维生素类药物的分析(SYSH)PPT课件

-,1,概述,一、定义维生素是维持人体正常代谢功能所必需的微量生物活性物质，主要用于机体的能量转移和代谢调节，体内不能自行合成，必须从食物中摄取。,-,2,人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏症，而影响人体的正常生理机能。例如：VA夜盲症VB1脚气病VD缺乏佝偻病,-,3,-,4,VitA、D2、D3、E、K1等,脂溶性,水溶性,VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺,VitM,VitPP,中国药典收载40多个品种,-,5,公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来的维A。1600年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。,-,6,1747年苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C。1831年胡萝卜素被发现。1911年波兰化学家丰克为维生素命名。,-,7,1915年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的1916年-维生素B被分离出来。1917年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是缺乏维D引起的。,-,8,1920年-发现人体可将胡萝卜转化为维生素A。1922年-维E被发现。1933年-维E首次用于治疗。1993年-哈佛大学发表维生素E与心脏病关系的研究结果。,返回,-,9,第一节维生素A,维生素A包括有维生素A1（视黄醇）、去氢维生素A（维生素A2）和去水维生素A（维生素A3）等，其中维生素A1活性最高，,-,10,-H维生素A醇-COCH3维生素A醋酸酯-COC15H31维生素A棕榈酸酯,R:,一、结构和性质,-,11,环己烯,共轭多烯侧链,多异构体UV易被氧化,结构分析,-,12,1、为一个具有共轭多烯侧链的环己烯,（1）具有UV吸收,（2）存在多种立体异构化合物,（3）易发生脱氢、脱水、聚合反应,-,13,或有金属离子存在时更易氧化,2、不稳定性,-,14,3、与三氯化锑发生呈色反应,CHCl3,4、溶解性,不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等,-,15,1、三氯化锑反应,CHCl3,二、鉴别试验,维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中呈现不稳定的蓝色，再变为紫红色。,-,16,反应条件：要求无水，如存在水可能产生氯化氧锑（SbOCl）。配制所用的氯仿不能含醇（应用无醇氯仿）和光气（COCl2）。三氯化锑有腐蚀性。,-,17,（BP（2010）,max为326nm一个吸收峰,max为350390nm348、367、389三个吸收峰,-,18,维生素A的无水乙醇-盐酸溶液在326nm波长处有单一吸收峰，将该溶液加热后再测定，在348，367，389nm处出现3个尖锐吸收峰。这是维生素A在盐酸催化下加热，发生脱水反应所致,-,19,方法,取VitA加无水乙醇盐酸(100:1)溶液溶解，立即在300400nm波长范围内紫外扫描，应仅在326nm出有单一吸收峰。水浴加热30秒，迅速冷却，同法扫描，则应在348，367和389nm波长处有三个尖锐的吸收峰，且在波长332nm处有较低的吸收峰或拐点。,-,20,-,21,USP(29)显色剂磷钼酸规定斑点颜色和Rf值,BP(2005)杂质对照品法显色剂三氯化锑,-,22,三、含量测定,1、紫外分光光度法利用维生素A醇和其醋酸酯分子中具多烯共轭体系结构，在325328nm处有选择性吸收峰，故可进行含量测定。,-,23,立体异构体氧化产物及光照产物合成中间体去氢维生素A（VitA2）去水维生素A（VitA3）,均对测定有干扰，故采用三点校正法,-,24,三点校正法（1）条件：杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；物质对光的吸收具有加和性。