全自动生化分析仪基本知识与应用

1,南京大学医学院附属鼓楼医院顾光煜,全自动生化分析仪基本知识与工作原理,2,一、自动生化分析仪的分类,根据反应装置：连续流动式、离心式和分立式根据反应介质：液相化学、干式化学根据反应通道：单通道、多通道根据自动化程度：全自动、半自动根据仪器的复杂程度：小型、中型和大型根据分析系统试剂开放程度：封闭系统、开放系统,3,1.连续流动式生化分析仪,比例泵空气分段透析器管道式，携带污染,4,5,2.离心式全自动生化分析仪,几乎“同步分析”随机任选式（早期的必须按项目顺序）比色杯人工清洗？（一次性）,6,3.分立式生化分析仪,目前使用生化分析仪主要此种类型。比色杯袋式仪器可以自动制作比色杯比色杯可以兼作反应杯比色杯不能作流动比色池（半自动）,7,4.干式生化分析仪干片分：扩散层、试剂层、指示剂和支持层。利用“反射光度法”和“差式电位法”检测。以液体样品中的“水”为溶剂。理论基础：KubelkaMunk理论。,8,5.半自动生化分析仪,光源（石英卤素灯）常用“干涉滤光片”分光微量流动比色池。终点法项目通常在“仪器”外孵育，时间和温度的准确性常影响测定结果。,9,例1临床上所指的封闭式全自动生化分析仪主要是A质控物封闭B试剂封闭C环境封闭D仪器封闭E技术人员封闭,10,例2全自动生化分析仪可分为小型、中型、大型，其依据是：A单通道和多通道数量B仪器可测定项目的多少C测定程序可否改变D仪器的复杂程度、功能和单位时间测试数量E是否可以同步分析,11,例3全自动与半自动生化分析仪共同之处为A取样B加试剂混合C检测波长D孵育反应E清洗系统,12,例4干化学式自动生化分析仪所用的光学系统为A分光光度计B原子吸光仪C反射比色计D固定闪烁计数器E免疫比浊计,13,例5关于分立式全自动生化分析仪的比色杯的阐述，错误的是：A比色杯可以是反应杯B比色杯可以自动制作C比色杯可以是流动比色池D比色杯可以是石英玻璃E比色杯可以是硬质塑料,14,二、自动生化分析仪的安装与准备,1.工作环境空间、电源（UPS)、避免直射阳光、环境温度和湿度、电磁辐射、化学品。2.水蒸馏水、去离子水、反渗透水。3.纯水等级：一般二级二级纯水微生物含量：最大每毫升菌落数103。,15,例6临床生化实验室一般采用NCCLS所规定的二级纯水，其微生物菌落（CFU/ml)应低于A1B10C100D1000E100000,16,例7临床生化实验室用水一般采用：A一级水B二级水C三级水D次级水E自来水,17,三、全自动生化分析仪基本结构及工作原理,1.样品系统专用样品杯和直接用采血试管凝块和气泡检出功能自动冲洗功能样品预稀释、后稀释、加倍、标准原液系列稀释等不同的稀释方式。,18,2.试剂系统冷藏功能液面感应及气泡检出双试剂与多试剂试剂瓶的防蒸发与死体积试剂条码,19,3.条形码系统三组成部分：扫描系统、信号整形、译码器黑条白空相间的条码符号光电转换元件常用条码类型：Code39,Code128等,20,4.反应系统4.1反应盘4.2混合装置多用特氟隆不沾涂层的搅拌棒4.3温控装置理想的温度波动应小于0.13种方式：空气浴、水浴、恒温液间接加热强生干化学仪用空气浴恒温,21,5.清洗系统一般先用碱性液冲洗、再用酸性液冲洗、最后用去离子水冲洗。6.管路系统管路系统的老化或长期使用后反应废物的沉积阻塞常造成反应结果的重复性差。,22,7.比色系统7.1光源卤素灯波长300800nm氙灯波长285750nm使用寿命1000h左右，光源能量对340nm影响最大。7.2比色杯常用石英、硬质玻璃、优质塑料光径0.50.7cm。,23,7.3单色器朗伯比尔定律滤光片、棱镜、光栅分光多采用光栅分光多采用后分光测量技术光源比色杯单色光器检测器7.4检测器发光二极管8程序控制系统,24,9.携带污染常规清洗不能完全消除携带污染9.1常见原因共用系统保养不当（污垢、老化）清洗液使用不当排列顺序不合理9.2计算小于0.3%为正常9.3常见组合,25,例8自动生化分析仪比色分析常用的检测器是A固定闪烁计数器B硒电池C镍氢电池D二极管E光电倍增管,26,例9自动生化分析仪的光源能量降低对单色光影响最大的波长是A340nmB405nmC450nmD500nmE630nm,27,例10自动生化分析仪清洗加样针主要为了A提高分析精密度B提高分析准确度C防止交叉污染D提高反应速度E提高分析的灵敏度,28,例11大多数全自动生化分析仪比色杯的光径是A0.50.7cmB0.81.0cmC1.11.9cmD2.03.9cmE4.0cm,29,例12,30,例13,31,例14全自动生化分析仪比色杯的材料常采用A光学玻璃或一般塑料B普通玻璃或硬质塑料C隔热玻璃或普通塑料D石英玻璃或优质塑