流感实验室SOP

流感网络实验室标准操作程序(SOP)文件编制： 文件编号：HZCDC/LG/SOP发布日期：2009年12月15日有效版本：第1版受控状态：受控号：批准人：标准操作程序目录文件编号 文件名称 页码HZCDC/LG/SOP/01实验室管理制度 3HZCDC/LG/SOP/02人员管理与培训制度 5HZCDC/LG/SOP/03 仪器设备管理制度 6HZCDC/LG/SOP/04档案管理制度 8HZCDC/LG/SOP/05标本的采集、运送与保存 10HZCDC/LG/SOP/06 标本的接受、登记和处理 14HZCDC/LG/SOP/07实验室清理与消毒 15HZCDC/LG/SOP/08废弃物消毒处理 17HZCDC/LG/SOP/09个体防护与生物安全 19HZCDC/LG/SOP/10生物安全柜的使用与维护 22HZCDC/LG/SOP/11 离心机的使用与维护 24HZCDC/LG/SOP/12 普通冰箱的使用与维护 26HZCDC/LG/SOP/13 移液器的使用与维护程序 28HZCDC/LG/SOP/14 振荡器的使用与维护 31HZCDC/LG/SOP/15 低温冰柜的使用与维护 32HZCDC/LG/SOP/16 高压灭菌器的使用与维护 34HZCDC/LG/SOP/17 ABI SteponePlusTM Real-Time PCR System的使用与维护 36HZCDC/LG/SOP/18 ABI RT-PCR仪 9700型的使用与维护 40HZCDC/LG/SOP/19 凝胶成像系统的使用与维护 42HZCDC/LG/SOP/20 CO2培养箱的使用与维护 44HZCDC/LG/SOP/21 显微镜的使用与维护 47HZCDC/LG/SOP/22 核酸提取标准操作程序 49HZCDC/LG/SOP/23 Real Time-PCR操作方法 51HZCDC/LG/SOP/24 MDCK细胞培养 56HZCDC/LG/SOP/25 细胞的冻存与复苏 59标 准 操 作 程 序文件编号： HZCDC/LG/SOP/01第 1 页 共 2 页实验室管理制度第 1 版 颁布日期： 2009年12月15日1.目的规范实验室的日常管理。2.范围适用于流感网络实验室。3.责任人实验室所有工作人员。4.任务4.1培训县级疾控中心送检标本的安全采集和运送环节。4.2.每年接受国家流感核酸标本考核工作。4.3对流感散发、爆发病例及稍点医院送检流感咽拭子标本进行PCR检测，并在三个工作日内报告结果，做好标本的登记和送检工作。4.4开展流感病毒毒株细胞分离培养工作。4.5组织开展正常人群流感抗体的免疫水平监测工作。4.6做好流感实验室内仪器的使用记录，并定期检查维护仪器。4.7做好流感实验室内档案管理工作。5.内容5.1 实验室人员档案与设备档案分别保存于实验室及质量科档案柜中，并由专人管理。5.2 实验室工作人员应符合人员管理与培训制度中的要求与规定。5.3 严格按照设备管理制度对所用仪器进行管理。5.4 实验室工作人员应严格按照标本的采集与保存、标本的接收、登记和处理的要求与规定进行实验操作。5.5 实验室工作人员应熟知个体防护与生物安全措施。5.6 实验室工作人员在实验前、实验中和实验后均应严格按照实验室的清理与消毒制度对实验室进行清理与消毒。5.7 实验室工作人员对于流感抗体检测的结果与报告应严格执行保密程序。5.8 实验室工作人员应认真做好实验过程中所涉及的各项记录工作。5.9 实验室工作人员应每半年至一年进行一次健康状况记录。标 准 操 作 程 序文件编号： HZCDC/LG/SOP/02第 1 页 共 2 页人员管理与培训制度第 1 版 颁布日期： 2009年12月15日1.目的保证实验室充分的技术支持，严格实验室人员管理。2.范围适用于流感实验室工作人员。3.责任人科室负责人。4.内容4.1 实验室目前由1名高级卫生技术职称、2名中级卫生技术职称和2名初级卫生技术职称的检验人员，均接受过省疾病预防控制中心的技术培训，并获得合格证书。4.2 科室负责人应了解所有工作人员。在安排工作区域时，要根据人员的工作种类和所涉及的生物材料，对实验室环境做安全检查。4.3 新调入、外来合作、进修、实习的人员在进入实验室之前须经过科室负责人的批准。4.4 对新上岗人员实验室工作的潜在危险，进行安全教育。