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文档简介

实验四人类G显带染色体制备技术,一、实验目的1、掌握染色体常规片的制备技术2、掌握镜下各号染色体G带带型。3、了解人类染色体G显带技术方法,二、实验原理（略）人们利用不同的方法和染料处理染色体标本后，可使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同的带纹，称为显带技术。上世纪70年代以来，显带技术得到很大发展，人染色体经胰蛋白酶或EDTA（乙二胺四乙酸二钠）等试剂处理后，再用Giemsa染料染色，染色体上出现深浅交替的横纹，即染色体的G带。在众多的显带技术中（Q带、G带、C带、R带、T带、N带），G带是应用得最广泛的一种技术。因为G显带技术具有设备要求低、试剂便宜、G显带标本稳定而易于保存及观察方便等优点,三、实验用品1、器械：恒温水浴锅、60ml立式染色缸、吸管、滴头、电吹风。2、试剂：002胰酶溶液、04酚红溶液、1NNaHCO3、10%Giemsa染液、生理盐水。3、标本：外周血培养按常规法制作染色体标本（白片）。,四、实验内容（一）人类染色体常规片制备技术（二）G显带标本制备1、外周血培养按常规法制作染色体标本，自然老化37天左右。2、将0.02胰蛋白酶溶液倒入染色缸中，加入0.4酚红溶液2滴，并以1NNaHCO3调节PH7.0左右，使颜色为橙色。混匀后，置于37水浴锅恒温。3、将经过老化的标本片投入0.02胰蛋白酶溶液中消化3060秒。4、取出已消化的标本片，立即投入磷酸缓冲液中，冲洗残留的胰酶。5、用10%Giemsa染液染色6-10分钟。6、自来水冲洗，凉干或电吹风吹干后镜检。,低倍镜观察标本片,寻找分散良好染色体,转到油镜下观察,先计数染色体总数,识别染色体长、短臂及随体,绘制染色体线条图,标明1、2、3、16号，其余注明组别和判断核型性别。,（二）、镜检,正常人染色体标本形态观察,结果分析：结果描述：分析：1、为什么没有染色体、染色体不分散？2、为什么染色体不显带、染色体发毛？,（二）、镜检先在低倍镜下选择分散良好、长度适中的中期分裂相，然后转至油镜下观察G带带型。选择带纹清晰的分裂相进行分析，并在实验报告纸上绘出快速线条分裂相，标明各条染色体序号。,五、注意事项1、G显带的好坏，首先取决于染色体本身制片的质量，染色体长度要适中，以早中期为宜，且中期相丰富、分散好，无胞浆背景。若染色体边缘发毛，为显带过头，若染色体上未出现带纹，则为显带不足，根据具体情况调整显带时间。2、标本片龄不宜太长，片龄越长，细胞对胰酶处理的抵抗性越
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