残留溶剂分析方法验证方案

*制药股份有限公司 验证名称XX 产品残留溶剂分析方法验证方案 版本号： 第 1 版 验证编号 YZ-FX-13-001(P) 页码：Page 1 of 12 *产品残留溶剂分析方法验证方案产品残留溶剂分析方法验证方案 20*年*月 *制药股份有限公司 验证名称XX 产品残留溶剂分析方法验证方案 版本号： 第 1 版 验证编号 YZ-FX-13-001(P) 页码：Page 2 of 12 验证方案的起草与审批验证方案的起草与审批 验证小组成员验证小组成员 部门人员职责 验证小组组长验证小组组长 部门人员职责 负责组织起草验证方案并按批准方案组织实施； 督促验证人员做好记录；负责各阶段验证结果 汇总及评价、组织起草验证报告；组织相关培 训 方案审核方案审核 审核签名及日期 验证委员会 方案批准方案批准 批准人批准日期 方案实施日期：方案实施日期： *制药股份有限公司 验证名称XX 产品残留溶剂分析方法验证方案 版本号： 第 1 版 验证编号 YZ-FX-13-001(P) 页码：Page 3 of 12 目目 录录 1.验证目的验证目的.4 2.方法简介与确认范围方法简介与确认范围.4 3.标准品、供试品标准品、供试品.4 4.风险评估风险评估.4 5.验证的可接受标准验证的可接受标准.5 6.验证步骤验证步骤.6 6.1 系统适应性系统适应性.6 6.2 专属性专属性.6 6.3 定量限与检测限定量限与检测限.7 6.4 线性线性.7 6.5 准确度准确度.8 6.6 精密度精密度.9 6.7 范围范围.9 6.8 耐用性耐用性.9 6.9 样品测定样品测定.10 7.偏差偏差.10 8.风险的接收与评审风险的接收与评审.10 9.再验证再验证.10 10.确认结果评审和结论确认结果评审和结论.10 11.更改历史更改历史.10 12. 附录附录.10 *制药股份有限公司 验证名称XX 产品残留溶剂分析方法验证方案 版本号： 第 1 版 验证编号 YZ-FX-13-001(P) 页码：Page 4 of 12 1. 验证目的验证目的 根据法规的要求，分析方法应进行验证，证明采用的方法适合于相应的检测要求。 这个验证方案的目的是为验证提供具体方法参数、可接受标准和研究步骤。 2. 方法简介与确认范围方法简介与确认范围 *产品生产过程中用到有机溶剂乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃，为 了准确测定溶剂在成品中的残留量，现对该测定方法进行验证，验证包括方法的专属性、 检测限与定量限、线性、范围、准确度、精密度及耐用性。 3. 标准品、供试品标准品、供试品 3.1 标准品 名称批号来源 3.2 供试品 名称批号来源 4. 风险评估风险评估 按照质量风险管理规程 ，质量控制部和质量管理部共同对分析方法进行了风险评 估，确定了需进行方法确认的项目。具体见下表： 风险 因素 风险可能影响效应 现有控制措 施 SPDRPN 风险 级别 建议采取措施 专属性 不具有 专属性 杂质和主峰不能 有效分离，含量 不准确 无 33327 中 首次使用前， 对专属性进行 验证 定量限 与检测 限 定量限 高 小的杂质不能被 检出 无 33327 中 对该方法的定 量限进行验证。 