《分子生物学核酸》PPT课件

,第二章核酸的结构与功能南京中医药大学周坤福电话85811768邮箱：zhoukunfu,核酸（nucleicacid）是一类重要的生物大分子，是生物遗传的物质基础。,脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid,DNA），主要存在于细胞核内，是遗传信息的储存和携带者，是遗传的物质基础。核糖核酸（ribonucleicacid,RNA），主要分布在细胞质中，参与遗传信息表达的各过程。,核酸,核苷,单核苷酸,磷酸,碱基,戊糖,第一节核酸的化学组成,戊糖（ribose）,-D-核糖,-D-2-脱氧核糖,碱基（base）,嘧啶pyrimidine,嘌呤purine,胞嘧啶（C）（2-氧-4-氨基嘧）,胸腺嘧啶（T）（5-甲基尿嘧啶）,尿嘧啶（U）(2,4-二氧嘧啶),鸟嘌呤（G）（2-氨基-6-氧嘌呤）,腺嘌呤（A）（6-氨基嘌呤）,稀有碱基,假尿嘧啶核苷,次黄嘌呤核苷,二氢尿嘧啶核苷,甲基鸟嘌呤核苷,核苷,碱基,戊糖,糖苷键,purine：N9-1,pyrimidine：N1-C1,8种核苷,核苷酸,核苷与磷酸缩合生成的磷酸酯。自然界所发现的核苷酸主要为核苷C5上羟基与磷酸形成的酯键，称为5核苷酸或一磷酸核苷。核苷酸是核酸的基本组成单位。,二磷酸核苷和三磷酸核苷多为核苷酸有关代谢中间产物或酶活性及代谢的调节物质。三磷酸核苷是参与核酸合成的直接形式，并同时为生理储能和供能的重要形式。,AMP、ADP、ATPGMP、GDP、GTPCMP、CDP、CTPUMP、UDP、UTP,dAMP、dADP、dATPdGMP、dGDP、dGTPdCMP、dCDP、dCTPdTMP、dTDP、dTTP,RNA,DNA,第二节DNA的分子结构,DNA的碱基组成,A、G、C、TA=TA+G=C+T,单核苷酸通过3,5-磷酸二酯键连接成大分子多核苷酸。,5-末端：P,3-末端：OH,*DNA分子中脱氧核苷酸的排列顺序，即碱基的排列顺序。,DNA的一级结构（primarystructure),书写方式,1.线条简化式,2.文字简化式pApGpCpTpA-GC-TpAGCT,两条反向平行的脱氧核苷酸链绕同一中心轴，右手螺旋。磷酸-戊糖骨架位于外侧，两条链上的碱基以A=T、G=C相连，构成碱基平面，位于螺旋内侧。10个碱基对旋转一周，螺距为3.4nm，螺旋直径为2.0nm。大沟（majorgroove），小沟（minorgroove）氢键：维持双螺旋横向稳定碱基堆砌力：维持纵向稳定,DNA的二级结构（secondarystructure),Watson-Crickdoublehelixmodel,特征：,DNA的三级结构（tertiarytructure）,原核生物DNA超螺旋共价封闭环状双螺旋再进一步螺旋。,真核生物的三级结构是该DNA双链盘绕在组蛋白上的负超旋。这种以组蛋白为核心绕以DNA片段的颗粒称为核小体（nucleosome）。,完整的核小体由两部分组成，即核小体核心（nucleosomecore），以及连接各核心颗粒之间的区域称连接区（linker）。,真核生物,DNA双螺旋核小体串珠状多核小体细丝螺线管超螺线管染色单体,基因（gene)是一个功能性遗传单位，是合成一个有功能蛋白或RNA所必需的全部DNA序列。,基因组（genome）指细胞或生物体的一套完整单个的遗传物质。一个基因组包括一整套基因。,结构基因（structuralgene）编码蛋白质或RNA。,DNA的功能,生物遗传信息的携带者、生物遗传信息复制的模板和基因转录的模板。,RNA的一般特征,主要存在于细胞质中一般是单链分子与DNA在碱基组成上的区别是RNA分子中含有的是U，U与T具有相同的结构信息量RNA核糖分子上C2-OH是游离的，是一个易发生不良反应的位置，因此RNA不如DNA稳定,第三节RNA的结构和功能,RNA的种类,tRNA(transferRNA),细胞内分子量最小的一类核酸，约占总RNA的15%含有10-20%的稀有碱基细胞内tRNA的种类很多，每一种氨基酸都有其相应的一种或几种tRNA二级结构为“三叶草”的结构三级结构呈倒L形重要的功能是参与转运氨基酸，解译mRNA的密码,“三叶草”形的二级结构,功能部位：反密码环:反密码子氨基酸臂：3-CCA-OH,倒L形的三级结构,mRNA(messengerRNA),细胞内含量较少的一类RNA，占总RNA的5%左右，但种类很多。功能：将核内DNA的碱基顺序（遗传信息）按碱基互补原则抄录并转送到胞质的核糖体上，用以决定蛋白质合成的氨基酸顺序。三联密码：mRNA分子上每三个核苷酸为一组，决定肽链上的一个氨基酸。,5-末端的帽结构：m7G-ppp5-Np促进核糖体与mRNA的结合加速翻译的起始速度、增强mRNA的稳定性3-末端的polyA结构:参与mRNA从核内向胞质的转移、增强mRNA的稳定性真核生物mRNA含有内含子，在核内需经过一系列的加工、修饰及剪接等去除内含子，转变为成熟的mRNA，进入胞浆。,真核生物mRNA的特殊结构：,rRNA(ribosomalRNA),细胞内含量最多的RNA，约占RNA总量的80%左右。rRNA不能单独行使功能，必须与蛋白质结合后形成核糖体(ribosome)，作为蛋白质合成的场所。某些低等真核生物的细胞核rRNA的前体在成熟过程中可以自我剪接，称为核酶(ribozyme)。原核细胞rRNA包括：5SrRNA23SrRNA16SrRNA+蛋白质+蛋白质大亚基小亚基真核细胞rRNA包括：5SrRNA5.8SrRNA28SrRNA18SrRNA+蛋白质+蛋白质大亚基小亚基,rRNA二级结构：有较多茎环结构，是与蛋白质结合的结构基础，也是酶性RNA的结构基础。,分子大小：1mDNA=3000bp=2x106Dalton紫外吸收：260nm,第四节核酸的理化性质,核酸的变性、复性与分子杂交,1.DNA变性(denaturation)*在某些因素的作用下，DNA双链间氢键断裂，双螺旋结构解开，形成单链无规则线团状分子的过程。,高色效应(hyperchromiceffect)：解链过程中，DNAA260增加，并与解链程度相关。Tm(meltingtemperature)：50%DNA解链的温度，又称融解温度。,2.复性(renaturation)*变性DNA