4.5 在岗工作人员须参加本科室的业务学习每月1-2次。4.6 在岗工作人员每年参加省级以上继续教育学习至少1次。4.7 每年举办科内业务讲座1-2次。4.8 实验室每年发表专业论文或业务总结至少1篇。4.9 执行实验室工作人员年度采咽拭子检测流感抗体和备案制度，工作人员咽拭子标本应长期保留。标 准 操 作 程 序文件编号： HZCDC/LG/SOP/03第 1 页 共 2 页仪器设备管理制度第 1 版 颁布日期： 2009年12月15日1.目的妥善管理仪器设备并保证其良好的运转设备管理制度。2.范围适用于流感网络实验室备案仪器设备。3.责任人科室负责人。4.内容4.1 对于仪器设备的一般情况进行登记，包括：名称、制造商、型号、序号、接收日期、启用日期、目前放置地点、接收状态(全新、改装等)，填写仪器设备一览表。4.2 仪器设备的说明书复印件及校准资料，存放于设备档案文件中，由质量管理科保管。4.3 仪器设备的使用、维修须及时填写仪器使用记录和设备维护记录。4.4 有问题的仪器设备加贴明显的红色停用标识，标识上应有停用日期及原因。可搬动的仪器移至质管科报修，不可移动的设备原地待修，直至修复校验后重新标识。4.5 仪器设备的报废处理：因使用寿命、损坏、故障导致仪器设备不能满足检测需要时，该设备即行报废。由管理人员填写报废申请，科室质量负责人核实，质管科批准后由质量负责人在设备档案中签名注销。4.6 仪器设备实行严格的分区专用。标 准 操 作 程 序文件编号： HZCDC/LG/SOP/04第 1 页 共 2 页档案管理制度第 1 版 颁布日期： 2009年12月15日1.目的妥善管理各种资料。2.范围。凡在流感检测业务管理、技术操作等活动中形成的档案和资料，包括检测样品卡、各类检测原始记录、各类检验报告、仪器使用记录、实验室工作人员健康体检记录及质量申诉意见的函文等，都属于本制度的管理范围。3.责任人适用于流感实验室档案管理员。4.内容 4.1 流感抗体检测实验室要有专人负责妥善保存各种实验记录、感染者档案，不得擅自修改和销毁。严格保密制度，未经省级卫生行政部门许可，不得向无关人员和单位提供任何情况。 4.2 实验室要指定专人负责实验室档案的管理工作，实验室对工作档案要按内容进行编目整理、归档保存。 4.3 每位实验室人员都有责任认真主动做好材料的收集和整理工作，并及时提供给实验室档案管理人。4.4 若实验室撤消或合并，应及时做好工作档案的移交工作，以保持档案的完整性和连续性。5.实验室工作档案内容5.1 实验室规划、建设的各种文件和资料。5.2 实验室各类工作人员的姓名、性别、年龄、职称、专业分工、奖惩、培训等。5.3 实验室培训过程中各种文件和资料,包括:培训的相关书籍及光盘等。5.4 仪器设备的说明书、维修记录、技术档案和开机使用记录及大型设备管理人员名单等。 5.5 实验室工作的各种统计报表。 5.6 上级主管部门下发的实验室建设与管理文件和本实验室制定的规章制度。6.保存6.1要妥善保存检测记录和各种档案，不得擅自修改和销毁。记录保存期不少于10年，国家法律、法规另有规定的，依照有关规定执行，特殊情况需长期保存的另立册存档。6.2 超过保存期的检测资料需销毁时，要列出销毁清单，科长复核、签名报中心质量保证负责人审批后销毁。标 准 操 作 程 序文件编号： HZCDC/LG/SOP/05第 1 页 共 4 页标本的采集、运送和保存第 1 版 颁布日期： 2009年12月15日1.目的正确使用采集、运送与使用的方法，保证采集的标本符合检测条件。2.范围适用于流感网络实验室。3.责任人实验室工作人员。4.程序4.1 生物安全要求 采集疑似人高致病性流感病例和不明原因肺炎病人呼吸道标本时，采集人员需以BSL-3级防护；一般流感样病例，呼吸道标本的采集以BSL-2级防护。具 体参见“生物安全个人防护SOP”。4.2 材料4.2.1 无菌拭子：聚丙烯纤维头的拭子4.2.2 15 mL 离心管4.2.3 常用的采样液配制：常用的上呼吸道采样液有：pH7.47.6 的Hanks或MEM液400mL。加入庆大霉素(50 mg/mL)0.8mL，多粘菌B(250 g/mL)3.2mL。加入抗菌素以后重新调节pH值为7.4，配制好以后，分装每个采样管23mL，-20冻存。 4.2.4 压舌板4.3 实验步骤4.3.1 采集呼吸道标本 呼吸道标本：包括鼻拭子、咽拭子、鼻咽抽提物、鼻洗液、咽漱液。