2.第二章白细胞参数检查10.9

第二章血液一般检查,临床检验教研室李新岳,重点:掌握白细胞计数、红细胞计数、白细胞分类计数、血小板计数的原理、方法、评价、临床意义难点:细胞形态学,血液一般检查在临床上应用最广泛红细胞参数检查包括白细胞参数检查血小板参数检查,其中红细胞计数(RBC)血红蛋白测定(Hb)白细胞计数(WBC)白细胞分类计数(DC)等四项应用最多,旧称为血常规。,血液一般检验的方法有两种：手工法：用显微镜单项计数；血液分析仪法:多项计数,三分群血液分析仪结果报告单,WBC白细胞计数LYM#淋巴细胞绝对值LYM淋巴细胞百分比MID#中间细胞绝对值MID中间细胞百分比GRAN#中性粒细胞绝对值GRAN中性粒细胞百分比RBC红细胞计数Hb血红蛋白测定,HCT血细胞比容MCV红细胞平均体积MCH红细胞平均血红蛋白含量MCHC红细胞平均血红蛋白浓度RDW红细胞体积分布宽度PLT血小板计数MPV血小板平均体积PCT血小板比容PDW血小板体积分布宽度,三分群血液分析仪检测指标（21项）,白细胞直方图红细胞直方图血小板直方图,第二节白细胞参数检查,一、白细胞计数【显微镜法原理】用稀醋酸溶液，将血液稀释一定倍数并破坏红细胞，混匀充入计数池，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经过换算求得每升血液中的细胞数。,有二个计数池，每个计数池有9个大方格，每个大方格长、宽均是1mm，加特制盖片后高度为0.1mm。故1个大方格体积为0.1mm3。,计数板的结构,【计算】,WBC/L=10201064,四大格白细胞总数,=-109,20,四大格白细胞总数,4：算出每大格内平均白细胞数(0.1l)10：换算为1l的容积;20：稀释倍数106：换算成每升血中浓度,【结果报告】WBC：109/L,第二节白细胞参数检查,【方法学评价】1.显微镜计数法：为血液分析仪校准的基本方法（严格规范下）。简单易行，不需昂贵仪器。但影响因素多：微量吸管、计数板、细胞分布范围、人为因素等，重复性差。2.血液分析仪法：快速、标准化、精确性高、适合大规模人群检查。但某些人为或病理因素可干扰白细胞计数。,第二节白细胞参数检查,【质量控制】（一）计数误差1、技术误差：是由于操作不正规或使用器材不准确造成的误差。(1)器材：清洁、干燥、校准（2）标本要求：采血迅速,避免凝血,深度适宜,不能过度挤压，稀释度要准。(3)盖片放置方式：推式加盖玻片法,更能保证充液体积高度为0.1mm。,第二节白细胞参数检查,(4)充池要求:（5）细胞分布较均匀,若每大格间细胞数相差8个时，应重新充池计数,二次重复计数结果相差不10%。,【质量控制】（一）计数误差1、技术误差：,第二节白细胞参数检查,(6)对压线细胞的计数原则:数上不数下数左不数右,【质量控制】,第二节白细胞参数检查,（7）白细胞稀释液不能破坏有核红细胞,因此在病理情况下周围血出现有核红细胞时,可使白细胞数偏高,应进行校正：,【质量控制】,WBC/L(真值)=X-,100+Y,100,X:校正前白细胞数Y：分类100个白细胞时,遇到的有核红细胞数,第二节白细胞参数检查,2、固有误差：在每次计数时，不可避免产生的误差，包括：计数域误差吸管误差固有误差计数室误差,第二节白细胞参数检查,2、固有误差：1）计数域误差：由于每次充池后,细胞在计数池分布不可能完全相同所造成的误差,叫计数域误差。,一、白细胞计数,第二节白细胞参数检查,2、固有误差：1）计数域误差：细胞在计数室内随机分布符合Poisson分布，其细胞计数的标准差(s)为:s=m,m为重复计数均值,细胞计数域的变异系数（CV)为:CV(%)=s/m100%=m/m100%=1/m100%意义：CV可以通过计数细胞增多而变小。,第二节白细胞参数检查,2、固有误差：1）计数域误差：,当白细胞15.010/L可适当增加稀释倍数。,第二节白细胞参数检查,2、固有误差：1）计数域误差：,2）吸管、计数室误差：由于不精密所致。可通过计数次数越多，即使用吸管、计数室次数越多误差将减少。,第二节白细胞参数检查,2、固有误差：1）计数域误差：2）吸管、计数室误差：,3）固有误差总变异系数的数学公式：,1002+4.62+4.72CV=nbncnp,nb所数细胞总数nc计数板使用次数np吸管使用次数,第二节白细胞参数检查,3、生理状况的影响：运动、劳动、冷热水浴、酷热、严寒可出现一过性增高,一日内可差1倍；吸烟者平均比不吸烟者高30%,所以,最好是定时检查,一、白细胞计数【质量控制】（一）计数误差,第二节白细胞参数检查,（二）质量考核与评价【显微镜计数法】尚无完善考核评价1、经验控制：（1）与红细胞数相对比较，周围血红细胞/白细胞=500600:1,一、白细胞计数【质量控制】（一）计数误差,第二节白细胞参数检查,（二）质量考核与评价【显微镜计数法】1、经验控制：（2）将白细胞计数结果与血涂片中白细胞分布情况对照。