,-,25,（2）波长的选择：1VitA的max（328nm）23分别在1的两侧各选一点,-,26,测定对象VitA醋酸酯,第一法等波长差法,-,27,等波长差法,-,28,-,29,第二法等吸收度法(皂化法),测定对象VitA醇,-,30,等吸收差法,-,31,-,32,中国药典收载方法,第一法（维生素A醋酸酯的测定）将维生素A溶于环己烷，在规定波长测定吸收度，计算吸收度比值（A/A328）,-,33,数据处理,如果max在326-329nm之间，且A/A328比值未超过规定值的0.02，可直接按下式计算含量：,-,34,第二法（维生素A醇的测定）,不能用第一法的样品采用第二法测定方法：维生素A醇皂化提取滤过浓缩干燥维生素A酯制成异丙醇溶液，在规定波长测定吸收度数据处理：,-,35,第一法第二法测定对象维生素A醋酸酯维生素A醇方法直接取样，测定皂化提取，测定溶剂环己烷异丙醇max328nm325nm测定波长5个4个换算因数19001830,第一法与第二法的区别,-,36,三氯化锑比色法,（二）,优点简便快速,max618nm620nm,标准曲线法,-,37,第二节维生素B1的分析,VitaminB1,治疗脚气病、多发性神经炎和胃肠道疾病,存在于米糠、麦麸和酵母中,-,38,氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),-,39,还原性,与酸成盐与生物碱非水碱量法,-,40,(1),(4),(3),(2),溶于水不溶于乙醚,UV吸收(mmax246nm),沉淀反应碘化汞钾或硅钨酸等反应生成,碱性中遇氧化剂(铁氰化钾)产生有荧光的硫色素,鉴别试验,TLC,结构特点与鉴别,硫色素反应VB1特有,(一),(二),(三),硝酸铅反应,氯化物反应,(四),-,41,生成沉淀反应,分子结构中含有杂环，易与生物碱沉淀剂(碘化铋钾、碘化汞钾、苦味酸等)，硅钨酸等作用形成组成恒定的沉淀维生素B1在碱性加热条件下反应放出H2S,与Pb(Ac)2试液形成黑色PbS,-,42,硫色素反应Ch.P（2005）,-,43,Cl-反应,-,44,1、非水溶液滴定法（药典用于测定原料药）原理：利用噻唑环上季铵和嘧啶环上氨基的弱碱性，在非水溶液中用高氯酸液滴定。,（三）含量测定,-,45,2、UV分光光度法（药典用于测定片剂、注射剂）（1）原理：维生素B1分子中具有共轭双键结构，具有紫外吸收特征，可在其最大吸收波长下测定吸收度，根据取样量计算含量。（2）方法,-,46,VitaminC,参与机体代谢，可帮助酶将胆固醇转化为胆酸而排泄，减低毛细管的脆性，增加机体抵抗力,防治坏血病，预防冠心病，大量静脉注射用于克山病的治疗,第三节维生素C的分析,-,47,二烯醇强还原性,弱酸性,UV,max243nm,结构与性质,溶于水，不溶于氯仿或乙醚,旋光性,糖类性质,水解性,-,48,一、结构与性质,1、溶解性,-,49,C3OH的pKa=4.17,C2OH的pKa=11.57,2、酸性,一元酸,-,50,二烯醇结构,二酮基结构,二烯醇结构,3、强还原性,-,51,L(+)抗坏血酸活性最强,手性C（C4、C5）,4、光学活性,-,52,糖类的显色反应,50,结构与糖类相似,5、具糖的性质,-,53,6、UV特征,-,54,二、鉴别试验,（一）.与氧化剂的反应,-,55,-,56,-,57,-,58,强还原性,-,59,或盐酸,50,吡咯,USP,-,60,-,61,（蓝色）,(糠醛),（戊糖）,-,62,（三）杂质检查（略）1、溶液的澄清度与颜色检查2、铁、铜离子的检查：原子吸收分光光度3、细菌内毒素,-,63,指示剂淀粉指示液,1、碘量法,（四）含量测定,-,64,取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6,（2）方法,-,65,酸性环境d.HCl,新沸冷H2O,减慢VitC被O2氧化速度,（3）讨论,立即滴定,减免水中O2的干扰,减少O2的干扰,-,66,、VitC注射液,测定时要加丙酮,消除稳定剂焦亚硫酸钠的干扰,-,67,（二）2，6-二氯靛酚钠滴定法,USP,JP,-,68,（2）方法,-,69,快速滴定2min内,酸性环境HPO3-HAc,稳定VitC,防止其他还原性物质干扰,剩余比色测定,（定量过量）,（测剩余染料）,（3）讨论,-,70,（4）缺点,需经常标定,贮存一周,干扰多氧化力较强,（三）高效液相色谱法,-,71,维生素D是一类抗佝偻病维生素的总称。