最佳采集时间为发病后的前3天，不超过7天。（1）鼻拭子：采集者左手扶住患者的下颌部，右手持无菌拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。以另一拭子擦拭另侧鼻孔。将拭子头浸入采样液中，在采样液中挤压拭子头部数次，用力折断拭子的尾部，将拭子的尾部弃去。（2）咽拭子：左手用压舌板压住患者的舌头。右手持无菌拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入采样液中，在采样液中挤压拭子头部数次，用力折断拭子的尾部，将拭子的尾部弃去。亦可将鼻、咽拭子收集 于同一采样管中。（3）漱口液：用10mL生理盐水漱喉。漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。然后，用平皿或烧杯收集洗液。（4）鼻洗液：让患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5 mL生理盐水注入一 侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。然后让患者低头使生理盐水流 出，用平皿或烧杯收集洗液。重复此过程洗两侧鼻孔。（5）鼻咽抽取物：常用于采集气管和支气管分泌物。将真空泵与导尿管相 连。将导尿管插入鼻腔与上腭平行，打开真空装置，缓慢做漩涡运动，同样收集另外一个鼻孔。用采样液3mL涮洗导尿管。4.3.2 将采集好的标本注明：编号，标本种类，采集日期。4.3.3 采集好的标本24h内放置 4保存。标 准 操 作 程 序文件编号： HZCDC/LG/SOP/06第 1 页 共 1 页标本的接收、登记和处理第 1版 颁布日期： 2009年12月15日1.目的严格标本接收的查对制度，保证检测结果的准确性。2.范围适用于流感网络实验室。3.责任人实验室工作人员。4.内容4.1 对辖区内的送检标本进行严格的查对和验收，编号前，工作人员应认真查对姓名、性别、年龄、家庭住址、身份证号码、联系方式等并认真填写流感标本接收记录一览表。4.2 对严重污染标本应做记录，需重新采集标本者应正确及时地重新采样，以免延误病人检测的结果报告。4.3 对书写不清楚的申请单，当事者要及时与检验人员联系(可电话)，明确受检者姓名、性别、年龄、登记号码和检验项目等。4.4 所需标本类型为鼻、咽拭子标本放运送液。4.5 下级送检来的标本要与送检单分开放，送检单一定要认真仔细地填写完整，样本要合格并切要达到所需的量。标 准 操 作 程 序文件编号： HZCDC/LG/SOP/07第 1 页 共 2 页实验室清理与消毒第 1 版 颁布日期： 2009年12月15日1.目的避免实验室污染，确保人员健康与结果准确。2.范围流感网络实验室。3.责任人实验室工作人员。4.内容4.1 根据卫生部消毒技术规范的要求和规定，本实验室选用消毒液为有效氯溶液，根据不同的情况使用不同的浓度。4.2 流感检测实验室消毒液配制。4.2.1 实验室消毒液应即用即配，本实验室使用含氯消毒剂。4.2.2 物体表面消毒液：浓度为500mgL。4.2.3 地面消毒液：浓度为1000mgL；4.2.4 生物废弃物消毒液：浓度为10000mgL。4.2.5 物体表面的消毒:桌椅等每天开始工作前用湿布抹擦一次,下班时用500mg/L有效氯溶液抹擦一次。地面用湿拖把拖擦一次，下班时用1000mgL有效氯溶液拖擦。禁止干抹干扫，抹布和拖把等清洁工具各科室专用，不得混用，用后洗净晾干。4.2.6 仪器表面和工作台面用紫外线消毒照射消毒或75酒精消毒。4.2.7 若被明显污染，如标本外溢、溅泼或器皿打破、洒落于表面，应立即用10000mgL有效氯溶液洒于污染表面，并使消毒液浸过污染物表面，保持3060分钟再擦。拖把用后浸于l0000mgL有效氯溶液内至少1小时。4.2.8 若己知被阳性标本污染，应用10000mgL有效氯溶液擦拭，消毒至少30分钟 。4.3 空气消毒：紫外线照射至少30分钟或75酒精喷雾消毒。4.4 实验前对实验室进行至少30分钟的紫外线照射并通风。4.5 实验结束后使用500mgL的有效氯溶液对各区实验台面、地面和进行擦洗。然后打开室内、移动紫外灯照射并打开通风设备通风至少30分钟。