薄层色谱方法总结ppt课件

.,薄层色谱方法总结,.,1.方法原理,A.流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。B.样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极-（诱导）-偶极相互作用，氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。,.,2.溶剂,使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比（如正丁醇-冰乙酸-水=4：1：1，V/V/V），或者绝对量（如18ml甲苯+2ml甲醇）。其总量应足以使TLC/HPTLC板的浸入深度约为5mm。展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用，如需分层，则按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层），备用。,.,一、溶剂选择规则,.,.,二、展开剂的选择条件,1.对所需成分有良好的溶解性2.可使成分间分开3.待测组分的Rf在0.2-0.8之间，定量测定在0.3-0.5之间4.不与待测组分或吸附剂发生化学反应5.沸点适中，黏度较小6.展开后组分斑点圆且集中7.混合溶剂最好用新鲜配制,.,三、溶剂极性参数表,环已烷:-0.2、石油醚（类，3060）、石油醚（类，6090）、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、异丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氢呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.2,.,1.,一般说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇、乙酸乙酯来调节系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮和萜类等的分离。,2.,中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇、乙酸乙酯等来调节，适合蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离。,3.,强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇、乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。,.,四、展开剂的选择,物质分子化学结构中，通常由较极性部分和非极性部分两部分。例如下面以苯丙烷为极性小部分，随着极性基团部分的增加，总体的极性就增加，展开剂极性也增加了。,.,1.类极性较小的挥发性物质,冰片：石油醚(3060)醋酸乙酯(17:3)厚朴酚：苯醋酸乙酯(9:1.5)丹皮酚：环己烷醋酸乙酯(3:1)-香附酮：苯醋酯乙酯冰醋酸(92:5:5),结论：以石油醚、正构烷和苯为体积百分数比较大的溶剂，通常起溶解和分离化合物的作用，而用醋酸乙酯为调节Rf（比移值）的溶剂。为了减少拖尾之类其他相似相溶原则以外的影响，适当加入添加剂，如有机酸或者有机碱。,.,2.类极性较小的不挥发性物质,-谷甾醇：环己烷醋酸乙酯甲醇(6:2.5:1)或者环己烷丙酮(5:2)、熊果酸：甲苯醋酸乙酯冰醋酸(12:4:0.5)、齐墩果酸：氯仿甲醇(40:1)、猪去氧胆酸：氯仿乙醚冰醋酸(2:2:1)、大黄素：苯醋酸乙酯甲醇(15:2:0.2)或者苯乙醇(8:1)、丹参酮A：苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4)、穿心莲内酯：氯仿-无水乙醇(9:1)靛玉红、靛蓝氯仿乙醇(9:1)或者苯氯仿丙酮(5:4:1),.,结论：这类物质展开剂极性比极性较小的挥发性物质洗脱力强一些，因为这类物质极性小的母核大，而极性大的基团通常可以形成氢键，比如羧酸、羟基。以上物质，母核分子量减小、母核结构中不饱和健的增加（尤其是出现苯环），极性基团的增加，都使极性增加，展开剂极性也增大。这个范围内的物质很多，一般展开剂大百分数的溶剂可以从环己烷甲苯二甲苯苯氯仿的顺序，按照极性要求选择。这里注意，异丙醇、正丁醇极性指数也比较小，在这范围的化合物很少用，因为粘性大、展开慢，造成斑点扩散；另外，羟基的氢键作用力也有不利。调节Rf值的溶剂，从醋酸乙酯甲醇丙酮乙醇。挥发性物质也有很多带羰基、羟基的，但从它的挥发性就可以明白，分子间作用力不强，另外，母核与石油醚、正构烷和苯的结构差异小，估计更容易脱离硅胶吸附，更快进入溶剂中，而不需要通过提高展开剂的极性。,.,3.类极性大的小分子有机酸,结论：这类物质多数是苯乙烯母核的，这个结构的极性本身比较大，另外有酚羟基和羧酸基团，个别有多羟基配基。皂苷的展开剂差不多，极性大。注意甲酸通常指的是浓度85%左右的，含有水。,没食子酸：氯仿醋酸乙酯甲酸(5:4:1)、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸、异绿原酸。例如下面以苯丙烷为极性小部分，随着极性基团部分的增加，总体的极性就增加，展开剂极性也增加了。依次为肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸。相应展开剂分别为：正己烷乙醚冰醋酸(5:5:0.1)、苯冰醋酸甲醇(30:1:3)、氯仿甲醇甲酸（9:1:0.5）、石油醚乙酸乙酯甲酸（3:6:1）、醋酸丁酯甲酸水(7:2.5:2.5)。,.,4.类含氮有机物,结论分析：由于NH2硅醇基的作用很强，在强极性展开剂加有机酸、有机碱扫尾。对于极性化合物，使用正丁醇对斑点扩散影响较小，因为化合物和硅胶的作用强。,盐酸小檗碱：苯醋酸乙酯甲醇异丙醇浓氨试液(12：6：3：3：0.6)(氨蒸气饱和)或正丁醇冰醋酸-水(7:1:2)、麻黄碱：氯仿甲醇浓氨试液(20:5:0.5)或正丁醇冰醋酸水(8:2:1)甘草酸铵：醋酸乙酯甲酸冰醋酸水(15:1:1:2)。,.,五、TLC的通用显色方法,1、紫外照射法：方便、不破坏样品；2、碘蒸气法：通用性强，与紫外法结合灵敏度高于该两法单独使用；3、荧光试剂：制造荧光背景，使原来紫外下无荧光物质被鉴别，有荧光物质更明显；4、硫酸溶剂：对绝大多数有机物有效，但有破坏性。,.,六、薄层层析和纸色谱操作注意事项,1、点样点样器点样于薄层板上,一般为圆点，点样基线距底边1.01.5cm，样点直径一般不大于2mm,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。若因样品溶液太稀，可重复点样，但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样，以防样点过大，造成拖尾、扩散等现象，而影响分离效果。点样时必须注意勿损伤薄层表面,.,2、展开将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密封，待展开至规定距离（一般为815cm），取出薄层板，晾干，待检测。注：展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，密闭，一般保持1530分钟。,.,3、显色与检视供试品含有可见光下有颜色的成分可直接在日光下检视，也可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色，或加热显色，在日光下检视。有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在356nm紫外光灯下观察荧光色谱。对于可见光下无色，但在紫外光下有吸收的成分可用带有荧光剂的硅胶板（如GF254板），在254nm紫外光灯下观察荧光板面上的荧光猝灭物质形成的色谱。,.,理想的显色希望灵敏度高，斑点颜色稳定、斑点与背景间的对比度好，斑点的大小及颜色的深度与物质的量成正比，在样品组成并不完全已知的情况下，通用显色方法显得尤为重要，通常显色方法主要有：,1.紫外照射法：方法、不破坏样品2.碘蒸气法：通用性强，与紫外法结合灵敏度高于该两法单独使用3.荧光试剂：制造荧光背景，使原来紫外下无荧光物质被鉴别，有荧光物质更明显,.,四种体系展开剂,PE(60-90),EtAc/AcOH/n-Butanol/H2O2:1:1:1,EtAc/PE=1:2,EtAc/PE/AcOH15:5:1,展开剂,.,展开剂选择的大概原则,选择展开剂一般要用混合溶剂：一般要有一种对所要展开样品溶解度较大的溶剂，视样品的极性，再选用相应的体系。,极性小的用乙