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文档简介
园区高二生物微生物的实验室培养(一)学案执教老师:王丽【学习重点】1微生物培养的培养基成分、种类及功能2微生物培养常用的无菌技术及常用方法3制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤【学习过程】一、培养基种类和功能1.培养基(1)概念:人们按照微生物对_ _的不同需求,配制出供其_ _的营养基质。(2)营养构成:一般都含有水、_ _、_ _和无机盐。此外还要满足微生物生长对pH、_ _ 以及_ _的要求。(3)种类:按照物理性质一般可分为_ _培养基和_ _培养基。(4) 固体培养基需要加入凝固剂,如_ _。(5) 微生物培养基的配制原则:目的要明确,营养要协调,PH要适宜。2.培养基成分营养物质作用主要来源碳源提供 元素(有机碳源还能提供 )无机碳源: 、NaHCO3等 有机碳源: 、脂肪酸等。氮源提供 元素,主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物分子态氮、氨、铵盐、硝酸盐、尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子微生物生长不可缺少的微量有机物,一般是酶和核酸的组成成分。主要包括维生素、氨基酸和碱基等无机盐细胞内的组成成分,生理调节物质,某些化能自养菌的能源(如NH3),酶的激活剂,包括大量元素和微量元素培养基、大气等水在生物体内含量很高,在低等生物内含量更高培养基、大气、代谢产物等知识拓展:微生物最常用的碳源是糖类,尤其是葡萄糖;最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。对异养微生物来说,含C、H、O、N的有机化合物既是碳源,又是氮源、能源。有些培养基不需要添加特殊营养物质,生物自身能合成,如大肠杆菌能合成某些维生素,作为特殊营养物质。3、培养基的种类:划分标准培养基种类特点用途物理性质 培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂,如琼脂观察微生物的运动、分类鉴定 培养基微生物的分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种化学成分 培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产 培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成) 、 用 途 培养基允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他微生物生长培养、分离出特定微生物,如培养酵母菌和霉菌,可在培养基中加入青霉素;培养金黄色葡萄球菌,可在培养基中加入高浓度食盐 培养基根据微生物的代谢特点,在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物,如用伊红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有,菌落呈深紫色,并带有金属光泽)4、选择培养基的种类及应用选择培养基的种类应用举例在基本培养基中加入某种化学物质加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌;培养金黄色葡萄球菌,可在培养基中加入高浓度食盐改变基本培养基中的营养成分缺乏 时可以分离出固氮微生物; 作为唯一碳源时,可以分离出消除石油污染的微生物改变微生物的培养条件将培养基放在高温环境下培养,可以得到耐高温的微生物二.无菌技术1.消毒特点:使用较为 的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。常用方法: 消毒法、 消毒法、化学药剂消毒法。2.灭菌特点:指使用强烈的理化因素杀死物体内外 ,包括芽孢和孢子。常用方法: 灭菌、 灭菌、 灭菌。3.三种常用灭菌方法的比较灭菌方法适用材料或用具灭菌条件灭菌时间灼烧灭菌 、 或其他金属工具酒精灯火焰的充分燃烧层直至烧红干热灭菌玻璃器皿(吸管、 )和金属用具等干热灭菌内, h h高压蒸汽灭菌 等 高压蒸汽灭菌锅内 kPa, min min三.大肠杆菌的纯化培养制备牛肉膏蛋白胨固体培养基:最常用的细菌培养基:_ _培养基。配制步骤:计算 _溶化_ _倒平板。(牛肉膏比较粘稠,用玻棒挑取,放在称量纸上称量;因牛肉膏和蛋白胨容易吸潮,故称取动作要迅速,并及时盖上瓶盖),具体制备过程如下表:项目要求操作计算根据配方比例计算配制100ml的培养基所需各种 成分的用量 准确 称取放称量纸上称量动作迅速,及时盖瓶盖 防止琼脂糊底牛肉膏连同称量纸一起加水、加热待牛肉膏溶化后取出称量纸添加蛋白胨、氯化钠、琼脂玻璃棒不停的搅拌补加蒸馏水至100ml 杀死芽孢和孢子培养基高压蒸汽灭菌培养皿干热灭菌 待培养基冷却至 在酒精灯火焰旁操作锥形瓶的瓶口要迅速通过火焰左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将培养基倒入培养皿(约15-20ml),左手立即盖上培养皿盖。待培养基凝固,将平板倒置,使皿盖在下,皿底在上。主要成分一般都含有水、_ _ 、_ _ 和无机盐。【知识建构】按物理性质一般可分为_ _培养基和_ 培养基。按用途一般可分为_ _培养基和_ 培养基。按化学成分一般可分为_ _培养基和_ 培养基。培养基微生物的实验室培养种类 消毒法、 消毒法、化学药剂消毒法。无菌技 术 灭菌、 灭菌、 灭菌。配制步骤:计算 _溶化_ _倒平板。制备牛肉膏蛋白胨固体培养基:【学习测评】水平1:1下列有关微生物培养与应用的说法正确的是()。A天然培养基是指直接取自自然界不需加工的培养基B接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理C大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段D分离分解尿素的细菌时,尿素是培养基中唯一的氮源和碳源2微生物培养过程中,要十分重视无菌操作,现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作,防止杂菌污染,请分析下列操作中错误的是()煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢 接种操作要在酒精灯火焰附近进行无菌繁殖脱毒苗时,植物的外植体要进行消毒培养基要进行高压蒸汽灭菌加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌A B C D3关于微生物营养物质的叙述中,正确的是 () A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量水平2:1可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是()A以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂B以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂C以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹试剂D以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂2下列关于微生物的培养和分离的叙述中,不正确的是() A细菌能在液体培养基中以二分裂方式迅速扩增 B噬菌体或大肠杆菌可在蛋白胨培养基中增殖 C灭菌的目的是消灭与培养菌竞争的杂菌 D稀释涂布法分散细菌得到单菌落的效果更好3. 氯苯化合物是重要的有机化工原料,因其不易降解,会污染环境。某研究小组依照下列实验方案(图1)筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌。培养基配方如表1。 图1 (1)配制号固体培养基时,除添加号液体培养基成分外,还应添加1%的_。 (2)培养基配制时,灭菌与调pH的先后顺序是_。 (3)从用途上来说,号培养基和号培养基分别属于_培养基和_培养基。在号培养基中,为SP1菌提供氮源的成分是_。 (4)在营养缺乏或环境恶劣时,SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体,这种休眠体被称为_。 (5)将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的号培养液中培养,得到生长曲线(如图2)。从图2可知,SP1菌在_培养条件下最早停止生长,其原因是_。水平31用来判断选择培养基是否起到了选择作用,需要设置的对照是()A未接种的选择培养基B未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D接种了的选择培养基2(多选题) 不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中,不正确的是()A氮源物质为该微生物提供必要的氮素B碳源物质也是该微生物的能源物质C无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D水不是该微生物的营养要素之一3有些细菌可分解原油,从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。请回答下面的问题。(1)在筛选过程中,应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲,该培养基属于_培养基。(2)为了筛选出高效菌株,可比较单菌落周围分解圈的大小,分解圈大说明该菌株的降解能力_。(3通常情况下,在微生物培养过程中,实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_和_。无菌技
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