高中生物 第一部分《实验二 微生物的培养和利用》课件5 浙科版选修1

实验2分离以尿素为氮源的微生物,分离微生物的方法:,平板划线分离法稀释平板分离法选择培养基培养法,平板划线分离法稀释平板分离法选择培养基培养法,尿素又称脲,是蛋白质的降解产物,哺乳动物的尿液中含有,植物不能直接吸收尿素,因此,大量尿素的存在对环境造成污染.有些细菌可产生脲酶,以尿素为氮源,脲酶可将尿素分解为氨,被植物吸收.,CO（NH2）2+H2OCO2+2NH3,脲酶,一、实验原理,用选择培养基可分离出以尿素为氮源的微生物，这些微生物可产生脲酶，脲酶可将尿素分解为能被植物吸收的氨，因此这类微生物具有一定的生态学价值。稀释涂布平板法统计土壤样品中含有的这种微生物的数目,细菌尿素NH3中性碱性酚红颜色：黄色紫红色,二、实验目的:,使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌(有脲酶),通过指示剂（酚红）颜色的变化检知培养基pH的变化(脲酶催化的化学反应),统计被检测的土壤中含有的以尿素为氮源的微生物的数量,三、实验中涉及到的一些问题：,（一）哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多？（选材的问题）,（二）此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质？,（三）可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物对尿素分解能力的高低？,（四）统计微生物的数量可用哪些方法？,没硬化，腐殖质丰富的土壤,碳源、尿素、无机盐、水、酚红,培养基红色的深浅,稀释涂布平板法，显微镜直接记数法,三、实验中涉及到的一些问题：,（五）用稀释涂布平板法计数时，菌落数在30-300（20以内）计数。,重复性原则,对照原则,（排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验的可信度）,做一系列浓度梯度实验，探究合适的稀释度,（六）实验设计要遵循的原则：,两位同学分别用稀释涂布法测定同一土壤样品中的细菌数在对应稀释倍数为的培养基中，得到以下两种统计结果第一个同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为第二个同学在该浓度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为、和。该同学以这三个平板上菌落数的平均值作为统计结果。你认为这两位的同学需要改进吗？如果需要，如何改进？,第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性,两位同学分别用稀释涂布法测定同一土壤样品中的细菌数同学筛选出大约个菌落，但是，同学在同样稀释度下只获得个菌落。同学认为的结果有问题。他认为的培养基可能被杂菌污染了，或在培养基中混入了其他含氮物质，导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基中生长。你能帮解决这个问题吗？,将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染,四、实验用品和材料：,五、操作步骤：,、倒平板：,、制备一定浓度梯度的细菌悬液：,g土壤ml无菌水，振荡，为稀释液，依次制备、的土壤稀释液。,、稀释涂布分离法分离细菌,、制备无菌的固体培养基和尿素固体培养基,、培养观察（倒置，度）,倒个培养基，个尿素固体培养基,（无菌，0.1ml，玻璃刮刀）,配制培养基,尿素培养基（1L）葡萄糖10gNaCl4.8gK2HPO44.8g琼脂20g酚红0.01g尿素80g,LB培养基（1L）蛋白胨：10g酵母粉：5gNaCl：10g琼脂：20g,对照组,选择培养基,实验组,倒平板,需要倒3个LB平板，9个尿素平板,每个稀释度1个LB对照平板3个尿素平板(平行重复组),配制菌悬液,1个99ml无菌水2个9ml无菌水,得102,103,104的菌悬液,1g土壤,接种,取100ul菌悬液,涂布分离,涂布分离,涂布前后三角刮刀需要灼烧吗？,问题讨论,涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？,应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。,37倒置培养,按浓度捆成一摞,恒温37培养,五、操作步骤：（学生做）,、倒平板：倒个培养基，个尿素固体培养基,、制备一定浓度梯度的细菌悬液：,g土壤ml无