组织学-与胚胎学-教学课件西-安交通大学医学院人体解剖与组...

1,组织学与胚胎学教学课件西安交通大学医学院人体解剖与组织胚胎学系,2,Dr.JinsongZhou绪论(Introduction)I.什么是组织学(Histology)?组织学是研究人体正常细微结构及其相关功能的科学。A.微观结构:1.光学显微镜(Lightmicroscope，LM):计量单位是微米(m)。(1m=0.001mm)。2.电子显微镜(Electronmicroscope，EM):计量单位是纳米(nm)。(1nm=0.001m)。,3,光学显微镜基本结构：1.照明灯(Lamp)2.聚光器(Condenser)3.载物台和切片夹(Mechanicalstageandspecimenretainer)4.推进器(Mechanicalstageadjustmentknob)5.物镜(Objectives)6.粗细螺旋(Courseandfinefocusknob)7.目镜(Oculars)8.照相机等接口(Connectiontocamera,etc.),4,B.相关功能:微观结构和其功能相适应，反之亦然。C.人体结构的4个层次:1.细胞(Cell):人体结构的基本结构和功能单位。2.组织(Tissue):由一群结构和功能相同或相似的细胞(及其细胞间质)构成。人体内有4种基本组织：上皮组织，结缔组织，肌组织和神经组织。3.器官(Organ):由组织有机地结合起来而构成。4.系统(System):由结构相似且功能相关的器官构成。,5,II.为什么要学习组织学?1.组织学又叫微观解剖学(Microanatomy)，是解剖学知识的进一步完善。2.结构是功能的基础，学好组织学是学好生理学(Physiology)的基础。3.只有了解正常结构，才能学习其异常变化。因此组织学是病理学(Pathology)的基础。4.组织学成绩不及格，必须补考，重修和留级。,6,III.怎样学习组织学?A.LM技术:分辨率(Resolution)是指能够分辨相邻两点之间的最小距离。LM的分辨率约为200m。1.切片(Section):将组织切薄使光线可以透过。a.固定(Fixation):为保存新鲜组织的微观结构，尽快将组织浸入到酒精，甲醛，苦味酸，Bouins液或Zenkers液等固定剂中。,7,b.石蜡包埋(Paraffinembedding):*脱水(Dehydration):用浓度逐渐升高的酒精(70100%)将组织中的水完全置换出来。*透明(Clearing):用二甲苯完全置换出酒精。*浸蜡(Infiltration):在6062C时，用液态石蜡完全置换出二甲苯。室温时石蜡凝固成固态，内含待切组织。,8,c.切片:用切片机将组织切成120m厚的蜡片，然后将其放到温水上，待其完全展开后，裱到有粘附剂的载玻片上。,9,除切片外，还有其他处理组织的方法：*铺片(Wholemount):用于很薄的组织，如肠系膜。*磨片(Groundsection):用于很坚硬的组织，如骨和牙。*涂片(Smear):用于液态组织，如血液，精液和唾液。,10,2.染色(Staining):染料可以将微观结构显示不同的颜色以便观察鉴别。在染色前，需要脱蜡入水，因为染料是水溶性的。,11,a.最常用的染料是苏木素(Hematoxylin,H)和伊红(Eosin,E)。*苏木素是碱性染料，蓝紫色，可以使细胞核等着色。被苏木素着色的结构本身为酸性，具有嗜碱性(Basophilic)。,12,*伊红是酸性染料，粉红色。可以将大多数细胞的细胞质染成红色。被伊红着色的结构本身为碱性，具有嗜酸性(Acidophilic)。*不易被苏木素和伊红着色的结构具有嗜中性(Neutrophilic)。,13,肥大细胞的颗粒被甲苯铵蓝(一种蓝色染料)染成紫红色b.如果某结构显示的颜色和染料本身的颜色不同，该结构具有异染性(Metachromasia)。c.如果某结构能将银离子还原成银原子，并吸附银原子而使自身显示棕黑色，该结构具有嗜银性(Argyrophilic)。,14,网状纤维具有嗜银性，因此可以用银盐染色来显示。,15,H&E染色的中等动静脉d.不同的染色方法，其结果不同。,16,醛复红染色的中等动静脉,17,在染色后，重新进入酒精和二甲苯，最后用中性树胶封片，以便长期保存。*切片:固定梯度酒精二甲苯石蜡。*染色:石蜡二甲苯梯度酒精水。*保存:水梯度酒精二甲苯中性树胶。,18,B.EM技术:1.EM可分为透射电镜(TEM)和扫描电镜(SEM)2类。2.EM的原理和LM相似，但用电子束代替光线，磁场代替玻璃透镜。分辨率约为0.2nm。,19,3.EM的组织的制备与LM的相似，但有以下不同:a.通常使用戊二醛和四氧化锇作双重固定。b.切片超薄(厚度小于90nm)，塑胶包埋。c.用重金属盐如醋酸铀或醋酸铅等染色。因此，所有原始的电镜图片都是黑白的。,20,SEM显示巨噬细胞表面,21,TEM显示胰腺腺泡细胞内部结构。,22,C.特殊的染色方法:1.组织化学(Histochemistry,细胞化学)法:通过生物化学的方法在原位产生不溶解的有颜色的反应产物，来显示微细结构的位置，然后用显微镜观察。PAS反应:用来显示多糖的分布。先用过碘酸(Periodicacid)将多糖氧化，在多糖表面形成戊二醛结构，然后用无色亚硫酸品红(Schiff试剂)还原戊二醛形成紫红色沉淀。,23,肝脏的PAS染色,24,2.免疫细胞化学(Immunocytochemistry)染色法:a.待测结构或化学物质被看作抗原(Antigen)，通过非常敏感和专一的免疫反应使抗原和被标记的抗体(Antibody)结合，然后显示标记物，在原位产生不溶有色的反应产物，最后用显微镜观察。,25,b.2种基本染色法:*直接法:第一抗体被标记。*间接法:第一抗体也被看作抗原，而第二抗体被标记。因为信号被放大，因此更加敏感。3.放射自显影(Autoradiograph