料E优质塑料或普通玻璃,32,例15目前全自动生化分析仪最常用的光栅分光方式为A前分光B中分光C后分光D前中后分光E前后分光,33,例16干式生化分析仪保持恒温的方式是A空气式恒温器加热B水浴式循环直接加热C恒温液循环间接加热D金属直接加热E反应液直接加热,34,例17全自动生化分析仪的试剂与样品的混合装置类型为A搅拌棒B加温C机械振荡D加样针E加混合液,35,例18某实验室全自动生化分析仪近两天发现部分结果明显不稳定，仪器自检正常，测定过程没有错误报警，如果是交叉污染因素，首先应考虑为A清洗剂的类型是否正确B清洗用水是否符合要求C管路冲洗是否彻底D反应杯是否需更新E用校准品对仪器进行重新校正。,36,例19340nm波长属于A可见光B紫外光C红外光D近红外光E远红外光,37,例20,38,例21,39,四、全自动生化分析仪常用分析技术,1.光谱分析技术单波长、双波长甚至多波长主波长，特有波长；副波长，为消除干扰而设单波长易受溶血、黄疸、脂浊的干扰；双波长可消除上述干扰，减少杂散光、噪音干扰常用双波长比浊340/700nm；Hb340/380；NADH340/380、340/405；ALP405/476；Trinder520/600。,40,1.1波长选择的三个条件待测物质的光吸收最大吸收峰宽而钝常见干扰物在该波长下光吸收最小1.2吸收光谱分析Lambert-Beer定律,41,1.3散射光谱分析散射光谱分析法光线通过溶液混悬颗粒后的光吸收或光散射程度的定律方法。透射比浊法散射比浊法目前，全自动生化分析仪主要采用透射比浊法。,42,2.电化学分析技术是利用物质的电化学性质，测定化学电池的电位、电流或电量的变化的分析方法。基本公式：能斯特（Nernst)方程。测量电极与参比电极K+电极颉氨霉素；Na+玻璃电极；Cl-银氯化银电极；CO2气敏电极,43,例22,44,例23,45,例24,46,例25,47,例26,48,例27,49,例28钠电极属于A晶体电极B气敏电极C玻璃电极D酶电极E膜电极,50,例29很多分析仪都采用双波长或多波长的光路技术，是为了减少A试剂的干扰B样品中黄疸、溶血、脂血的干扰C仪器光源的波动D批间差异E批内差异,51,例30,52,例31,53,例32,54,五、全自动生化分析仪常用测定项目的反应原理,终点分析法连续监测法干化学分析法电化学分析法,55,1.常用分析方法连续监测法的定义终点法定义零级反应期一级反应期,56,2.NAD(P)H系统指示的反应还原型NAD(P)H在340nm有吸收峰；氧化型NAD(P)则没有。,57,2.1利用NAD(P)HNAD，吸光度下降的：ALTASTLD-PUNK+酶法TCO2酶法,58,2.2利用NADNAD(P)H，吸光度升高的：CKCK-MBTBALD-LGlu-HKTBA,59,3.Trinder反应Glu-GOD肌苷肌氨酸氧化酶法尿酸GPO-PAPT-Ch,HDL/LDL-Ch,60,4.苯衍生物指示反应ALPGGTNAG,61,5.免疫透射比浊法型胶原TnIHs-CRP，LP(a)尿微量白蛋白，前白蛋白胱抑素C载脂蛋白,62,6.离子选择电极法K+Na+Cl-TCO2,63,7.常见受溶血影响较大的项目K+LDHCKASTALTMg,64,8.终点法反应的项目Glu-GOD，肌苷肌氨酸氧化酶法，尿酸，TG-GPO-PAP，T-Ch，9.速率法反应的项目ALT，AST，ALP，GGT，TBA，CK,LD，Glu-HK，UN，NAG，,65,9.其他9.1反应底物ALTL丙氨酸-酮戊二酸ALP磷酸苯二钠9.2用全血标本：糖化血红蛋白,66,例33,67,例34,68,例35,69,例36,70,例37,71,例38,72,例39,73,例40,74,例41,75,例42,76,例43,77,例44,78,例45,79,例46,80,例47关于ALT测定中，叙述正确的是AL-丙氨酸与-酮戊二酸为反应底物BNADH在氧化还原反应中起作用C第一步反应中的L-丙氨酸将进入下一步反应D在偶联反应中，生化仪将在455nm处检测吸光度下降速率ELD主要作用于第一步反应,81,例48若遇到溶血标本时，受影响较小的项目是ALDL-CBLDHCCKDASTEALT,82,例49在下列反应中，需要谷氨酸脱氢酶的是：A酶速率法测定尿素B葡萄糖氧化酶法测定C肌苷酶法测定D尿酸酶法测定E胆固醇酶法测定,83,例50血清前白蛋白测定，临床上常用的方法是A溴甲酚绿法B凯氏定氮法C双缩脲法D免疫比浊法E磺柳酸法,84,例51酶法测定甘油三酯常用的方法是A终点法B速率法C免疫比浊法D化学修饰法E固定时间法,85,例52自动生化分析仪中连续监测法的读数方式A在一定的时间范围内连续