HIV感染和AIDS的实验诊断

HIV感染和AIDS的实验诊断,HIV感染及AIDS的实验诊断,揭开AIDS历史的第一页MMWRJUNE5,1981/VOL.30/NO.21MORBIDITYANDMORTALITYWEEKLYREPORT,爱滋病是一种有病毒引起的全身性传染病,其定义是血液中查到人类免疫缺陷病毒抗体或其他相关的病毒学指标,机体抵抗感染和疾病的免疫机能受到破坏，而发生的一系列相应症状HIV感染者的定义是血液呈HIV阳性而无症状的感染者。,获得性免疫缺陷综合征(Acquiredimmuno-deficiencySyndrome,AIDS),1.发展简史1983年,法国巴斯德研究所分离到一种新的逆转录病毒，命名为LAV。1984年美国国立癌肿研究所分离出命名为HTLV-的病毒。同年，美国加州大学分离出AIDS相关病毒（AIDSRelatedVirus,ARV）.1986年，非洲西部发现了另一种病毒国际微生物学会及病毒分类学会统一命名为HIV。,一）生物学特征,2.HIV的结构与蛋白质功能HIV呈球形或卵形，直径为100-120nm，双层结构。核心由两个相同拷贝的RNA及蛋白质、反转录酶、核糖核酸酶及整合酶组成，核心外为病毒衣壳，20面体立体对称，有蛋白质（P17/P18、P24/P25）。最外层是膜蛋白。包膜上有刺突，含糖蛋白gp120，在双层脂质中有gp41。,一）生物学特征,HIV病毒颗粒及其结构蛋白和其他毒粒蛋白,人类免疫缺陷病毒HIV,HIV基因编码的产物及其功能,HIV结构蛋白包括:核心蛋白(gag),包膜蛋白(env)聚合蛋白(pol)。核心蛋白包括:P17位于核蛋白与壳层之间的基质上，包被于包膜蛋白的内部。P24和P15包被于内部核酸外围核衣壳主要为P24。包膜蛋白为糖蛋白:gp160是前体分子，在感染初期产生，然后分解成gp120和gp41。聚合酶蛋白包括:P66、P51和P31，聚合酶抗原位于病毒的核区内，与病毒核酸紧密相关。其功能为转录RNA为DNA；整合病毒DNA到宿主细胞的DNA上和切割前体分子使之成为有活性的小分子。,HIV的结构蛋白,HIV-1分为M、O、N三组，M组包括A、B、C、D、E、F、G、H、I、J共10个亚型，加上O、N型共12个亚型。HIV-2至少有A、B、C、D、E、F等6个亚型。,3.HIV的病原特异性：,HIV亚型,A,B,C,D,E,F,G,H,I,J,O,HIV2,SIV,Adaptedfrom:J.LevyHIVandthePathogenesisofAIDS,HIV1,HIV-1亚型全球分布,B,a,c,d,f,o,A,O,d,g,h,B,a,d,e,o,B,B,B,B,B,f,c,B,e,B,C,A,D,e,C,a,d,C,a,b,e,C,E,b,E,b,B,e,c,B,e,B,a,c,d,g,h,B,i,UNAIDSDec.1996,非洲及亚洲部分地区有重组株病毒。,HIV的亚型特点,有相对优势亚型同一亚型差异很大亚型内的变异水平估算存在时间不同亚型传播途径和致病性不一不同亚型对抗-HIV药物引起耐药不同亚型重组,属于逆转录病毒，复制速度快可感染人体各种细胞，造成多器官损伤破坏具有调节免疫系统功能T4淋巴细胞在血液、淋巴液、精液、阴道分泌液和乳汁中其抗体无保护作用对外界抵抗力弱（低于乙肝病毒）,人类免疫缺陷病毒,1.艾滋病成为全球第四大杀手，传染性疾病的第一大杀手夺取了超过280万人的性命；2.截止2008年，15-49岁HIV患病人数已有4000万，其中40%是15-24岁的青年.(有120万儿童)3.亚洲人感染艾滋病的增长速度最快，尤其是中国和印度；4.HIV的研究仍跟不上其破坏的速度；5.治疗性控制是可以达到的。,二）流行病学,全球爱滋病感染人数及感染途径,根据联合国爱滋病委员会和世界卫生组织统计，全球每年新感染爱滋病带毒者410万。