,WBC（109/L）血片中WBC数/HP47247946101361013181020,第二节白细胞参数检查,【质量控制】2.两差比值评价法：即同一标本或同一病人在短时间内两次计数细胞数之差和两次细胞计数的标准差之比。r:为两差比值；r=X1、X2：两次镜下细胞数计分：质量得分100-（两差比值20.1）20.1:为失分系数评价：同变异百分数评价法。90分为A级(优)；80-89分为B级(良)；70-79分为C级(中)；60-69分为D级(及格)；60分为E级(不级格)。,3、双份计数标准差评价法：采用多个标本,每个标本均作双份计数,用每个标本的双份计数之差计算标准差,再求变异系数及质量得分。本法适合于个人技术考核和室间质控,第二节白细胞参数检查,【参考值】WBC：成人（4.010.0）109/L新生儿(1520)109/L6月2岁(1112)109/LGRAN：5070GRAN：（2.07.2）109/L（绝对值）,第二节白细胞参数检查,一、白细胞计数,第二节白细胞参数检查,白细胞是与红细胞相对而得名，是一种无色有核细胞，呈球形，直径725m。【原理】将血液制成血涂片用瑞氏染液染色根据各种白细胞形态特征分类计数100个白细胞即可求出各种白细胞的相对比值或百分率。,二、白细胞分类计,第二节白细胞参数检查,二、白细胞分类计数（DC）,(一)外周血正常白细胞类型中性粒细胞(N)70%粒细胞嗜酸性粒细胞(E)嗜碱性粒细(B)单核细胞(M)淋巴细胞(L)30%,白细胞分三类五种,第二节白细胞参数检查,【粒细胞特点】1）这类细胞均含有特殊颗粒，故名粒细胞。2）由于这些颗粒对染料亲和力不同，可分为中性、嗜酸性、嗜碱性三种颗粒。根椐细胞内所含特殊颗粒而对粒细胞命名。,二、白细胞分类计数,第二节白细胞参数检查,3)粒细胞因其成熟阶段不同，核形可分杆状和分叶核。,二、白细胞分类计数【粒细胞特点】,杆状核（st)：为不完全成熟细胞。数量5%核凹陷超过假设圆直径的3/4,核径最狭窄处大于最宽处的1/3。呈马蹄形、S、V、W、U形等，,分叶核：核径最狭窄处小于最宽处的1/3。,第二节白细胞参数检查,（二）外周血正常白细胞形态p58,二、白细胞分类计数,1.中性粒细胞（N）,2.嗜酸性粒细胞(E),3.嗜碱性粒细胞(B),三种粒细胞的鉴别-鉴别要点中性颗粒嗜酸性颗粒嗜碱性颗粒-颗粒数量大量大量量少,大小及均匀细小,均匀粗大,均匀粗大,大小不等分布排列均匀,弥散均匀,紧密不均匀,排列稀疏颗粒形状尘土状球状折光不规则块状掩盖核不不可掩盖核,致核形不清化学性质中性物质碱性物质酸性物质瑞氏染色粉红或桔红或深紫红或颜色淡紫红浅咖啡色紫黑色-,4.淋巴细胞(L),5.单核细胞(M),2,4,7,5,6,3,1,五种白细胞的比较细胞直径核/浆核形染色质胞浆N1015中杆状/分叶粗造不均颗粒量多、细小均匀、染粉红色、散在分布E1315小多分2叶粗造粗大、均匀、紧密排列，呈眼镜状有立体感、桔红色1012大分叶不清粗造少量粗大、大小不均、紫黑色、常盖于核上615大圆形/肾形粗造成块透明淡蓝色，无颗粒或少量大小不等紫红色的嗜天青颗粒1525中肾形、马碲疏松半透明淡蓝色、淡灰，形、有折叠网状有较多细小尘土样紫红色嗜天青颗粒，散在分布,第二节白细胞参数检查,（三）外周血异常白细胞形态1、异常中性粒细胞形态：p59中性粒细胞毒性变：见于严重细菌感染性疾病、中毒、大面积烧伤、恶性肿瘤等。,二、白细胞分类计数,中毒颗粒,中毒颗粒,毒性指数：计数100200个中性粒细胞，同时记录有中毒颗粒的细胞。有中毒颗粒的细胞数毒性指数-所数中性粒细胞总数,毒性指数=1为极度，示病情严重=0.75为重度=0.50为中度0.5109/L为增高轻度增高0.5.5109/L中度增高.55109/L重度增高大于5109/L见于下列情况：(1)寄生虫病：可达10%或更多血吸虫、肝吸虫、肺吸虫、包虫、钩虫、丝虫增高蛔虫,（2）变态反应性疾病：通常12109/L，偶尔更高。哮喘轻度增高、坏死性血管炎平均8109/L药物过敏、寻麻疹、血管神经性水肿、血清病、异体蛋白过敏等嗜酸性粒细胞轻度或中度。,嗜酸性粒细胞直接计数,（3）某些皮肤病：如湿疹、剥脱性皮炎、天庖疮、银屑病轻度或中度,(4)血液病:慢性粒细胞白血病(可达10%以上,为幼稚型)。多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、脾切除等有不同程度增高。嗜酸性粒细胞白血病(可90%,为幼稚型)。淋巴瘤(在10%左右)。,嗜酸性粒细胞直接计数,(5)某些恶性肿瘤:肺癌,(6)猩红热是急性传染病中维一使E,(7)其他:风湿性疾病、脑垂体前叶功能、肾上腺皮质功能、过敏性肾炎,嗜酸性粒细胞直接计数,2、减少：(1)长期使用肾上腺皮质激素,(2)急性传染病的早期,如伤寒、副伤寒。,(3)大手术、烧伤。,嗜酸性粒细胞直接计数,3、嗜酸性粒