目前已知的维生素D类物质至少有十种之多，它们都是甾醇的衍生物。中国药典主要收载有维生素D2、D3原料药；维生素D2胶丸和注射剂；维生素D，注射剂。USP(24)收载有片剂、胶囊、口服液等剂型。BP(2000)收载的剂型有片剂、口服液、注射液以及钙与维生素D2、D3制成的复方片剂。,第四节维生素D的分析,-,72,(一)结构维生素D2为9，10-开环麦角甾5，7，10(19)，22-四烯3-醇，又名骨化醇或麦角骨化醇。维生素D3为9，10-开环胆甾-5，7，10(19)三烯-3-醇，又名胆骨化醇。两者的化学结构十分相似，其差别仅是维生素D2比维生素D3在侧链上多一个双键，C24上多一个甲基。,一、结构与性质,-,73,VD2,VD3,-,74,(二)性质1、性状维生素D2、D3均为无色针状结晶或白色结晶性粉末；无臭，无味；遇光或空气均易变质。2、溶解性维生素D2在氯仿中极易溶解，在乙醇、丙酮或乙醚中易溶；维生素D3在乙醇、丙酮、氯仿或乙醚中极易溶解；二者均在植物油中略溶，在水中不溶。3、不稳定性维生素D2、D3因含有多个烯键，所以极不稳定，遇光或空气及其他氧化剂均发生氧化而变质，使效价降低，毒性增强。本品对酸也不稳定。4、旋光性维生素D2具有6个手性碳原子，而维生素D3有5个手性碳原子，所以二者均具有旋光性。,-,75,5、显色反应本品的氯仿溶液，加醋酐与硫酸，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后变为绿色。本反应为甾类化合物的共有反应。6紫外吸收特性取本品，加无水乙醇溶解并定量稀释制成每10ml中约含10ug的溶液。照分光光度法，在265nm的波长处测定吸收度，维生素D2的吸收系数为460-490；维生素D3的吸收系数为465-495。,-,76,(一)显色反应1、与醋酐浓硫酸反应取维生素D2或D3约0.5mg，加氯仿5m1溶解后，加醋酐0.3ml与硫酸0.1ml，振摇，维生素D2初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后成绿色。维生素D3初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色、蓝绿色，最后变为绿色。2、与三氯化锑反应取本品适量(约1000单位)，加1，2-二氯乙烷1m1溶解，加三氯化锑试液4ml，溶液即显橙红色，逐渐变为粉红色。3、其它显色反应维生素D与三氯化铁反应呈橙黄色，与二氯丙醇和乙酰氯试剂反应显绿色，均可用于鉴别，但专属性不强。,二、鉴别试验,-,77,(二)比旋度鉴别取维生素D2，精密称定，加无水乙醇溶解并定量稀释制成每1m1中含40mg的溶液，依法测定，比旋度为+102.5。至+107.5。；维生素D3加无水乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中含5mg的溶液，依法测定，比旋度为十105。至+112。(二者均应于容器开启后30min内取样，并在溶液配制后30min内测定)。(三)其他鉴别方法维生素D2、D3可用薄层色谱法、HPLC法和制备衍生物测熔点进行鉴别。此外，亦可通过其紫外、红外吸收光谱的特征加以鉴别。,-,78,(四)维生素D2、D3的区别反应取维生素D10mg，溶于96乙醇10ml中。取此液0.1m1，加乙醇1ml和85硫酸5ml。维生素D2显红色，在570nm波长处有最大吸收；维生素D3显黄色，在495nm波长处有最大吸收。此反应也用于D2和D3的含量测定。,-,79,(一)麦角甾醇的检查(二)前维生素D的光照产物,三、杂质检查（略）,-,80,(一)维生素D测定法（二）讨论,四、含量测定（略）,维生素D的含量测定方法各国药典各异。USP(24)关于维生素D的测定方法有化学法、色谱法和微生物法；B