肠道致病菌的分离鉴定应依赖肠道致病菌分离鉴定的实验教学质量评价

肠道致病菌的分离鉴定应依赖肠道致病菌分离鉴定的实验教学质量评价 关键词：肠道致病菌；实验教学；考核标准；教学质量 ：R378.2 文献标志码：B ：1008-2409(xx)03-0376-03 肠道致病菌的分离与鉴定是临床检验专业学生必须掌握的一项技术，是教学大纲要求熟练掌握的重要内容。该实验技术程序较为复杂，学生不容易掌握。因此，在实验教学时必须充分准备，科学设计，严格操作，客观评价。为此，本教研室建立了一套实验与考核方法，并尝试制定考核标准，促进肠道致病菌实验教学质量的不断提高。 1 实验材料与试剂 1.1实验材料 正常粪便+伤寒沙门氏菌为1号标本；正常粪便+志贺氏菌为2号标本。 1.2培养基 SS琼脂、麦康凯琼脂、KIA培养基、MIU培养基、赖氨酸与鸟氨酸脱羧基培养基、甘露醇微量发酵管。 1.3试剂 革兰氏染液，生理盐水，靛基质试剂，AFO多价O2因子，O7、O9、Ha、Hb因子血清，VP试剂，志贺氏多价诊断血清。 1.4器材 无菌操作台，显微镜，酒精灯，接种环，载玻片，培养箱，试管。 2 实验设计与操作步骤 2.1实验流程 制定考核标准实验用品的准备标本编号实验分组实验实施实验结果与现象记录实验小结及分析考核与评价。 2.2实验分组 xx年全班总人数48人，分6小组，每组8人。 2.3实验与操作 分离培养：13组取1号标本，46组取2号标本。每人取SS琼脂平板、麦康凯琼脂平板和血平板进行细菌划线接种，置37温箱，孵育1824h后观察结果。 生化反应与形态观察：从SS琼脂平板或MAC平板上挑取可疑菌落一无色半透明菌落，涂片、染色，油镜下观察染色细菌(正常情况下为G-杆菌)。 血清学鉴定：从SS琼脂平板或麦康凯琼脂平板上挑取无色半透明中等大小菌落，接种在KIA培养基、MIU培养基和甘露醇鸟氨酸培养基中，置37温箱孵育，次日观察结果。 2.4实验结果记录 (1)准确记录号标本在SS琼脂平板和血平板上的菌落特征。(2)客观如实记录号标本在KIA培养基中(斜面、底层、产气、H2S、动力等)现象及特征；记录号标本对MIU氨酸、赖氨酸、甘露醇的微量管中的生化反应特征。(3)记录单一菌落的血清学鉴定结果(包括标准诊断AHO多价志贺氏多价血清和O2、O7、O9、Ha、Hb因子血清检测结果等)。 3 结果分析与评价 3.1致病菌分离的结果 xx年学生分离致病菌结果见表1。 3.2实验考核标准与评价 实验考核标准见表2。 对xxxx年对253名学生在实验与考核标准制定前、后的成绩进行统计分析，平均成绩用(xs)，采用t检验；考核成绩在85分以上为优良，优良率采用X2检验。采用PEMS 3.1统计软件进行统计分析，检验水准a=0.05。结果见表3和4。 4 讨论 肠道致病菌是引起腹泻、呕吐的主要原因，也是危害食品安全的主要因素。因此，快速、有效肠道致病菌感染的实验室检测方法是肠道致病菌早期诊断、控制的关键。目前，常规的致病菌分离、鉴定方法是基于多种致病菌间的形态、代谢和生化指标的不同，利用细菌的产酸、产气以及细菌代谢方面等特性进行选择性培养，再在选择性培养的基础上，根据血清学进行鉴定。肠道致病菌一般为G-无芽孢的短杆菌，在麦康凯琼脂上，菌落形态与普通大肠杆菌相似。在含山梨醇的麦康凯琼脂上，菌落无色、网整、稍混、湿润、不溶血，直径约为0.5mm。在绵羊血琼脂上，菌落呈灰白色、网形、稍凸、湿润、不溶血。掌握肠道致病菌的分离、鉴定技术对腹泻、呕吐等症状的疾病诊断非常重要，也是临床检验专业教学的重点。实验教学中，少数学生没有分离出致病菌，主要有如下原因：平板划线不过关，在平板上无单个菌落。不能准确挑取可凝菌落。挑取了混有2个以上菌落，没有挑取单个菌落，生化反应不典型。不能正确使用诊断血清。 肠道致病菌的分离、鉴定是分步进行的，哪一环节出了问题都不能检出致病菌。因此，必须制定实验和考核标准