标 准 操 作 程 序文件编号： HZCDC/LG/SOP/08第 1 页 共 2 页废弃物消毒处理第 1 版 颁布日期： 2009年12月15日1.目的防止污染废物造成的交叉感染及环境污染。2.范围流感网络实验室检测后的全部污染废物及剩余标本和试剂盒剩余废弃物品。3.责任人实验室工作人员。 4.处理方法4.1 废弃物处置应符合实验室生物安全通用要求（GB 19489-2004）和消毒技术规范（2002年版）。对实验室用过的全部废弃物品，包括剩余血样标本，留样标本分离血清后剩余的血凝块，剩余废弃的试剂盒阳性对照血清，用过的酶标反应板，吸头，一次性隔离衣，手套等置于一次性医源垃圾污物袋中，用HI V专用的全自动高压消毒锅121高压消毒30min后，装袋于焚烧炉中彻底焚烧后填写一次性医疗废物销毁记录。4.2 对实验室环境、台面、地面可用2-5过氧乙酸、次氯酸钠（含有效氯2000-5000mg/L）、75%乙醇和2%戊二醛，保持10-30min，实验用金属器械用70%-75%的乙醇浸泡30min。4.3 对生物安全柜的消毒遵照生物安全柜的使用说明处理。4.4 对实验废液的消毒处理：ELISA法检测中洗板机废液瓶中的废液，加入含氯消毒剂使次氯酸钠含量达到5000mg/L，混匀后放置30min以上，再弃入污水池中。禁止在工作状态下于废液瓶中加入挥发性消毒剂，以免挥发性酸、碱气体吸入机器内腐蚀损坏仪器。标 准 操 作 程 序文件编号： HZCDC/LG/SOP/09第 1 页 共 3 页个体防护与生物安全第1 版 颁布日期： 2009年12月15日1.目的保证实验室和工作人员的安全与健康。2.范围流感网络实验室。3.责任人实验室工作人员。4.内容：4.1 实验室安全4.1.1 每年至少一次对实验室电器设备的接地和极性、线路完整性进行年度检查并建立档案记录。4.1.2 可移动设备应接地或采用更先进的办法防止触电，但全部塑封无法接地的设备除外。新设备在使用前也进行同样检查。4.1.3 实验室应有足够的插座，分面要合理，以减少在插座上接上其它多余的插座和避免拖拉过多的电线。4.1.4 除校准仪器外，仪器不得接电维修。实验室工作人员不得维修实验室电力系统。以上所有工作由单位电工室工作人员执行。4.1.5 按消防部门规定在实验室摆放灭火器并由总务科负责管理，按有效期每5年更换一次。对实验室工作人员进行防火安全训练。遇到失火拨打电话119以求得帮助并开始从失火区撤离。4.1.6 下班时注意关好水电、门窗。4.2 生物防护4.2.1 实验室工作人员要熟悉实验室清理和消毒制度与安全与生物防护制度。4.2.2 采集标本时要注意安全，直接接触病人血液和体液的操作应戴双层乳胶手套。4.2.3 不得在实验室内吃东西、喝饮料、吸烟、化妆与会客。4.2.4 实验室用品不得用于其它用途，不可将私人物品带入实验室。4.2.5 工作时要戴手套、穿工作衣和隔离衣，手套破损应立即丢弃、洗手、更换。4.2.6 不能用戴着手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵、头发等。 4.2.7 尽量避免使用尖锐物品和器具，宜用不易破碎的材料制品。4.2.8 工作完毕，脱去手套后洗手，再脱去工作衣，用肥皂和流动水洗手。4.2.9 按实验室清洁、消毒制度对实验室进行清洁消毒。4.2.10 生物污染废弃物临时存放地点要有明显的标志。5.应急处理5.1 意外：是指发生了未导致个人伤害的危险 。5.1.1 感染性液体溅出或渗漏，首先用纸巾或吸附性材料覆盖，用消毒液(如0.5-1.0%次氯酸钠)喷洒在溅出液周围。然后消毒液洒在吸附材料上10分钟。5.1.2 有潜在传染性的液体或其他体液，弃手套，洗手，换新手套，禁止戴手套接触眼，鼻，粘膜和皮肤，禁止戴手套离开工作区；5.1.3 衣物污染，尽快移开隔离衣以防止感染物触及皮肤并防止进一步扩散。弃保护手套，洗手，更换隔离衣及手套，将已经污染的隔离衣放入高压灭菌器消毒，清理发生污染的地方。如果个人衣物被污染，应立即将污染处浸入75的乙醇中，更换干净的衣物。5.2 事故：是指发生了人身伤害。5.2.1 因为感染性因子的特性，任何一种小的损伤，包括皮肤的破损或刺伤等，都可能与传染性物质接触，导致严重后果。5.2.2 皮肤被针头刺伤，切割伤或标本溅出污染皮肤，用肥皂和水彻底冲洗伤口，尽量挤出损伤处的血液。5.2.3 样品或检测试剂溅入眼内，立即用水连续冲洗。