疫性疾病谱,T细胞(辅助性T细胞调节性T细胞)细胞因子,Graves病甲亢刺激性TSHR自身抗体甲状腺淋巴细胞浸润轻度/中度,桥本甲状腺炎甲减TPO自身抗体Tg自身抗体阻断型TSHR抗体(极少患者)甲状腺淋巴细胞浸润可为广泛性,？,GD动物模型,发病机制？,新治疗方案,16,GD=Graves病；TSHR=TSH受体；SNP=单核苷酸多态性;Tg=甲状腺球蛋白；TPO=甲状腺过氧化物酶,2013Moshkelgosha：GO的第一个动物模型,17,研究背景：GO是Graves病的并发症由于缺少动物模型,其发病机理尚不清楚,TSHR和IGF-1R被认为是相关的抗原hTSHRA-亚基质粒的基因免疫导致眼眶组织大量重塑，主要为GO研究方法：使用组织病理学和核磁共振成像(MRI)评估hTSHRA亚基免疫或通过体内肌肉电穿孔控制质粒的BALB/c雌鼠眼眶组织重塑,MoshkelgoshaS,etal.Endocrinology.September2013;154(9)：30083015,GD动物模型,GO=Graves眼病；sTSHR=人类TSH受体；IGF-1R=胰岛素样生长因子-1受体,2013Moshkelgosha：研究结论,MoshkelgoshaS,etal.Endocrinology.September2013;154(9)：30083015,TSHR是GO的致病抗原眼眶病理学和IGF-1受体抗体无相关性IGF-1R的作用需进一步研究提供了一个临床前模型用于研究:导致眼眶组织改变的机制(T细胞，抗体，细胞因子)探索新的GO干预治疗,GO=Graves眼病；sTSHR=人类TSH受体；IGF-1R=胰岛素样生长因子-1受体,GD动物模型,18,2015Rapoport：第一个自发产生TSAb的鼠,19,TSHR抗体，是GD的致病因素，只在人体自发产生。既往致病性TSHR抗体(即TSAb)仅能由免疫接种动物产生本研究假设将人类的TSHRA-亚基转移到NOD.H2h4鼠中将会导致该蛋白质缺少耐受性将BALB/c人类TSHRA-亚基鼠繁殖成NOD.H2h4鼠,并将后代反复回交成NOD.H2h4鼠,所有后代生长甲状腺球蛋白抗体和甲状腺过氧物酶抗体,RapoportB,etal.JImmunol.2015;194：4154-4161,GD动物模型,备注：该篇文章为讲者带领的研究团队发表,2015Rapoport：为研究GD提供更接近人类发病特点的动物模型,20,RapoportB,etal.JImmunol.2015;194：4154-4161,结果：TSHR转基因NOD.H2h4鼠(TSHR/NOD.H2h4)可产生致病性TSHR抗体TSHR/NOD.H2h4雌鼠比雄鼠更易发致病性TSHR抗体自发产生的致病人类TSHR抗体与鼠TSHR交叉反应不充分且不会引起甲状腺功能亢进结论：TSHR/NOD.H2h4雌鼠可自发的，碘加速的产生致病TSHR抗体，为研究疾病发病机理和检验新的TSHR抗原特异性免疫疗法进而治疗人类Graves病提供模型,GD动物模型,Graves病纵向十年：新突破，新亮点,易感基因？,甲状腺自身免疫性疾病谱,T细胞(辅助性T细胞调节性T细胞)细胞因子,Graves病甲亢刺激性TSHR自身抗体甲状腺淋巴细胞浸润轻度/中度,桥本甲状腺炎甲减TPO自身抗体Tg自身抗体阻断型TSHR抗体(极少患者)甲状腺淋巴细胞浸润可为广泛性,？,GD动物模型,发病机制？,新治疗方案,21,GD=Graves病；TSHR=TSH受体；SNP=单核苷酸多态性;Tg=甲状腺球蛋白；TPO=甲状腺过氧化物酶,2012Clementine体外实验：探索可能用于治疗GO的药,22,眼眶纤维母细胞的TSHR是GO自身免疫攻击的靶目标本研究探索小分子TSHR抑制剂Org-274179-0对源于GO患者的经培育并分化的眼眶纤维母细胞中由rhTSH,GD-IgG,M22诱导的cAMP生成的抑制作用,新治疗方案,vanZeijlCJ，etal.JClinEndocrinolMetab.2012May;97：E781E785,GO=Graves眼病；TSHR=人类TSH受体,2012Clementine体外实验：小分子TSHR拮抗剂Org-274179-0可抑制GO眼眶纤维母细胞的cAMP生成,23,vanZeijlCJ，etal.JClinEndocrinolMetab.2012May;97：E781E785,LMWTSHR拮抗剂(logM),新治疗方案,rhTSH，GD-IgG，M22诱导增加cAMP生成,Org-274179-0抑制cAMP生成,结论：体外实验证实小分子TSHR拮抗剂(Org-274179-0)可抑制GO眼眶纤维母细胞的cAMP生成,cAMP(相对表达),cAMP(相对表达),cAMP(相对表达),*,*,*,cAMP（rhTSH%）,cAMP（GD-lgG%）,cAMP（M22%）,-,-,-,LMWTSHR拮抗剂(logM),anta+vehicleanta+rhTSH,anta+c-lgGanta+GD-lgG,LMWTSHR拮抗剂(logM),anta+h-lgGanta+M22,GD=Graves病；GO=Graves眼病；shTSH=人重组TSH;M22=人单克隆TSAb,2014Neumann动物实验：探索可能用于治疗GO的药,24,评估小分子选择性TSHR拮抗剂NCGC00242364(ANTAG3)对BALB/c雌鼠体内由TSH,LH或FSH,M22诱导cAMP生成的抑制作用,NeumannS,etal.Endocrinology.2014Jan;155(1):310-4,新治疗方案,GO=Graves眼病；TSHR=人类TSH受体,2014Neumann动物实验：第一个报道动物体内有效果的小分子TSHR拮抗剂-NCGC00242364(ANTAG3),25,NeumannS,etal.Endocrinology.2014Jan;155(1):310-4,GD=Graves病；GO=Graves眼病;M22=人单克隆TSAb；LH=促黄体生成素;FSH=促卵泡激素;TPO=甲状腺过氧化物酶；NIS=钠碘转运体,T3组：单独注射T3组T3/M22组：同时注射T3和M22-引起FT4升高T3/ANTAG3/M22组：同时注射T3/ANTAG3/M22-引起FT4升高甲状腺基因表达升高GDPAHmRNA是检测mRNA的内参,结论：ANTAG3是一种有潜力的、有效的、有选择性的小分子TSHR拮抗剂,新治疗方案,小分子TSHR拮抗剂：应用于临床需考虑的问题,26,小分子抑制剂,跨膜区,亮氨酸富集区,胞外区,TSHR是G蛋白偶联受体家族成员,可能会与800个G蛋白偶联受体家族成员有交叉反应，其中多数这些成员没有明显的胞外区抑制剂的特异性测试目前仅限于几个受体成员，主要是LHR或FSHR,LHR=促黄体生成素受体;FSHR=促卵泡激素受体,新治疗方案,中重度GO：目前在临床上尚无有效的治疗方案,27,GO=Graves眼病,GO免疫治疗：B细胞耗竭疗法,抗原,利妥昔单抗（RTX）CD20抗体,无CD20,APC,长寿命细胞,阻断病理性自身抗体的产生,28,利妥昔单抗是一种以B细胞的CD20为靶点的单克隆抗体。CD20是B淋巴细胞抗原，至少在95%的B细胞上表达（从不成熟到成熟的B细胞），但是，在产生抗体的浆细胞中不表达。RTX疗法去除B淋巴细胞和短寿命浆细胞，留下长寿命浆细胞。抗体生成因而得以维持，即使外周B细胞耗竭，其水平也不会改变。,新治疗方案,2015Stan：利妥昔单抗治疗中重度GO不获益,MariusN.Stan.JClinEndocrinolMetab,February2015;100(2):432441,平均GO病程：利妥昔单抗组(10个月)vs.安慰剂组(12.4个月),与安慰剂相比，利妥昔单抗无获益:临床活动评分(CAS)无改善重度不良反应为：5/6,25例中重度GO患者RTX组：初始剂量1000mg，两周后再1000mg，总剂量为2000mg安慰剂组：注射生理盐水,29,GO=Graves眼病,新治疗方案,研究结论,2015Salvi：利妥昔单抗治疗中重度GO获益显著,与甲泼尼龙相比，利妥昔单抗(尽管部分患者仅单次给500mg）的效果更好更好的眼部活动和视觉效果减少患者手术治疗停止治疗后疗效依然维持,平均GO病程：利妥昔单抗组(4.6个月)vs.甲泼尼龙