肺炎链球菌的分离和鉴定ppt课件VIP

肺炎链球菌的分离和鉴定,1,肺炎链球菌的分离和鉴定,肺炎链球菌的分离和鉴定,2,概述,肺炎链球菌（S.pneumoniae），俗称肺炎球菌（pneumococcus）。经常寄居于正常人的鼻咽腔中，一般不致病，只形成带菌状态。当机体免疫力下降时才致病。尤其在呼吸道病毒感染后或婴幼儿、老年体弱者易发生肺炎链球菌性肺部感染。,肺炎链球菌的分离和鉴定,3,肺炎链球菌不产生外毒素，主要靠荚膜侵袭力致病。肺炎链球菌主要引起人类大叶性肺炎，肺炎后可继发胸膜炎、脓胸，也可引起中耳炎、乳突炎、副鼻窦炎、支气管炎、心内膜炎、腹膜炎、关节炎、脑膜炎和败血症等。,肺炎链球菌的分离和鉴定,4,细菌学检验不仅对疾病的病原学诊断有重要价值，同时对临床治疗的药物选择也具有十分重要意义。,一、生物学性状,肺炎链球菌的分离和鉴定,6,1.形态与染色,肺炎链球菌革兰染色呈阳性。球形或矛头状，成双排列，少呈链状。在组织中可形成荚膜（人工培养荚膜逐渐消失），无鞭毛及芽孢。,肺炎链球菌的分离和鉴定,7,肺炎链球菌的分离和鉴定,8,肺炎链球菌的分离和鉴定,9,肺炎链球菌的分离和鉴定,10,2.培养特点,（1）培养基肺炎链球菌对营养要求较高，需采用质量好的哥伦比亚血液平板（5马血或羊血）。,肺炎链球菌的分离和鉴定,11,（2）分离培养,1）标本处理及时将采集标本接种到适当的培养基上是提高分离率的前提。因为，肺炎链球菌对干燥、对寒冷的抵抗力均较弱，在标本离开机体暴露于外界复杂的环境中，其存活率十分低，不及时接种适当培养基是导致分离率低的主要原因。,肺炎链球菌的分离和鉴定,12,2）选择性分离培养基,培养基中添加5g/ml庆大霉素有利于肺炎链球菌的分离。,肺炎链球菌的分离和鉴定,13,3）培养环境,510CO2、35培养2448h。,肺炎链球菌的分离和鉴定,14,（3）肺炎链球菌的菌落形态,在营养丰富的培养基上，肺炎链球菌形成扁平、中间有凹陷的典型菌落，少数菌可呈粘液型菌落。,肺炎链球菌的分离和鉴定,15,肺炎链球菌的分离和鉴定,16,肺炎链球菌的分离和鉴定,17,肺炎链球菌的分离和鉴定,18,肺炎链球菌,肺炎链球菌的分离和鉴定,19,肺炎链球菌,肺炎链球菌的分离和鉴定,20,肺炎链球菌的分离和鉴定,21,肺炎链球菌,肺炎链球菌的分离和鉴定,22,3.抗原结构,（1）种属特异性抗原：为菌体多糖抗原，存在于肺炎链球菌的细胞壁。（2）型特异性抗原：是存在于肺炎链球菌荚膜中的一种多糖多聚体，可溶于水，据此抗原可将肺炎链球菌分为、等个型，其中、型致病性最强。（3）菌体核蛋白抗原：存在于菌体深部，为蛋白质，无特异性。,肺炎链球菌的分离和鉴定,23,二、肺炎链球菌鉴定,肺炎链球菌的鉴定，主要应与甲型溶血性链球菌鉴别。其中以胆汁溶菌试验、菊糖发酵和optochin试验最为常用。必要时可作荚膜肿胀试验或小鼠毒力试验加以鉴别。在上述试验中，肺炎链球菌均应阳性，而甲型溶血性链球菌为阴性。也可用特异性单克隆乳胶或自动化仪器等相应鉴定卡作鉴定。,肺炎链球菌的分离和鉴定,24,肺炎链球菌鉴定要点,革兰阳性双球菌，矛头状，不呈链；血平皿菌落呈草绿溶血，湿润，菌落表面无小白点；培养时间长出现脐窝状；胆汁溶解试验阳性；荚膜肿胀试验阳性；乳胶单克隆抗体凝集阳性。,肺炎链球菌的分离和鉴定,25,1.