溅入嘴内，先吐出残留的液体后，用水反复漱口。5.2.4 患有皮肤疾患，尤其有皮肤溃烂，破损情况要及时诊治。5.2.5 遇有高危的意外事故发生，除进行局部处理外，同时应立即采取预防措施，包括对其随访，流感检测，休息并暂时离开原岗位三个月，按医嘱服用抗LG辅物进行预防。5.2.6 遇有意外事故，应及时分别以口头和书面形式报告上级部门。5.2.7 遇有意外事故，接触者应在接触当时，接触后六周，三个月，六个月和十二个月各采血检查一次。标 准 操 作 程 序文件编号： HZCDC/LG/SOP/10第 1 页 共 2 页生物安全柜的使用与维护第 1 版 颁布日期： 2009年12月15日1.目的正确使用及维护生物安全柜，保证检测工作的正常进行。2.范围ESCO-Class BSC生物安全柜。3.责任人实验室工作人员。4.内容4.1 先接通电源，打开生物安全柜的电源开关。4.2 将所需的实验用具（如：加液器、盛放吸头的废物缸等）放入生物安全柜内。4.3 将玻璃移门完全关闭后，再按“UVW”键开启紫外灯，实施紫外杀菌操作30分钟后将自动关闭紫外灯，并显示“UV END”提示信息。在杀菌过程中，一旦打开移门或开启荧光灯，系统就会自动关闭紫外灯。4.4 杀菌操作结束后，打开移门至“SASH HEIGHT”安全高度，按“送风机”键启动送风机运行，为了实现工作区域的自净，保持送风十分钟后再开始正式作业。4.5 按“照明”键开启日光灯，将移门高度始终保持在“SASH HEIGHT”安全高度，开始正式作业。4.6 在作业时，若使用插座，务必在“切断备用插座电源”的状态下，将辅助设备的电源插头插入“备用插座”，再按“插座”键接通备用插座电源；使用结束时，必须再次按“插座”键，切断插座电源。所用辅助设备的功耗不允许超过插座的最大负荷（见插座上的标示）。4.7 作业结束时，保持风机运行十分钟后再关闭。按住“送风机”键持续3秒钟以上，可关闭风机。5.注意事项5.1 在杀菌时作业人员必须远离生物安全柜，以免紫外线对人身体造成伤害。5.2 移门高度不要超过“SASH HEIGHT”安全线高度，否则将有气流不能平衡的危险，可能会引起不洁气溶胶外溢，而危害作业者健康。若超出将会自动报警，按“静音”键取消报警声音。5.3 操作结束时，务必先关闭送风机，等待风机停止运转后，再切断生物安全柜的电源。以免造成变频器等器件损坏。标 准 操 作 程 序文件编号： HZCDC/LG/SOP/11第 1 页 共 2 页离心机的使用与维护第 1 版 颁布日期： 2009年12月15日1.目的正确使用及维护，保证检测工作的正常进行2.范围Thermo.Heraeus高速低温离心机3.责任人实验室工作人员4.内容4.1 开箱后，将离心机放置于桌或平面台板上，使离心机底面四只橡胶机脚与桌面接触，均匀受力。4.2 插上电源插座，按下电源开头（开头在离心机背面），接通电源。4.3 按打开键，打开门盖（未接通电源时，右侧面的小孔处用随机工具往里顶，打开门盖）。将离心室泡沫盒内的挂架插入转子体槽内（注意：门未打开，离心室泡沫盒未出离心室前切勿开机，否则将使电机损坏）。离心管加液放入不锈钢管套（离心管试液目测均匀）。离心管必须成偶数对称放置，否则会产生振动和噪声。4.5转速、时间、温度4.5.1 设置转速：按转速键及/键，选择离心机本次工作的转速；根据需要转换转速单位：r/min或g/min。4.5.2 设置时间：按时间键及/，选择离心机本次工作的时间（最长时间为99分钟）。时间为倒计时。4.5.3 设置温度：按温度键及/，选择离心机本次工作的温度。4.5.4 当上述三个步骤完成后，关上离心机盖，按START键，离心机开始运行。4.5.5 在运行中，离心机转速逐渐上升至工作转速；时间显示为倒计时。4.5.6 离心时间倒计时到0或运行途中按STOP键，离心机停止运转。4.5.7 按打开键，打开门盖，取出离心管。4.5.8 关断电源开头，离心机断电。5.注意事项5.1 离心机在运转时，不得移动离心机，不要打开盖。5.2 安放离心机的台面应坚实平整，四只橡胶机脚都应与台面接触和均匀受力，以免产生振动。5.3 离心管加液应称量平衡，若加液差异过大运转时会产生大的振动，此时应停机检查，使加液符合要求，离心试管必须成偶数对称放入。5.4 若运行时有异常响声或有离心试管破裂，会引起较大振动应立即停机处理。