DB33 T 556-2005 乳和乳粉中黄曲霉毒素M1的测定 酶联免疫吸附法

53 备案号： 浙 江 省 地 方 标 准 556 2005 乳和乳粉中黄曲霉毒素 测定 酶联免疫吸附法 of 1 in 005布 2005施 浙江省质量技术监督 局 发布 556 2005 I 前 言 本标准由杭州市质量技术监督局、杭州市农业局共同提出。 本标准由浙江省质量技术监督局 归口。 本标准由杭州市农产品检测站负责起草。 本标准主要起草人：胡学肖、杨华、袁谦、吴玲玲、李容、姚建红。 556 2005 言 黄曲霉毒素 1在动物体内的羟基化代谢产物，具有剧毒性和致癌性。目前我国有关黄曲霉毒素 效液相色谱法和荧光光度法等，本方法是用于定性和半定量的快速测定法，适合快速检测和批量样品的筛选。 556 2005 乳和乳粉中黄曲霉毒素 测定 酶 联免疫吸附法 1 范围 本标准规定了乳和乳粉中黄曲霉毒素 本标准适用于生鲜乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳、乳粉等乳品中黄曲霉毒素 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 标准溶液和样品试液加 入各自板孔，游离的黄曲霉毒素 1抗体结合，没有结合的物质在洗涤中被清除。再加入黄曲霉毒素 没有结合的抗体位点全部覆盖，结合的酶标记物通过显色液显示出来。最后加入终止液，用酶标仪在 450光度值与样品中的黄曲霉毒素 4 试剂和溶液 实验所用试剂均为分析纯，水为去离子水。 曲霉毒素 ：最低检出限不大于 g/ 孔板。 曲霉毒素 度范围 0 g/ 标记物浓缩液。 标记物稀释用缓冲液 。 色剂。 檬酸缓冲液。 止液。 品稀释缓冲液。 板浓缩液。 标记物工作液：实验前计算用量，用酶标记物稀释用缓冲液（ 其浓缩液（ 1： 100稀释，切勿涡旋混合，配制后放回试剂盒放置 4用。 色反应液：显色剂（ 柠檬酸缓冲液（ 1： 10稀释，在使用前配制，避光保存。 1注： 不同品牌的 黄曲霉毒素 液配制和测试程序等可根据其试剂盒使用说明书略作调整。 556 2005 板工作液：洗板浓缩液（ 水以 1： 20稀释，备用。 亚铁氰化钾溶液：称取 4N)6 3水溶解、定容至 100 硫酸锌溶液：称取 水溶解、定容至 100 5 仪器和设备 孔板酶标仪（带 450 平：最小感量 冻离心机：最大转速不小于 3000 涡混合器。 续可调移液器及配套吸头： 5L 50L 、 20L 200L 、 200L 1000L 。 脂棉签。 验室常规玻璃器皿。 6 分析步骤 品前处理 鲜乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳 以下简称液态乳 ：将待测样品摇匀， 平行称取两份 确到 102 8 30000脱脂棉签 除去上层脂肪。加入 150L 亚铁氰化钾溶液（ 短暂涡旋混合后加入 150L 硫酸锌溶液（ 涡旋振荡 3015 30000清液供测试用 。 粉：平行称取两份 确到 各自小烧杯中，加水溶解，转移到 100容至刻度。以下步骤同 试程序 下操作均须在 20 25 进行。 出试剂盒，放置 1h 以上，使其温度恢复到 20 25 足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架，并记录标准和样品对应的位置。 100L 标准溶液（ 已处理好的样品试液到各自微孔中，孵育 60 除微孔中的液体，注入洗板工作液（ 300L ，重复洗涤 5次，最后在吸水纸上轻轻拍干。 所有微孔中加入 100L 酶标记物工作液（ 孵育 20 复 所有微孔中加入 100L 显色反应液（ 孵育 30 所有微孔中加入 50L 终止液（ 混匀后 6050吸光度值。 7 分析结果计算和表述 准工作曲线绘制 以标准溶液的浓度值（ C）为横坐标，相对吸光度值（ B/纵坐标，在半对数坐标纸上绘制标准工作曲线。 相对吸光度值（ %） = B/ 100 1) 式中： B 标准（或样品）的吸光度值； 空白（浓度为 0 的标准溶液）的吸光度值。 果计算 态乳中黄曲霉毒素 2）计算： 2) 式中： 液态乳中黄曲霉毒素 g / 556 2005 液态乳在前处理过程中的稀释倍数 。 由测试用上清液的相对吸光度值查标准工作曲线得到的黄曲霉毒素 ng/ 粉中黄曲霉毒素 3）计算： V/m 3) 式中： 乳粉中黄曲霉毒素 g / 乳粉定容后分取液在前处理过程中的稀释倍数。 由测试用上清液的相对吸光度值查标 准工作曲线得到的黄曲霉毒素 ng/ m 乳粉称样量， g； V 乳粉定容体积， 计算结果表示到小数点后两位。 8 检出限与允许差 出限 液态乳和乳粉中黄曲霉毒素 许差 每个试样称取两份进行平行测定，以其算术平均值为分析结果。 其分析结果的相对偏差应不大于