马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基配制

实验一马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基配制,一、食用菌菌种种类人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。1）母种（一级菌种）：用孢子分离或组织分离等培育的菌丝体称为母种。2）原种（二级菌种）：把母种扩大到木屑、棉籽壳等为主的培养料上的菌种称为原种。3）栽培种（三级菌种）：由原种扩大培养成为生产上使用的菌种称为栽培种。4）菌种：实质上就是经过人工培养并进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。,二、食用菌的制种程序,组织分离,接种母种（一级）,接种原种（二级）,接种栽培种（三级）,种菇,孢子分离,经过这样三级培养，食用菌菌丝数量大大增加。一般1支试管菌种可繁殖46瓶原种，每瓶原种又可扩大繁殖60100瓶栽培种。,培养,培养,母种,原种和栽培种,三、菌种生产常用的设备和用具,1、接种设备接种室接种箱超净工作台,超净工作台,2、灭菌设备,1）手提式：容量小，适于斜面试管及玻璃器皿等；2）立式：容量大，投资大；3）卧式：容量大，投资大；4）家用24或26cm压力锅：母种、原种培养基。,高压蒸气灭菌锅,优点：省时、省燃料、效果好,2）、3）一般在菌种场或研究所应用。,三、菌种生产常用的设备和用具,灭菌设备,高压蒸气灭菌锅,2、灭菌设备,常压灭菌锅,目前农村生产栽培种的必备设备，实际上是一种大型蒸笼式煮灶。底部为铸铁大锅，上部为圆形木桶，桶内装数层供放培养基的格架。桶盖装有活络搭及密闭的橡皮圈，由于锅内温度最高是100，所以灭菌时间需维持1012h，才能达到灭菌效果。,三、菌种生产常用的设备和用具,培养室生化培养箱,3、培养设备,三、菌种生产常用的设备和用具,4、培养菌种的容器,母种：试管，常用规格20180200mm，18180mm等。,规格有：12153035cm，173545cm,三、菌种生产常用的设备和用具,菌种瓶,5、接种工具,移植菌种于培养基上的工具称接种工具，主要有以下几种：接种针、环、刀、钩、铲、锄、枪等；,三、菌种生产常用的设备和用具,70%酒精：一般用于手、种菇表面消毒；0.1%升汞：常用于玻璃器皿、非金属器械及种菇表面消毒；0.1%KMnO4：一般用于用具、器皿消毒；,6、常用的消毒药品,三、菌种生产常用的设备和用具,5%石炭酸：喷洒墙壁、地面及擦洗桌面等，也可用来苏尔代替；2%来苏尔、新洁尔灭：用法同上；甲醛（福尔马林）：用于菇房和接种箱等空气消毒；方法：关闭门窗消毒，自行气化；用量：10ml甲醛5gKMnO4立方米。,6、常用的消毒药品,三、菌种生产常用的设备和用具,四、母种生产技术,食用菌母种培养基的种类繁多，由于不同营养类型的食用菌对营养物质的要求不同，所以，在培养不同食用菌母种时，应选择适宜该菌种的培养基。母种培养基要求营养丰富、完全、氮源、维生素的比例应高。现将食用菌常用的母种培养基列举如下：,（一）母种培养基马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）马铃薯200g、葡萄糖（或蔗糖）20g、琼脂20g、H2O1000mL、pH6.5。适用于一般食用菌母种分离与培养，但草菇、猴头菌等在此培养基上生长不良。,四、母种生产技术,综合马铃薯培养基马铃薯200g、葡萄糖（或蔗糖）20g、KH2PO42g、MgSO40.5g、维生素B110mg、琼脂20g、H2O1000ml、pH自然。适合培养草菇、猴头菌、灵芝及各种食用菌菌种分离、保藏。,四、母种生产技术,胡萝卜葡萄糖琼脂培养基胡萝卜200g、葡萄糖（或蔗糖）1820g、琼脂20g、H2O1000ml、pH自然。,四、母种生产技术,PDA培养基配制方法马铃薯（去皮、去芽眼）切成片（玉米大小）称取200g1000mLH2O煮沸15-20min双层纱布过滤取滤液并补足1000mL琼脂熔化其它营养物质调节pH（用HCl或NaOH）分装试管塞上棉塞捆扎灭菌（高压蒸气灭菌15-30min）制成斜面检查灭菌效果（即2830培养23d）,（3）作