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RT-PCR技术原理简介,张晓涛,1,RT-PCR简介,RT-PCR（ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction）即逆转录PCRRT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。,2,RT-PCR原理,掌握PCR技术。学会操作RT-PCR简介PCR仪。熟悉琼脂糖凝胶电泳技术。,首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。,3,RT-PCR两种方法,4,RT-PCR反应体系,5,RT引物的选择,6,RT逆转录酶的选择,7,RT-PCR操作流程,1.从细胞或特定组织中提取总RNA；2.逆转录实验；3.扩增内参和目的基因并比较基因表达差异。,8,实验流程（两步法）,9,实验流程（一步法）,10,RT实验要素决定特异性和灵敏度,11,问题（一）RT-PCR没有产物,原因,对策,12,问题（二）非特异性扩增,原因,对策,13,ThankYou!,14,
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