精密度 精密度 差 不同时间或人员 测定的结果不一 每次测试前进 行系统适用性 33327 中 首次使用前， 对精密度进行 *制药股份有限公司 验证名称XX 产品残留溶剂分析方法验证方案 版本号： 第 1 版 验证编号 YZ-FX-13-001(P) 页码：Page 5 of 12 致测试验证 准确度 回收率 低 含量结果不准确无 33327 中 首次使用前， 对准确度进行 验证 线性 线性不 好 含量结果不准确无 33327 中 首次使用前， 对线性进行验 证 范围范围窄 浓度超过范围后 结果不准确 无 33327 中 首次使用前， 对范围进行验 证 耐用性 耐用性 差 参数微小变化对 结果影响很大 无 33327 中 首次使用前， 对耐用性进行 验证 风险评估人： 评估日期： 5. 验证的可接受标准验证的可接受标准 项目可接受标准 专属性各组分之间分离度不低于 1.5，溶剂无干扰 定量限与检测限LOD&LOQ乙醇0.05% LOD&LOQ乙酸乙酯0.05% LOD&LOQ丙酮0.05% LOD&LOQ四氢呋喃0.0072% LOD&LOQ二氯甲烷0.012% 各溶剂 LOQ 精密度：RSD%15% 线性R20.999 准确度回收率在 70130%范围内 精密度重复性 RSD%15% 中间精密度 RSD%15% 精密度：两组数据平均检测结果的相对偏差20% 范围应至少为定量限浓度到指标的 120% *制药股份有限公司 验证名称XX 产品残留溶剂分析方法验证方案 版本号： 第 1 版 验证编号 YZ-FX-13-001(P) 页码：Page 6 of 12 耐用性评估柱温、流速、色谱柱、溶液放置时间对检测结果的影 响 6. 验证步骤验证步骤 6.1 系统适应性系统适应性 精密称取乙醇 200mg、丙酮 200mg、二氯甲烷 24mg、乙酸乙酯 200mg、四氢呋喃 28.8mg，置于已加入 10ml 二甲基亚砜的 50ml 量瓶中，用二甲基亚砜溶解并稀释至刻度， 作为对照溶液储备液；精密移取对照液储备液 5ml，置于一 100ml 量瓶中，用二甲基亚砜 稀释至刻度；精密移取 5ml，置于 20ml 顶空瓶中，密封。同法配制 6 份，连续顶空进样， 记录色谱图，相邻组份之间的分离度 R 均应不小于 1.5，各组份峰面积的相对标准偏差 (RSDA)均应不大于 10%。 6.2 专属性专属性 a) 空白：精密移取二甲基亚砜 5ml，置于 20ml 顶空瓶中，密封。顶空进样，记录色 谱图，确定二甲基亚砜出峰位置，且溶剂对测定应无干扰。 b) 乙醇定位溶液：取乙醇约 10mg，置于 50ml 量瓶中，用二甲基亚砜溶解并稀释至 刻度 (含乙醇约 200g/ml)；精密移取 5ml，置于 20ml 顶空瓶中，密封。顶空进样，记录 色谱图，确定乙醇出峰位置，并不得有干扰峰，且与二甲基亚砜之间的分离度应不小于 1.5。 c) 丙酮定位溶液：取丙酮约 10mg，置于 50ml 量瓶中，用二甲基亚砜溶解并稀释至 刻度(含丙酮约 200g/ml)；精密移取 5ml，置于 20ml 顶空瓶中，密封。顶空进样，记录 色谱图，确定丙酮出峰位置，并不得有干扰峰，且与二甲基亚砜之间的分离度应不小于 1.5。 d) 二氯甲烷定位溶液：取二氯甲烷约 12mg，置于 50ml 量瓶中，用二甲基亚砜溶解 并稀释至刻度，移取 1.0ml，置于 10ml 量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度(含二氯甲烷约 24g /ml)；精密移取 5ml，置于 20ml 顶空瓶中，密封。顶空进样，记录色谱图，确定二 氯甲烷出峰位置，并不得有干扰峰，且与二甲基亚砜之间的分离度应不小于 1.5。 e) 乙酸乙酯定位溶液：取乙酸乙酯约 10mg，置于 50ml 量瓶中，加二甲基亚砜溶解 并稀释至刻度(含乙酸乙酯约 200g/ml)；精密移取 5ml，置于 20ml 顶空瓶中，密封。