[５种珍稀食药用真菌活性提取物对果蝇寿命影响的研究]真菌提取物

种珍稀食药用真菌活性提取物对果蝇寿命影响的研究真菌提取物 摘 要：探讨了松茸、栎金钱菌、蜂窝菌、云芝、杏鲍菇活性提取物对果蝇寿命的影响，分别用这5种食药用真菌活性提取物各以5、20gL的剂量加入培养基中培养果蝇，观察其对果蝇寿命的影响。结果表明，松茸、栎金钱菌、蜂窝菌、云芝、杏鲍菇的活性提取物能显著延长果蝇的平均寿命和半数死亡时间，其平均寿命延长率分别达23.96、5322、2309、3258、20。这提示松茸、栎金钱菌、蜂窝菌、云芝、杏鲍菇都具有良好的延寿效果。 关键词：松茸；栎金钱菌；蜂窝菌；云芝；杏鲍菇；果蝇；寿命 ：R285 ：A ：1007-7847(xx)02-0166-06 我国60岁及以上老年人口每年以5左右的速度增长，因此，延长老年人的寿命并且使之保持良好的健康状况就显得非常重要。各种延缓衰老的药物、保健食品的研究迅速发展，并取得了重要的进展。然而关于食药用真菌延缓衰老研究的报道不多，采用果蝇生存测验来研究食药用真菌延缓衰老的更为罕见。而关于松茸、蜂窝菌、栎金钱菌活性提取物延缓衰老作用的研究尚未见报道。松茸(Tricholoma matsutake)学名松口蘑，菌肉肥厚，具有香气，味道鲜美，具有强身、益肠胃、理气、化痰、抑制癌细胞增殖等功能。蜂窝菌(Hexagonia tenuis)，微苦带涩，宜肠、健胃、治胃气痛。栎金钱菌(Collybiadryophila)别名栎小皮伞，可食。云芝(Coriolusversicolor)有抗癌、降脂、抗炎、镇痛、抗氧化、增强免疫功能和改善学习记忆等作用。杏鲍菇(Pleurotuseryngii)有降血压、降血脂、改善肠胃功能和美容的作用。本实验研究松茸、蜂窝菌、栎金钱菌、云芝和杏鲍菇五种珍稀食药用真菌的活性提取物对果蝇寿命的影响，确定其延寿功效，为食药用真菌延寿研究提供实验依据，为开发新的延寿保健食品和药品提供理论依据。 1 材料与方法 11 材料 1) 野生型纯种黑腹果蝇 (Drosophilamelanogaster)，由华南师范大学生命科学学院提供。2)松茸、蜂窝菌、栎金钱菌、云芝和杏鲍菇的活性提取物，由广东粤微食用菌技术有限公司提供。3)基础培养基配方：超细玉米粉100g，红糖135g，琼脂15g，苯甲酸15g (溶解于30mL95的乙醇)，干酵母10g，蒸馏水740mL。 12 方法 121 待测食药用真菌活性成份的提取 松茸、蜂窝菌、栎金钱菌、云芝和杏鲍菇的子实体各取2kg，依次分别用14L纯水、无水乙醇和石油醚浸泡24h，定性滤纸抽滤2次，滤液用旋转蒸发仪60浓缩后置60干燥箱干燥至流浸膏状。然后混匀这3种溶剂所提取的活性成份备用。 122 培养基的配制 参照钟耀广的方法配制基础培养基，培养管采用75mm15mm的指管，每管用注射器注射培养基15 mL，以棉花塞封口，培养管斜放以使培养基形成约40斜面。试验组培养基采用基础培养基在水浴锅60恒温下分别按5、20gL的浓度加入各食药用真菌活性提取物配制而成新鲜配制的培养基在25培养箱中放置24h，如无菌生长即可将果蝇引入。 123 果蝇生存试验 取成熟野生型黑腹果蝇于装有基础培养基的50mL三角锥瓶内交配产卵，在形成蛹时去掉亲本蝇，收取10h内羽化的果蝇，用乙醚将其麻醉后，即分雌雄，挑取体型大小相近的果蝇随机分组。每种待测食药用真菌活性提取物设两个剂量组，分别用含样品浓度5、20gL的培养基培养，空白对照组用基础培养基培养。每组共用160只果蝇，雌雄各半，各4支管，每管20只果蝇。给药组的果蝇在基础培养基培养到第12d后。转到含不同浓度样品的培养基培养直至其全部死亡。实验在(251)，相对湿度5070的培养箱内进行。每4d更换新鲜配制的培养基1次。每天定时统计果蝇死亡数直至果蝇全部死亡。实验结束后计算每组的平均寿命、半数死亡时间和最高寿命(每组最后死亡的10只果蝇的平均存活天数为该组的最高寿命)。实验数据用SPSSl00软件进行统计，采用LSD法(最小显著性差异法)作方差分析。 