DNA的复制特点(分子生物学)ppt课件

,蒋尚蓉,1,DNA复制的特点,1.半保留复制,2,3,Meselson和Stahl的重氮实验,4,5,DNA按53方向延伸,6,三个磷酸基团的强大斥力是dNTP难以靠近带有三个磷酸基团的5端空间位阻，带有三个磷酸基团的5端不能与模板配对,7,在出现错配时就要修复,如果是从35,切除错配的核苷酸后就剩下的5端就是单磷酸腺苷,就必须再加两个磷酸基团上去,成为三磷酸腺苷,这样就浪费了能量,8,DNA的半不连续复制,脉冲标记实验：被3H-T标记的新航打金农民太热空工业可以看见法合成的DNA片段任何额外刚刚过热而二个如果戈伟几乎都为1020s，是公司公司如果我国俄国人给我而即均10002000核酸大小核酸大小冈崎实验脉冲追踪实验：小片段已被连接成豆腐乳热热太热越狱兔突然虎头70120s的大片段,9,冈崎片段,DNA聚合酶具有5，3，外切酶活性，它可以及时切除复制起始合成的RNA引物，并填补切除引物的裂隙。,10,dUMP片段,形成原因：1、dUMP会掺入到DNA分子中去；2、细胞通过两道防线阻止了dUMP掺入到DNA分子的过程；3、第二道防线中的“尿嘧啶-N-糖苷酶”和“Ap内切酶”会将新合成的DNA链酶切成片段。,11,dUMP片段,dUMP掺入到DNA分子中的机制：1、细胞内存在dUMP和dTTP两种类似物，而DNA而我聚合酶又不能区分这两者，故会错将U当成T加入到合而我成的DNA新链中；2、新合成的链中会有C因氧化脱氨而成为U；,12,dUMP片段,细胞内的第一道防线：DNA复制的底物为:dNTP（即dATP,dTTP,dGTP,dCTP)；dUMP与dTTP类似，在错配的情况下可以掺入DNA中；由dut基因编码的dUTP酶能有效地将dUTP,dUDP分解为多dUMP，从而避免了dUTP作为底物而掺入到DNA分子中。,但仍有dUTP分子约以1/1200的概率逃逸分解掺入到DNA分子中,13,细胞内的第二道防线：,形成一个无嘌呤或碱基的Ap位点,Ap内切酶进一步将Ap位点酶解成缺口,14,dUMP片段,dUTP有1/1200的概率掺入到DNA中，则约1200个核苷酸就有一个dUMP被剪切的可能，被剪切后则会与冈崎片段相似大小的10002000核苷酸的片段。dut-(dUTP酶缺陷型)突变体由于dUMP掺入的概率增加，dUMP片段将变短。ung-(UNG酶缺陷型)突变体由于以掺入dUMP被切除的概率降低，dUMP片段将变长。,15,DNA复制的起点,复制开始时，用低放射-脱氧胸苷标记，将来感光还原的银密度低；再转移到含高放射-脱氧胸苷培养基，则继续合成区的银密度高；如果：单向复制，则密度为：高低双向复制，密度为：中间低，两侧高,放射自显影,16,17,结束谢谢倾听,18,由dut基因编码的dUTP酶能有效地将dUTP,dUDP分解为dUMP，从而避免了dUTP作为底物而掺入到DNA分子中。dUTP酶缺陷型突变体不能合成dUTP酶，故不能分解细胞中的dUTP。在存在dUTPase的情况下，仍有dUTP分子以1/1200的概率