分离土壤中分解尿酸的细菌-实验报告_第1页
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分离土壤中分解尿素的细菌和计数 制作：邹霖1.实验目的：从土壤中分离出能够分解尿素的细菌，计数2.实验原理：A.培养基中加入唯一氮源-尿素，能分解尿素的细菌自身能够合成脲酶，能够分解利用尿素中的氮元素，从而能够生存繁殖；不能分解尿素的细菌的繁殖受到抑制，从而达到分离出土壤中能分解尿素的细菌的作用。B.使用酚红鉴定尿素是否被分解.CO(NH2)2分解产生NH3使溶液显碱性.如果尿素被分解，则酚红会显红色，C.分解原理.CO(NH2)2+H2O=脲酶=CO2+NH3 D.稀释涂布平板法. 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释浓度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。E.计数菌落，一个或几个细菌可以繁殖为一个肉眼可见的菌落（计数结果低于实际细菌数）3.提出问题：尿素分解后NH3的产生是否会影响实验？4.做出假设：尿素分解后NH3的产生会影响实验。5.实验材料用具：超净工作台、取样铲、试管、锥形瓶、恒温培养箱、培养皿、高压蒸汽灭菌锅、酒精灯、酒精、无菌水、地面以下3-8CM处的土壤、培养基A（磷酸二氢化钾 1.4g 磷酸氢化二钠 2.1g 七水合硫酸镁 0.2g 葡萄糖10g 尿素1g 琼脂 15g）培养基B（牛肉膏蛋白胨培养基） 涂布器、干热灭菌箱、烧杯、胶头滴管6.实验步骤： 1.对实验用具消毒灭菌；按配方称取上述物质，将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000ml。 2.配置好培养基后，将培养基A.B倒置都放入恒温培养箱中培养1d，取出后观察是否产生了菌落，若无，则继续下一步实验。若有，重做(_) 3.系列稀释：将分别盛有9ml水的5只试管和90ml水的1个锥形瓶灭菌，并按1010的顺序编号 锥形瓶编号10。将10g符合条件的土壤放入锥形瓶中，震荡锥形瓶，用移液管吸取1ml菌液，注入标有10的试管中，用手轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。以此类推，直到完成最后一只试管的稀释。（注意：移液管需要经过灭菌，操作时，试管口和移液管应在离火焰12cm处） 4.涂布平板：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中，分别取10. 10 . 10中的少量菌液，分别各滴加到3个培养基A（总计9个）的表面，注明培养基种类，培养日期以及平板上培养样品的稀释程度，取少量无菌水滴加到1个培养基中作为空白对照组，取少量菌液滴加到培养基B中（判断选择培养基是否起到了选择作用），将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8-10S。用涂布器将菌液均匀的涂布在每个培养基表面（每次涂布前都必须用酒精灯灼烧）涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。 5.将培养基倒置并放入恒温培养箱中培养1-2d 6.相同稀释程度的3个培养基统计其菌落数（30-300） 取平均值。 7. 实验结果：1.空白对照组无菌落。 2.培养基B上的菌落数目
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