顶 空进样，记录色谱图，确定乙酸乙酯出峰位置，并不得有干扰峰，且与二甲基亚砜之间 的分离度应不小于 1.5。 f) 四氢呋喃定位溶液：取四氢呋喃约 14.4mg，置于 50ml 量瓶中，用二甲基亚砜溶 解并稀释至刻度，移取 1.0ml，置于 10ml 量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度(含四氢呋喃 *制药股份有限公司 验证名称XX 产品残留溶剂分析方法验证方案 版本号： 第 1 版 验证编号 YZ-FX-13-001(P) 页码：Page 7 of 12 约 28.8g/ml)；精密移取 5ml，置于 20ml 顶空瓶中，密封。顶空进样，记录色谱图，确 定四氢呋喃出峰位置，并不得有干扰峰，且与二甲基亚砜之间的分离度应不小于 1.5。 i) 对照液：精密称取乙醇 200mg、丙酮 200mg、二氯甲烷 24mg、四氢呋喃 28.8mg、 乙酸乙酯 200mg，置于已加入 10ml 二甲基亚砜的 50ml 量瓶中，用二甲基亚砜溶解并稀 释至刻度；精密移取 5ml，置于一 100ml 量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度；精密移取 5ml，置于 20ml 顶空瓶中，密封。顶空进样，记录色谱图，确认相邻组份之间的分离度 应不小于 1.5。 j) 样品液：取样品约 0.2g，置于 20ml 顶空瓶中，精密加二甲基亚砜 5ml，密封。顶 空进样，记录色谱图，各组份之间的分离度应不小于 1.5。 k) 样品+对照液：取样品约 0.2g，置于 20ml 顶空瓶中，精密加上述对照液 5ml，密 封。顶空进样，记录色谱图，各组份之间的分离度应不小于 1.5。 6.3 定量限与检测限定量限与检测限 检测限（LOD）：取系统适用性项下对照液，用二甲基亚砜分步稀释成一定浓度的 溶液，精密移取 5ml，置于 20ml 顶空瓶中，密封。顶空进样，获得的色谱图中，组份的 峰高约为基线噪音高的 35 倍，则此时溶液的浓度即为组份的检测限。 定量限（LOQ）：取系统适用性项下对照液，用二甲基亚砜分步稀释成一定浓度的 溶液，精密移取 5ml，置于 20ml 顶空瓶中，密封。顶空进样，获得的色谱图中，组份的 峰高约为基线噪音高的 1020 倍，则此时溶液的浓度即为组份的定量限。 LOQ 精密度：根据定量限（LOQ）测试结果确定的 LOQ 浓度，同法配制 6 个 LOQ 溶液进样，各组分峰面积的相对标准偏差应不大于 15%。 乙醇、丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃的定量限均应不大于各组份规定限度值的 10%，二氯 甲烷的定量限应不大于规定限度值的 20%。 LOQ 准确度（以回收率计算）： 空白样品溶液：取本品 0.2g，精密称定，置于 20ml 顶空瓶中，精密加入 5ml 二甲基 亚砜，密封。同法配制 3 个溶液。 对照溶液：取 LOQ 溶液，置于 20ml 顶空瓶中，精密加入 5ml 二甲基亚砜，密封。 同法配制 3 个溶液。 回收率测试溶液：取 LOQ 浓度溶液，加 0.2g 本品，精密称定，置于 20ml 顶空瓶中， 精密加入 5ml 二甲基亚砜，密封。同法配制 3 个溶液。 测试结果记录如下，要求回收率在 70130%之间。回收率符合要求，LOQ 即为报告 限度。如果回收率不符合要求，则要选取合适的浓度重新验证回收率作为报告限度。 *制药股份有限公司 验证名称XX 产品残留溶剂分析方法验证方案 版本号： 第 1 版 验证编号 YZ-FX-13-001(P) 页码：Page 8 of 12 6.4 线性线性 取系统适用性项下对照液储备液一定量，置于 100ml 量瓶中，分别移取 3.0ml，4.0ml，5.0ml，6.0ml 至 100ml 容量瓶中，用二甲亚砜稀释至刻度，制成线性 L2、L3、L4、L5 储备溶液。 L1：精密移取 5mlLOQ 溶液置于 20ml 顶空瓶中，密封。同法配制 3 个溶液，顶空进 样，记录色谱图。 L2L5：精密移取 5ml 线性 L2L5 储备溶液置于 20ml 顶空瓶中，用二甲亚砜稀释至 刻度密封。同法配制 3 个溶液，顶空进样，记录色谱图。 以组份的浓度(g/ml)为横坐标，以组份峰面积为纵坐标计算各组份的线性，范围为 杂质的定量限浓度至 120%杂质限度浓度的相关系数 R2应不小于 0.99，Y 轴截距应在 100%响 应值的 30%以内。 6.5 准确度准确度 a) 溶剂空白：精密移取二甲基亚砜 5ml，置于 20ml 顶空瓶中，密封。 b) 对照液：精密称取乙醇 200mg、丙酮 200mg、二氯甲烷 24mg、乙酸乙酯 200mg、 四氢呋喃 28.8mg，置于已加入 10ml 二甲基亚砜的 50ml 量瓶中，用二甲基亚砜溶解并稀 释至刻度（作为对照液储备液） ；精密移取 5ml，置于一 100ml 量瓶中，用二甲基亚砜稀 释至刻度；精密移取 5ml，置于 20ml 顶空瓶中，密封。同法配制 3 份。 c) 样品空白：取样品 0.200g，精密称定，置于 20ml 顶空瓶中，精密加二甲基亚砜 5ml，密封。同法配制 3 份。 d) 回收率测试液 1：精密移取上述对照液储备液 4ml，置于一 100ml 量瓶中，用二甲 基亚砜稀释至刻度；精密移取 5ml，置于 20ml 顶空瓶中，精密加样品 0.2g，密封。同法 配制 3 份。 （也可以选择 LOQ 准确度测试项下回收率测试溶液及结果） e) 回收率测试液 2：精密移取上述对照液 5ml，置于 20ml 顶空瓶中，精密加样品 0.2g，密封。同法配制 3 份。 f) 回收率测试液 3：精密移取上述对照液储备液 6ml，置于一 100ml 量瓶中，用二甲 基亚砜稀释至刻度；精密移取 5ml，置于 20ml 顶空瓶中，精密加样品 0.2g，密封。同法 配制 3 份。 取溶剂空白进样，记录色谱图；取对照液顶空进样，记录色谱图；取样品空白、回收率 测试液 1、回收率测试液 2、回收率测试液 3 分别顶空进样，记录色谱图，以外标法分别 计算各组份的量，同时计算各组份的回收率，每一个的回收率及平均回收率均应在 70130%范围内，所有回收率的相对标准偏差均应不大于 15%。 *制药股份有限公司 验证名称XX 产品残留溶剂分析方法验证方案 版本号： 第 1 版 验证编号 YZ-FX-13-001(P) 页码：Page 9 of 12 6.6 精密度精密度 a)重复性： 对照液：同系统适应性溶液。 样品液：取本品 0.2g，精密称定，置于 20ml 顶空瓶中，精密加入 5ml 二甲基亚砜， 密封。同法配制 6 份。 顶空进样测试，各溶剂测定结果的相对标准偏差均应不大于 15%。 b) 中间精密度：不同检验人员、不同时间、不同仪器，按重复性项目对照液及样品 配制方法，新配制对照液、样品液，与重复性测试测同一批样品，顶空进样测试，各溶 剂测定结果的相对标准偏差均应不大于 15%。 c) 精密度测试结果：不同检验人员、不同时间测定结果的平均值的相对偏差应不大 于 20%。 6.7 范围范围 根据线性、精密度和准确度确定方法的范围，在该浓度范围内，方法具有良好的精 密度、线性和准确度。