5.5 电源必须有接地线。标 准 操 作 程 序文件编号： HZCDC/LG/SOP/12第 1 页 共 2 页普通冰箱的使用与维护第 1 版 颁布日期： 2009年12月15日1.目的正确使用及维护，保证检测工作的正常进行。2.范围BCD-216T XZ型海尔普通冰箱。3.责任人实验室工作人员4.内容4.1 接通电源（220伏），先不要立即放入物品，通常让冰箱空载运行一段时间，待冰箱内部充分冷却下来后，再放入需冷冻或冷藏的物品，正式启用冰箱。4.2 选择冰箱的工作方式：4.2.1 人工智慧方式：如无特殊需求，建议使用此方式。按一下人工智慧按键，人工智慧指示灯亮起，此时冰箱自动工作。4.2.2 人为调节方式：可以根据存储物品的需要进行速冻，软冷冻保鲜室及冷藏室温度的设定与调节。4.2.3取放物品时动作要快，不要长时间开着门，开关门时的动作要轻。5.注意事项5.1 温度值设定改变时，箱内温度需经过一段时间后才能达到平衡。且这段时间的长短，取决于温度设定值改变的大小、周围环境温度的高低、开门频次及箱内存放物品的多少等。5.2 不要将过热的物口放入冰箱内，等冷却至室温后，再放入冰箱。5.3 一定要保持出水口畅通，使化霜水通畅地经此处流出，堵塞时，请使用附件中的透孔销进行疏通。5.4 定时除霜，每年至少两次。除霜时，切断电源，切记不可使用机械工具或其它方式进行除霜，以免损坏冰霜。5.5 冰霜启用后，一般情况下不要停用冰箱，以免影响冰箱使用寿命。如要停机，拔下电源后，至少保持间隔五分钟，才能再次插电。标 准 操 作 程 序文件编号： HZCDC/LG/SOP/13第 1 页 共 3 页移液器的使用与维护第 1版 颁布日期： 2009年12月15日1.目的正确使用及维护移液器，保证检测工作的正常进行。2.范围各种型号的移液器。3.责任人实验室工作人员。4.内容4.1 根据所需取液量选择相应的移液器，可调式移液器应在允许容量范围内调节。4.2 首先选择一支合适的吸头安放在移液器套筒上。使用大体积移液器(如5000l以上)时必须在套筒上加插一过滤芯，稍加扭转地压紧吸头使之与套筒间无空气间隙。未装吸头的移液器绝不可用来吸取任何液体。4.3 把按钮压至第一停点。垂直握持移液器，使吸头浸入液样中，浸入液体深度视型号而定。4.4 缓慢、平稳地松开按钮，吸液样。等一秒钟，然后将吸头提离液面。用一次性吸水纸抹去吸头外面可能附着的液滴。小心勿触及吸头口。4.5 将吸头贴到容器内壁并保持lO-40度倾斜。4.6 放液4.6.1 平稳地把按钮压到第一停点。等一秒钟后把按钮压到第二停点以排出剩余液体。4.6.2 压住按钮，同时提起移液器，使吸头贴容器壁擦过。4.6.3 按吸头弹射器除去吸头。4.6.4 松开按钮。4.7 当装上一个新吸头(或改变吸取的容量值)时应预洗吸头，先吸入一次液样并将之排回原容器中。预洗新吸头能有效提高移液的精确度和重现性。这是因为第一次吸取的液体会在吸头内壁形成液膜，导致计量误差。而周一吸头在连续操作时液膜相对保持不变，故第二次吸液时误差即可消除。4.8 排放致密或粘稠液体时，宜在第一停点多等一两秒钟再压到第二停点。5.注意事项5.1 在取液前所取液体应在室温（15-25）平衡：若吸液温度与室温有异时将吸头预洗多次再用。注意移液温度不得超过70。5.2 吸头浸入液体深度要合适，吸液过程尽量保持不变。5.3 在吸取液体时应缓慢匀速吸取，避免液体溅到移液器头上。打出液体后不应松开按钮，将吸头压掉后再将拇指松开，避免液体回吸。5.4 在调整取液量的旋钮时，不要用力过猛，并注意计数器显示的数值不要超过其可调范围。5.5 连续可调式移液器在取样移液过程中应注意吸头不能触及其它物品，以免被污染。吸头盒(架子)、废液瓶、所取试剂及移液的标本管应摆放合理，以方便操作过程、避免污染为原则。5.6 改吸不同液体、标本或试剂前要换新吸头；发现吸头内有残液时要换新吸头。5.7 新吸头使用前要预洗。5.8 吸头内有液体时不可将移液器平放、倒转，以防液体进入移液器套筒内。5.9 连续可调式移液器在使用完毕后应置于移液器架上，远离潮湿及腐蚀性物质。标 准 操 作 程 序文件编号： HZCDC/LG/SOP/15第 1 页 共 1 页振荡器的使用与维护第 1 版 颁布日期： 2009年12月15日1.目的正确使用及维护振荡器，保证检测工作的正常进行2.范围其林贝尔VDRTEX-5微量振荡器3.