2 结果与分析 21 松茸活性提取物对果蝇寿命的影响 从表1可知，20gL的松茸活性提取物能提高雌、雄果蝇的平均寿命(P 本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 能延长雌性果蝇的平均寿命、半数死亡时间和最高寿命(P?O01)，平均寿命延长率分别达1112和2384，半数死亡时间延长了2146和3351，最高寿命延长了10和16。从平均寿命延长率可知，云芝活性提取物对果蝇的延寿效果随剂量的升高而加强，且对雄性果蝇的延寿效果优于对雌性果蝇的。 25 杏鲍菇活性提取物对果蝇寿命的影响 从表5可知，5gL的杏鲍菇活性提取物能延长雌雄果蝇的平均寿命和半数死亡时间，平均寿命延长率分别为1167和126220 gL的杏鲍菇活性提取物也能延长雌性果蝇的平均寿命和半数死亡时间(P?O01)，平均寿命延长率达20。杏鲍菇活性提取物对雌性果蝇的延寿效果优于对雄性果蝇。 26 松茸、栎金钱菌、蜂窝菌、云芝、杏鲍菇的活性提取物对果蝇寿命的影响 从图1可知，在本实验所研究的几种食药用真菌中，栎金钱菌活性提取物的延寿效果最好，雌、雄果蝇平均寿命延长率分别达2292和5322，其次是云芝，雌、雄果蝇平均寿命延长率分别达2384和3258。这5种食药用真菌的延寿效果具有性别差异性。栎金钱菌、松茸、云芝的活性提取物对雄性果蝇的延寿效果优于对雌性果蝇的；但蜂窝菌和杏鲍菇活性提取物的延寿效果则雌性果蝇优于雄性果蝇。此外，这5种食药用真菌活性提取物最佳剂量组的雌性果蝇平均寿命延长率趋于恒定，在20上下波动。 3 讨论 衰老通常是指随着年龄推进而伴随生殖力的减弱和死亡率增加的渐进性功能丧失，是生命过程中的正常生理现象。延缓衰老主要是提高生命效率，改善机体体质并能在遗传特性所决定的限度内有效延长机体寿命。本实验结果表明，松茸、栎金钱菌、蜂窝菌、云芝、杏鲍菇的活性提取物能显著地延长果蝇的寿命，具有良好的延寿效果。 在果蝇生存测验的几个指标中，平均寿命是最重要的指标，是综合药效的反映；而半数死亡时间则偏向于反映药物对体弱果蝇的延寿效果；最高寿命偏向于反映药物对强壮的果蝇的延寿效果及果蝇对某药物过多摄取的耐受力。本实验所测的这5种食药用真菌活性提取物对延长半数死亡时间都有比较好的效果，其延长率普遍比同组的平均寿命延长率高，而对最高寿命的延长效果则不甚明显。这表明所测食药用真菌活性提取物能很好地增强体弱果蝇的体质，从而延长其寿命，但长期过量摄取会减弱延寿效果甚至可能出现积蓄中毒的现象。在本实验中，蜂窝菌就出现剂量太大反而延寿效果减弱的现象。 机体的衰老是一个全身性、渐进性的复杂过程，且导致衰老的因子众多，因而采用综合性的延寿药物搭配可能会收到更好的效果。许爱霞的研究表明，何首乌多糖和枸杞多糖对D半乳糖致衰老模型小鼠的脾脏指数、胸腺指数、SOD(Superoxidedimutase，超氧化物歧化酶)和GSH-Px(Glutathione Peroxidase，谷胱甘肽过氧化物酶)的升高和对脑LF (Lipofusin，脂褐素)及肾MDA(Malondialdehyde，丙二醛)的降低都有显著协同作用，从而具有协同延寿作用。同时，药物的配伍也可以减缓药物的副作用，如半夏配伍生姜可减缓半夏的辛烈、刺激咽喉致声音嘶哑等副反应。延寿药物的交替使用也可能可以减弱机体对药物的适应从而强化延寿效果，减低副作用。松茸、栎金钱菌、蜂窝菌、云芝、杏鲍菇的活性提取物是否存在配伍效应，这有待进一步的研究。 药物的作用具有性别差异性。白晨等人的研究表明，灵芝-松茸共酵多糖的同一剂量对小鼠的抑瘤作用普遍雄性好于雌性。本实验所测的栎金钱菌、松茸、云芝的活性提取物的同一剂量对果蝇的延寿效果也是普遍雄性好于雌性。 田光辉等人的研究表明，松茸活性提取物有免疫增强作用，可明显提高连续注射CY(Cyclophosphamide，环磷酰胺)和可的松造成免疫功能低下小鼠的免疫功能，使之保持正常。云芝多糖则能提高小鼠机体各组织的硒谷胱甘肽过氧化物酶的活性，提高机体防御活性氧损伤能力；对CY所致小鼠白细胞减少有明显回升作用，提高小鼠脾细胞IL-2(Interleukin-2，白细胞介素2)、干扰素C的水平。杏鲍菇多糖具有明显的抗自由基氧化的功