动物细胞融合与单克隆抗体

“番茄马铃薯”理想图,通过长期的实验，科学家们采用体细胞杂交技术获得了“番茄马铃薯”植株。,杂种植株,融合的原生质体AB,再生出细胞壁,脱分化,愈伤组织,再分化,植物细胞的融合,植物组织培养,植物细胞A,原生质体B,原生质体A,杂种细胞AB,去壁,去壁,人工诱导,方法？,促进融合的方法？,融合完成的标志,植物细胞B,植物体细胞杂交技术过程,成果和未解决的问题,成果：克服不同生物远缘杂交的障碍，出现自然界没有的新品种。,未解决的问题：未能让杂种植物按照人们的需要表现出亲代的优良。,如果将牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！,动物细胞也能融合吗？,一、动物细胞融合,细胞A,细胞B,杂交细胞,灭活的病毒,物理法化学法,仙台病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒,不同DNA的两个细胞,灭活病毒诱导细胞融合,融合后的细胞进行有丝分裂,1、动物细胞融合过程,思考题,1、植物体细胞杂交前做何处理？怎么处理？,去壁酶解法，如纤维素酶或果胶酶,2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？,无需，因为动物细胞无细胞壁,3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？,离心、振动、电激等物理方法；PEG等化学方法,4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法？,能还可以利用灭活的病毒进行诱导,5、植物体细胞杂交过程应先进行原生质体融合再进行组织培养形成完整的个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？,不能,6、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？,思考题,2、动物细胞融合的概念,动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程。,7、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？,思考题,利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞,8、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？,生产单克隆抗体,细胞融合与融合诱导细胞融合物质：,诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇诱导细胞融合的仙台病毒必须灭活。思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？,因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。,细胞融合技术应用于哪些方面？,细胞学、遗传学、免疫学及制备单克隆抗体。,1.抗体是由何种细胞产生的？2.如何得到抗体？,二、单克隆抗体,抗体,1、抗原动物体内,抗原不纯,抗体不纯,2、特异性差、纯度低；,产量低、反应不够灵敏,二、单克隆抗体,设计方案：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖,如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？,杂种细胞,二、单克隆抗体,？,？,诱导其融合的方法有哪些？,抗原,浆细胞,2.制备过程：,二、单克隆抗体,BBBB瘤瘤瘤瘤,细胞融合后培养液中有几种细胞？,杂种细胞,整个制备过程要经过几次筛选?,（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。）,3.单克隆抗体的应用：,作为诊断试剂,用于治疗疾病和运载药物,生物导弹,特异性高、灵敏度高等优越性。,主要用于制备单克隆抗体,获得杂种植株,用途,物理、化学方法（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）,诱导方法,使细胞分散后诱导细胞融合,去除细胞壁后诱导原生质体融合,细胞融合的方法,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性、植物细胞全能性,原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,植物、动物细胞融合的比较,下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案,制备单克隆抗体,B细胞,抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,原代,传代,下列属于动物细胞培养与植物组织培养主要区别的是A.培养基成分不同B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株,下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是A培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清B原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞C动物细胞培养一般能够传到4050代，但其遗传物质发生了改变D动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身健康细胞,A,C,生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下较易成功“复生”野驴的方法是A将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术，经脱分化、再分化，培育成新个体B将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体C取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，经孕育培养成新个体D将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体,C,一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能A有选择地繁殖某一性别的家畜B繁殖家畜中的优秀个体C用于保存物种D改变动物的基因型,D,下列哪项属于克隆A将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中B将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内C将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞D将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系,试管婴儿、试管苗和克隆羊三者均属于生物工程技术的杰出成果，下面叙述正确的是A.都属于无性生殖能保持母本性状B.都是细胞工程的技术范围C.都充分体现了体细胞的全能性D.都不会发生基因重组和变异,D,B,下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：,（1）A中放置的是动物器官或组织。它一般取自。（2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是，然后用酶处理，使细胞分散开来，这样做的目的是。（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有_等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第代，到这时的培养称为。（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用处理，然后配置成，再分装。（5）在C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡，原因是。,CCTV一2于2005年4月7日报道，卫生部4月6日发布了苏丹红危险性报告评估，报道中提到苏丹红一号是一种人工色素(工业染料)，它在人体内代谢生成相应的胺类。科研人员欲采用一定的技术手段探究苏丹红是否对人体有危害。请回答：（1）根据所学的动物细胞工程知识，你认为采取下列哪种技术手段最合适：A动物细胞融合B动物细胞培养C胚胎移植D核移植,（2）根据上述选择，请你设计一个实验来探究“苏丹红一号”是否对人体有危害。1该实验的原理是：。2实验方法步骤：材料准备：从医院妇产科获取所需要的原材料组织，浓度为0.09“苏丹红一号”试剂，高倍显微镜，培养瓶若干，配制好的培养液，剪刀，培养箱，所需要的酶。制备检测细胞：a配制细胞悬浮液：。b将悬浮液分装到两个以上的培养瓶中，置于培养箱中培养一段时间。检测过程：。实验结果观察、分析得出结论。(略),动物细胞融合和植物原生质体融合比较，在动物细胞融合中有特殊性的是A融合的原理B融合的过程C融合的诱导手段D融合的结果,C,下表为动、植物细胞工程的有关内容比较，你认为错误的有,A0处B1处C2处D3处,（1）若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用处理，除去了；由A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法是。融合完成的标志是。（2）若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用技术把D培养成植株。,（3）若A、B是动物细胞，一般取自，然后用使其分散开来；由A、B到C的过程中，常用的不同于植物细胞融合的手段是，所形成的D称为，A、B融合为C的过程说明了细胞膜具有。,（1）纤维素酶和果胶酶细胞壁电刺激、振动、离心产生新的细胞壁（2）植物组织培养,(3)动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织胰蛋白酶灭活的病毒诱导杂种细胞一定的流动性,（4）若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠效应B细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已经被注射了。注射后小鼠身体发生了相应的免疫反应，生成了_，图中B为。（5）若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，所形成的C有种，用来培养的D细胞应该是。从中选择出它的方法是培养，获得D后，常用的培养方法是培养液中培养和。,(4)抗原效应B细胞抗体和记忆细胞骨髓瘤细胞(5)3杂交瘤细胞用特定的选择培养基小鼠腹腔内增殖,若人基因的作用不受鼠基因影响，则支配a、b、c、d和e酶合成的基因依次位于人的号染色体上。,将分离出的杂种细胞在不同条件下继续培养，获得A、B、C三细胞株。各细胞株内含有的人染色体如有表（“+”有，“”无）测定各细胞株中人体所具有的五种酶的活性。结果是：B株有a酶活性；A、B、C株均有b酶活性：A、B株有c酶活性；C株有d酶活性；A、B、C株均无e酶活性。,比特尔等在1941年提出了“一个基因一种酶假说”。在生物体内，各类物质或分子是经过一系列代谢步骤合成的，每一步都受特定的酶