纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案--2015年版药典-上上2018年

制药有限公司 第10页 共10页纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案起草部门：QC组签名： 日期：审核部门：QC组签名： 日期：部门：质量部签名： 日期：批准质量负责人签名： 日期：质量部颁发本文件根据需要应分发于以下部门：01 质量部下表用于记录修订/变更主要内容及历史。文件编号修订原因修订日期按GMP（2010年修订版）及2015年版中国药典要求新制定目 录1. 概述2. 验证目的和范围3. 组织及职责4. 验证进度计划表5. 验证所需要的仪器设备的确认6. 验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的确认7.验证项目和验证方法7.1试验菌株7.2菌液制备7.3培养基适用性检查7.4计数方法适用性试验（薄膜过滤法）8.偏差与漏项控制9.验证报告会审1. 概述我公司自制纯化水微生物限度检查项目为需氧菌总数检查。参照中国药典2015版四部附录1105：微生物计数法的规定，须对纯化水检查所用的R2A培养基进行适用性试验。通过适用性试验以确认所采用的培养基适用于纯化水的需氧菌检查。本验证方案通过试验菌株的回收率测试，验证R2A琼脂培养基是否适用于本品的需氧菌总数检查。2. 验证目的和范围验证纯化水的需氧菌检查所用R2A培养基的适用性，对其有效性进行评价，保证检验结果的可靠性。本验证方案采用1批按GMP要求组织生产的纯化水，并进行R2A培养基适用性检查。3.组织及职责3.1验证方案和验证报告的起草、审核、批准验证方案由质量部QC组负责起草，由质量部审核，最终由质量负责人批准。验证方案实施完成后，由QC组负责汇总需氧菌检查法验证的结果、撰写报告，由质量部审核，最终由质量负责人批准报告。3.2验证方案的培训验证方案在经质量负责人批准后，由QC组组长对本次验证实施的相关人员组织培训工作，并将该次的培训记录归档。3.3验证方案实施过程中的变更和偏差验证方案实施过程中如有变更和偏差，质量负责人应当组织进行评估并采取相应的控制措施。3.4 验证工作小组成员表姓名部门及职务职 责质量负责人/质量受权人负责验证方案及报告的批准质量部QA组长审核验证方案、审核验证报告并协调工作质量部QC组长负责验证方案审核、实施、汇总报告及培训工作 质量部QC负责验证方案起草、具体实施、报告工作4. 验证进度计划表 本次R2A培养基的适用性试验的计划安排时间是2015年8 月至2015年 9月。5. 验证所需要的仪器设备的确认主要检验仪器设备确认表序号仪器设备名称型 号编号生产厂家1电子天平 2电热恒温水浴锅 3恒温培养箱 4压力蒸汽灭菌锅 5生物安全柜 6微生物限度检查仪 7洁净工作台 检查人/日期： 复核人/日期：6. 验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的确认6.1.试验菌种检查表序号菌种名称代码甘油菌种批号菌种内控缩写来源1铜绿假单胞菌CMCC（B）10104Pa中国食品药品检定研究院2枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501Bs中国食品药品检定研究院检查人/日期： 复核人/日期：6.2试验所需的培养基检查序号名称生产厂家是否通过培养基适用性试验批号01胰酪大豆胨液体培养基 是 否 02胰酪大豆胨琼脂培养基 是 否 03R2A琼脂培养基 是 否 04R2A琼脂对照培养基 是 否 检查人/日期： 复核人/日期：6.3试剂序号名称规格级别生产厂家批号01pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液干粉250g 检查人/日期： 复核人/日期：6.4.试剂及培养基配制pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液（冲洗液）：称取pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液干粉16.09g。加水定容1000mL，微温溶解，滤清，分装至蓝盖试剂瓶，121湿热灭菌20min。胰酪大豆胨液体培养基：取胰酪大豆胨液体培养基29.8g，加1L纯化水，加热助溶，分装至蓝盖试剂瓶，121湿热灭菌20min。胰酪大豆胨琼脂培养基：取本品40g，加1L纯化水，加热助溶，分装至锥形瓶，121湿热灭菌20min。R2A琼脂对照培养基：取本品 4.55g，加300 mL纯化水，加热助溶，分装至锥形瓶，121湿热灭菌20min。 R2A琼脂培养基：取本品18.2g，加1L纯化水，加热助溶，分装至蓝盖试剂瓶，121湿热灭菌20min。7.验证项目和验证方法7.1试验菌种R2A培养基的适用性试验所用的菌株为本实验室-80冰箱保存的铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的甘油菌，均为第2代。7.2菌液制备7.2.1.稀释液的配制pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：称取pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液干粉16.09g。加纯化水定容1000mL；微温溶解，滤清，分装至1000 mL蓝盖试剂瓶中，121湿热灭菌20min。7.2.2.菌液的制备 从-80冰箱取出铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的第2代菌液，分别接种至10ml胰酪大豆胨液体培养基中，3035培养1824小时。同时分别划线接种至胰酪大豆胨琼脂培养基中，3035培养1824小时。菌液制备后若在室温下放置，应在2 小时内使用；若保存在28，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在28，在验证过的贮存期内使用。7.3.培养基适用性检查取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各不大于100 cfu的菌液1ml分别注入90mm无菌平皿中，注入15-20ml温度不超过45的供试R2A琼脂培养基，混匀，凝固，每种试验菌各稀释度制备两个平板，置30-35倒置培养3天，计数；同时，用R2A琼脂对照培养基替代被检R2A琼脂培养基进行上述试验。回收率=供试培养基组/对照培养组X100%计数培养基适用性检查验证记录试验时间 年 月 日 完成时间 年 月 日验证菌株平皿号供试培养基组cfuml对照培养基组cfuml回收率%应50%200%铜绿假单胞菌(培养3天计数)1-2-平均值枯草芽孢杆菌(培养3天计数)1-2-平均值结论复核人 试验人 .7.4接受标准可接受标准为各株试验菌的回收率应在0.52范围内。8.偏差与漏项控制：微生物限度检查方法验证过程中存在和发现的任何偏差与漏项，都应进行详细的记录，并应按公司GMP文件偏差处理规程进行调查与处理。偏差调查与处理的报告和支持文件，应作为此确认方案的附录部分。偏差和漏项记录表偏差和漏项：处理过程：检查人/日期： 复核人/日期： 9.验证报告会审验证报告会审表验证项目名称纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案验证项目负责人 验证起止日期验证报告编号 验证结论：评价和建议：验证报告会审人签名起草部门：质量部QC组签名/日期：审核部门：质量部QC组签名/日期：部门：质量部QA组签名/日期：批准质量负责人签名/日期：验证报告 2015年 8 月 29 日至 年 月 日，验证小组根据批准的微生物限度检查方法验证文件对培养基适用性检查（需氧菌）进行了相关的一系列验证工作，达到了预期效果，滋将有关事项说明如下：1、 验证方案在实施过程中未做修改。2、 验证方案各项性能指标在验证中未作变动，误差在允许范围内。3、 验证过程中结果符合规定要求，记录完整属实。4、 验证结果符合设计要求和GMP原则要求，可以投入使用。5、 片组分或检验条件改变时须重新验证。以上情况，请验证委员会审批！验证小组：年 月 日试验报告审批表验证名称纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性