责任人实验室工作人员4.内容4.1 微量振荡器应置于坚固的水平台上。4.2 打开电源。4.3 将标本管垂直或略为倾斜地放置在振荡盘上，开机振荡数秒或数分钟直至标本完全混匀后，关机。4.4 切忌将标本管平躺或倒转振荡，以免管内液体渗出。4.5 保持振荡器清洁、干燥。4.6 使用完毕后，关上电源。5.注意事项5.1 仪器备有熔丝保险装置，在超载时能自动断路，只需要更换熔丝管，即可正常运转。5.2 仪器可在8小时内连续工作。5.3 仪器必须防潮，妥善保管。标 准 操 作 程 序文件编号： HZCDC/LG/SOP/15第 1 页 共 2 页低温冰箱的使用与维护第 2 版 第 1 次修改颁布日期： 2007年11月15日1.目的正确使用及维护DW-40L262海尔低温保存箱，保证检测工作的正常进行。2.范围DW-40L262海尔低温保存箱。3.责任人实验室工作人员。4.内容4.1 将低温冰柜放平后，接通电源（220伏），先不要立即放入物品，按速冻键，让保存箱空载运行一段时间，待冰柜内部充分冷却下来后，正式启用保存箱。4.2 按/，设置温度，一般置于40。4.3 取放物品时动作要快，不要长时间开着门，开关门时的动作要轻。5.注意事项5.1 不要放入易燃物品。5.2 不要将过热的物品放入保存向内、内，等冷却至室温后，再放入冰柜。5.3 定时除霜，每年至少两次。除霜时，切断电源，切记不可使用机械工具或其它方式进行除霜，以免损坏冰柜。5.4 保存箱启用后，一般情况下不要停用冰柜，以免影响保存箱使用寿命。如要停机，拔下电源后，至少保持间隔五分钟，才能再次插电。标 准 操 作 程 序文件编号： HZCDC/LG/SOP/16第 1 页 共 2 页高压灭菌器的使用与维护第 1 版 颁布日期： 2009年12月15日1.目的杜绝医源性污染 2.范围流感筛查实验室3.责任人流感筛查实验室工作人员4.内4.1 消毒准备：先将容器内的消毒桶取出，把待消毒物品放置于桶中有孔隔板上，在容器内加入67厘米深清水，(约45升，为避免电热器产生水垢，最好使用蒸馏水)，将桶放入器内准备消毒。消毒物品在放置时，应使其之间留有一定间隙，不可堆压过紧，以免妨碍蒸汽穿透。4.2 器盖开闭：器盖合上时，必须先将器盖背面之放汽软管插入消毒桶内之管架中，然后将器身周围六个锁紧螺栓扳起旋紧于器盖上，在旋紧螺旋栓时，必须对面平均旋转，方能使器盖与器身密闭而不漏汽，开启时，须将锁紧螺栓全部松开，即可将盖提起。4.3 加热方法：准备工作完毕后，将电源插头插入消毒器底座内并接通电源，加热开始后，使放汽阀手柄直立放置，以便将器内冷空气排出，待放汽阀因水沸而冒出一定量蒸汽时，即可将手柄扳平，器内压力随即逐渐升高，当压力达到消毒物所需压力时，为消毒开始时间。5.注意事项如压力超过1.65公斤力厘米时，必须立即切断电源，(如不用电加热时，应将消毒器撤离热源。并将放汽阀手柄竖起放汽，使压力降到消毒物所需压力为止)。6.消毒时间6.1 普通敷料，如果不堆压过紧，维持在1.4公斤力厘米2以上压力，一般消毒时间采用20分钟。金属器械约12分钟即可。6.2 干燥处理：消毒完毕后，应立即切断电源，将放汽阀手柄直立竖起，待器内蒸汽放尽，压力表指针降至“0位后，立即开启器盖，将消毒物品全部取出，并将其摊开，从增进消毒后之干燥程度，切不可将其闷置于器内，否则消毒物品必将回潮。标 准 操 作 程 序文件编号： HZCDC/LG/SOP/17第 1 页 共 4 页ABI SteponePlusTM Real-Time PCR System的使用与维护 第 1 版 颁布日期： 2009年12月15日1.目的 确保ABI SteponePlusTM Real-Time PCR System正常运转，提高检测结果准确率。2.范围ABI SteponePlusTM Real-Time PCR System3.责任人流感网络实验室工作人员4.内容4.1 操作步骤1.开机：先打开计算机；再打开SteponePlusTM Real-Time PCR System仪器；再打开计算机上Stepone软件；2.打开软件后，点击“Advanced Setup”;3.进入界面后，在“Experiment Name”下命名本次实验名1)“Which instrument are you using to run the experiment?”