范围至少在定量限到质量指标的 120%范围内。 6.8 耐用性耐用性 在其他条件不变的情况下，分别改变溶液放置时间、柱温、流速、色谱柱，取系统 适用性项下对照液和供试品溶液顶空进样，考察对结果的影响。对照品溶液中各组分的 最小分离度不小于 1.5，供试品结果的相对 0h 的偏差不大于 20%。 6.8.1 溶液放置时间 按本方法配制对照溶液和供试品溶液，分别放置 0h,4h,8h,24h，48h，36h 后进样测定。 6.8.2 改变柱温 正常柱温为 40，设置柱温为：35和 45，配制对照液和供试品溶液顶空进样， 考察对照液中各组分的最小分离度和供试品检测结果。 6.8.3 改变流速 正常流速为 3.0ml/min，设置流速为：2.7ml/min 和 3.3ml/min，配制对照液和供试品 溶液顶空进样，考察对照液中各组分的最小分离度和供试品检测结果。 6.8.4 更换相同填料的另一根色谱柱，配制对照液和供试品溶液顶空进样，考察对照液中 各组分的最小分离度和供试品检测结果。 *制药股份有限公司 验证名称XX 产品残留溶剂分析方法验证方案 版本号： 第 1 版 验证编号 YZ-FX-13-001(P) 页码：Page 10 of 12 6.9 样品测定样品测定 应用本方法，对 3 批样品进行测定，样品含量均应能够符合规定。 7.偏差偏差 验证过程中如果出现偏差应及时进行调查和上报，并且采取适当的措施进行处理， 并及时记录。如经调查确定偏差的性质会对验证结果产生实质影响，应确定原因并采取 必要措施后重新进行验证。 8.风险的接收与评审风险的接收与评审 经分析，对上一步判断的风险采取的控制措施，若经检查确认符合要求，则其相应 的风险可降至为可接受风险。否则，需采取进一步的措施降低风险。 9.再验证再验证 发生下列情形之一时，需进行再验证。 （1）原辅料来源、生产工艺发生改变。 （2）检查方法发生改变。 10.确认结果评审和结论确认结果评审和结论 验证小组负责收集各项验证、试验结果记录，根据验证、试验结果起草验证报告， 报验证委员会。 验证委员会负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，确认再验证周期。对验 证结果的评审应包括： 确认试验是否有遗漏？ 确认试验过程中对验证方案有无修改，修改原因、依据以及是否经过批准？ 确认记录是否完整？ 确认试验结果是否符合标准要求？偏差及对偏差说明是否合理？是否需要进一步补 充试验？ 11.更改历史更改历史 12. 附录附录 附录 1 *产品残留溶剂分析方法 版本号生效日期主要变更描述 第 1 版本文档为新订 *制药股份有限公司 验证名称XX 产品残留溶剂分析方法验证方案 版本号： 第 1 版 验证编号 YZ-FX-13-001(P) 页码：Page 11 of 12 附录附录 1 *产品残留溶剂分析方法产品残留溶剂分析方法 1 标准品及试剂 乙醇 分析纯或色谱纯 丙酮分析纯或色谱纯 二氯甲烷分析纯或色谱纯 乙酸乙酯分析纯或色谱纯 四氢呋喃分析纯或色谱纯 二甲基亚砜色谱纯 2 色谱条件 仪器：气相色谱仪(配有顶空进样器)，氢火焰离子化检测器（岛津公司 GC2010 气相 色谱仪，岛津公司 AOC5000 顶空进样器） 。 色谱柱：用6%氰丙基苯基94%二甲基聚硅氧烷聚合物为固定相的石英毛细管柱 (DB-624)，膜厚为3m，柱长30m，内径为0.53mm； 载气为氮气，流速为3ml/分钟。 柱温在40维持10分钟，再以每分钟20的速率升至200并保持2分钟。 进样口温度为140，检测