(24h全球增加16000感染者)因HIV死亡的人数超过了280万,已超过了肺结核(病死率200万)和疟疾(100万).,1.西方国家HAART的使用，患病率和病死率在下降，而发展中国家AIDS形势严峻；2.以注射吸毒和性传播(以异性间的传播为主)；3.不洁的血液采集;4.女性病例上升；母婴传播5.儿童病例增加（2个月2重组或多肽间接42-45d3重组+多肽夹心22d4抗原+抗体夹心16d(抗原5pg)5基因扩增法，基因芯片6-11.5d,HIV抗体筛查试剂,1.MurexHIV1.2.O：第三代抗体试剂的双抗原夹心法模式两步法酶标法测试，可以用来检测HIV抗体I型，II型和O亚型。手工/自动化酶标仪检测，用血清/血浆样本。,MurexHIV-1.2.O.夹心模式,板底,样本,结合物,抗原包被（1）,辣根过氧化物酶标记抗原（2）,模式：双抗原夹心法。,MurexHIV-1.2.O抗原,HIV-1env,POD,POD,POD,HIV-O,HIV-2,多肽抗原,重组抗原,板,结合物,CDSD,POD,HIV-1p24,P41/p36,前带/后带效应的机制,两步冲洗法-可避免此效应,低浓度的结合物,高浓度的结合物,HOOK效应的机制,Ag变构是二步夹心酶免出现钩状HOOK的原因被测抗原如具有多重决定族与亲和性高于包被抗体的酶标抗体发生交叉重叠结合，由于立体效应和互相挤压，Ag分子发生构象改变而从包被抗体上脱落，造成反应信号下降,2.POCT在艾滋病毒检测中的应用,快速DetermineHIV1/2O抗体检测,第三代抗体试剂的双抗原夹心法模式可以用来检测HIV抗体I型，II型和O亚型。可用手指/静脉血，15分钟出结果，可用血清/血浆/全血样本结果可密封保存。,快速试剂研制的背景,就地检测（POCT）概念：急诊-手术，紧急输血，事故紧急检测。（医护人员和病人的保护）筛查概念：母婴筛查，就职，移民，性及吸毒犯罪人员体检等-简单易用。日常检测：大，中，小型实验室，及极少量HIV样本实验室，偏远地区，实验室条件或设备不齐，外出检测-方便携带，使用。结果可保存。,灵敏度排名及分数,3.第四代试剂及抗原有关的试剂,HIV抗原/抗体联合试剂：MurexHIVAg/Ab：第四代试剂大大提高灵敏度的筛查试剂，进一步缩短了检测“窗口期”。RIADeltaHIVAg/Ab：放免HIV抗原/抗体联合试剂。HIV抗原试剂：MurexHIV抗原单克隆试剂：临床上只用于HIV抗原检测以早期检测样本，或观察HIV疾病进程。MurexHIV抗原确认试剂,确认抗原试剂阳性样本。,HIV标记物,CDCgroupI,CDCgroupII/III,CDCgroupIV,HIVAg/RNA,IgM,IgG(env),IgG(p24),HIVAg/RNA,第一代,第二代,第三代,第四代,抗原补充,4.HIV特殊试剂,HIV抗体WB确认试剂：为唯一一种经典和全球公认的抗体确认试剂，2.2版本包含有极早期血清转换片段，便于早期样本的确认。LCxHIV核酸物质定性/定量分析：（LCR和PCR技术）用于HIV病人遗传物质检测，可用于部分确认，和病人治疗监测。,WesternBlot分析HIV蛋白,Westernblot原理,HIV病毒核酸分析和血清学免疫测定比较,血清学免疫测定核酸分析,感染后天数,天,血清HIV抗体,核酸分析,5.自身红细胞凝集试验原理,双功能试剂：抗RBC,gp120简单，快速，微量，不需分离血清有假阳性,6.HIV亚型分析；HIV变异的识别；7.细胞因子的测定；8.PCR追踪HIV自然感染史。,HIV的实验诊断,世界爱滋病日,1988年月将每年的月日定为世界爱滋病日，号召世界各国和国际组织在这一天举办相关活动，宣传和普及预防爱滋病的知识在加拿大举行的第16届国际爱滋病大会,美国前总统克林顿和微软公司比尔.盖茨均出席会议.”时不我待”爱滋病会议永远是政治会