选项下，选“SteponePlusTM Instrument(96 wells)”;2)“What type of experiment do you want to set up?”选项下，选“Quantitation-Standard Curve”；3)“Which reagents do you want to use to detect the target sequence?”选项下，选“TaqMan Reagents”；4)“What ramp speed do you want to use in the instrument run?”选项下，选“Standard(2 hours to complete a run)”.4.回到左边“Setup”选项下，点击“Plate Setup”；5.在“Define Targets and samples”界面下：1) 在“Define Targets”选项中，点击“Add New Target”添加新Target，根据实验需要编辑靶基因名称；（如，甲型H1N1流感病毒核酸检测：Target 1swflua1; Target 2flua; Target 3swh1; Target 4rfp）2)“Reporter”选项下：均选“FAM”；3)“Quencher”选项下：均选“None”；4) 在“Define samples”选项下，点击“Add New Sample”，根据本次实验的样本数添加，根据赝本名称编辑名称;（如，本次实验2个样本，Sample 11, Sample 22）6.再点击“Assign Targets and Samples”；在此界面下，设置“View Plate Layout”, “View Plate Layout”下的各反应孔与SteponePlusTM Real-Time PCR System仪器中的96孔反应板是对应的。如，B3孔（纵向 B，横向 3）设置：先点击B3孔：再1) 在“Assign Target to the selected wells”中选择靶基因（根据个人设计的八连管中的靶基因的反应体系设置，如B3孔设置的是“swflua1”基因，则点击“swflua1”前的“”选定；若为阳性对照孔，再点击swflua1后的“S”，阴性对照，点击“N”）；其他基因设置依次类推；2) 在“Assign Sample(s) to the selected wells”选项下：选择样品。（如：B3孔中样品编号为“1”，点击编号为1的样品前的“”选定，其他的样本设置依次类推）3) 在“Select the dge to use as the passive reference”选项中，选择“None”。7.回到左边“Setup”下，点击“Run Method”；1) 在“Reaction Volume Per well” 中，选择反应体系的量。如，甲型H1N1流感核酸检测体系为25L。2) 设置反应温度。按照界面所示，根据试剂盒说明书，设置反应温度与时间。单击上方温度设置可直接修改温度；下方为时间，如02：00为2Min，00：10为10s。3) 界面中“Holding Stage”为2个反应温度，该阶段如需更多温度：先点击“Holding Stage”下，任意“Step”，再点击“Add Step”即可增加一个“Step”。以后的个阶段如需增加温度与此相同。4) 如需增加一个“Stage”，点击“Add Stage”选项下，“Cycling”即可。5) 根据试剂盒说明，修改各阶段循环数，在“Number of Cycles”下修改循环数。6) 根据试剂盒说明书，选择开始采集荧光的“Step”，“Data Collection On”为开始；“Data Collection Off”为关闭。8.所有项目设置完毕后，点击右上角“START RUN”,根据提示将该次反应结果保存到指定文件夹即可。9.运行开始后，自动计算扩增所需时间。10.全程扩增约需2h；扩增结束后，电脑上的Stepone软件自动分析结果；可直接看到扩增曲线。在分析结果时，Ct值结合扩增曲线分析。如，甲型H1N1流感病毒核酸检测（北京金豪试剂盒）阳性对照Ct30有意义；待测样品CtCt37则重新检测。甲型H1N1阳性结果的判断结合试剂盒说明书判断。11.分析结果完毕后，先关闭Stepone软件，再关闭S