溶血性检查,肺炎链球菌在厌氧或二氧化碳环境中溶血能力大大加强，草绿色溶血环很大，可与其他草绿色链球菌相区别。,肺炎链球菌的分离和鉴定,26,2.Optochin(OP，奥普托欣)敏感试验,该药对肺炎链球菌的作用机制是干扰其叶酸的合成。optochin敏感试验方法是药敏试验。挑取被检菌，密涂于血平板上，贴上含5g/片的optochin纸片，置510%CO2的大气中（或烛缸），35孵育过夜。抑菌环直径=14mm为敏感，推断为肺炎链球菌。抑菌环直径=14mm。应注意鉴别。但大多数肺炎链球菌对苯唑西林（Oxacillin,OX）是敏感的(除外PRP)，而缓症链球菌和口腔链球菌对OX耐药。这可作为辅助鉴别点。,肺炎链球菌的分离和鉴定,28,肺炎链球菌的分离和鉴定,29,肺炎链球菌,肺炎链球菌的分离和鉴定,30,肺炎链球菌,肺炎链球菌的分离和鉴定,31,肺炎链球菌的分离和鉴定,32,肺炎链球菌的分离和鉴定,33,3.胆汁溶菌试验,自溶酶是一种L-丙氨酸-N-乙酰胞壁酰胺酶，能切断肽聚糖上L-丙氨酸与N-乙酰胞壁酸间的连接键，从而破坏细胞壁，使菌溶解。自溶酶在菌生长的稳定期被激活，也可被胆汁或胆盐等活性物质激活，从而促进培养物中的菌体溶解。肺炎链球菌胆汁溶菌试验为阳性，甲型溶血性链球菌的胆汁溶菌试验为阴性。,肺炎链球菌的分离和鉴定,34,（1）试管法:取新鲜培养物分装于两支试管内（每支1ml），其中一支加入10%的去氧胆酸钠溶液0.1ml或纯牛胆汁0.2ml，另一支加入无菌盐水两滴（对照），15min后，阳性者细菌被溶解，试管内液体呈透明状，阴性者无变化。,肺炎链球菌的分离和鉴定,35,肺炎链球菌的分离和鉴定,36,（2）平皿法:加一滴10%的去氧胆酸钠溶液或纯牛胆汁于被检菌菌苔上，15min后，阳性者细菌菌苔被溶解，阴性者无变化。试验应有已知肺炎链球菌作阳性对照。,肺炎链球菌的分离和鉴定,37,肺炎链球菌的分离和鉴定,38,肺炎链球菌的分离和鉴定,39,胆溶阴性,4.乳胶凝集试验,结果准确、快速、特异性高。,肺炎链球菌的分离和鉴定,41,肺炎链球菌的分离和鉴定,42,肺炎链球菌的分离和鉴定,43,5.荚膜肿胀试验,取一滴抗血清与一滴菌悬液混匀，加少量美蓝液混合后加盖片，室温1020min后，用油镜检查，如查到菌体呈兰色，周围绕有界限明显未染色的膨大空白圈为阳性。可用于肺炎链球菌的分型。,肺炎链球菌的分离和鉴定,44,6.凝集试验,包括血清凝集试验、SPA（葡萄球菌蛋白A）协同凝集试验、反向乳胶凝集试验等方法。,肺炎链球菌的分离和鉴定,45,表1非溶血链球菌的鉴别,菌种Optochin胆汁胆汁6.5%NaCl吡咯烷卫星现象CAMP血清群敏感溶菌七叶苷肉汤酮酶肺炎链球菌+牛链球菌+D无乳链球菌d+B草绿色链球菌营养变异链球菌+*d.不同菌株,肺炎链球菌的分离和鉴定,46,三、肺炎链球菌的药敏试验,K-B法：采用Mueller-Hinton琼脂5羊血培养基。直接菌落悬液法(0.5麦氏单位菌液，在15分钟内接种完)作为接种液。稀释法：包括琼脂稀释法、肉汤稀释法和Etest法。培养条件：为35、5CO2培养2024小时。质控菌株ATCC49619。,肺炎链球菌的分离和鉴定,47,4.肺炎链球菌感染的治疗,青霉素G敏感均可直接用青霉素G进行治疗;青霉素G中度耐药株可用大剂量青霉素G进行治疗；如重度耐药可选用三代头孢菌素加万古霉素或利福平进行治疗。,肺炎链球菌的分离和鉴定,4